抗酸染色联合PAS染色和六胺银染色在感染性疾病病理学实验教学中的应用

为配合医学整合课程体系改革,结合临床病理诊断常用的感染性疾病的辅助诊断方法,将抗酸染色、高碘酸-Schiff(periodic acid-Schiff,PAS)染色和六胺银染色阳性病例切片引入病理学感染性疾病章节的实验教学,显示出病变组织致病微生物。通过对不同班级进行问卷调研,绝大多数同学认可特殊染色在感染性疾病章节中的应用,认为不仅丰富了课堂内容,学习了结核杆菌和真菌在病变组织中的形态学特征及其导致的组织病理变化,而且加深了对感染性疾病理论知识的理解,深刻认识到病理学研究内容除了疾病的病理变化之外,还要探讨疾病发生的病因以及好发部位。同时,这些增加的特殊染色切片改变了本章节实验教学切片普通光学显微镜下色彩的单调性——单一的“红-蓝”色调,丰富了镜下色彩,提高了学生的学习兴趣,活跃了课堂气氛。

南宁3个油梨品种开花物候期与花粉活力分析

为进一步了解油梨(Persea americana)开花物候期特征和不同油梨品种花粉活力的差异,以‘哈斯’('Hass')、‘平克顿’('Pinkerton')和‘富尔特’('Fuerte')3个油梨品种为试验材料,观察3个品种在南宁地区的开花物候期,并采用醋酸洋红染色法和TTC法和对3个品种的花粉活力进行测定。结果表明,在南宁地区,3个油梨品种的开花物候期集中在1月中旬—3月下旬,花期为26~37天;‘富尔特’开花最早,‘平克顿’次之,‘哈斯’最晚;3个品种单花开放和闭合的时间存在差异。采用醋酸洋红染色法时,3个品种的平均花粉活力为75.70%~87.07%,均较高;‘哈斯’和‘富尔特’的平均花粉活力均显著高于‘平克顿’。采用TTC法时,3个品种的平均花粉活力为50.22%~55.33%,均较低,且差异不显著。采用两种方法测定花粉活力,‘哈斯’的平均花粉活力均较高。研究结果可为南宁地区油梨种植品种配置和杂交育种等提供参考。

真菌六胺银染色技术的优化

目的探索真菌六胺银染色的优化方案,寻求染色效果佳且环保简便的染色试剂。方法选取已知真菌感染的阳性病理组织,分别制作成蜡块,通过对比试验,比较不同氧化剂、六胺银染液不同配制方法、不同衬染试剂对六胺银染色质量的影响。结果真菌感染组织切片使用2%高碘酸水溶液氧化,染色步骤较使用三氧化铬溶液氧化简便,且三氧化铬为高毒致癌物,高碘酸毒性较低,故选择2%高碘酸溶液作为氧化剂更优;六胺银改良配制重复利用法配制六胺银液较传统配制法简便,对染液的利用率高,可以重复回收使用,较节约成本;1%亮绿染液与苏木素染液均是教材推荐的衬染剂,但亮绿染液的染色效果显著优于苏木素染液。结论真菌感染组织切片使用2%高碘酸水溶液作为氧化剂、六胺银改良配制重复利用法配制的六胺银液染色、1%亮绿染液衬染为较佳方案。

某特高拱坝混凝土应力应变特征研究

坝体应力应变监测是坝体蓄水期重要的监测项目,但其埋设的过程中经常存在监测数据缺失等问题,因此开展基于坝体实测数据,建立拱坝-地基有限元模型,对数据进行数据插补,并利用QH3D进行可视化研究.同时利用三维有限元模型计算了西南某特高拱坝的坝体应力应变分布.结果表明:利用坝基压应力计与转换后的应变计结果进行对比验证,在坝踵、坝轴、坝趾二者应力在蓄水前应力相差0.02、0.78、0.09 MPa,在蓄水后二者相差0.14、0.26、0.07 MPa,在坝踵和坝趾处拟合较好;随着上游水位逐渐抬升,拱坝坝踵处应力逐渐减小,坝趾处应力逐渐增大,在上游面水压作用下,应力基本在2 MPa以内,安全裕度较大.

马尔尼菲青霉菌感染病例报告

目的 探讨马尔尼菲青霉菌的鉴定及临床表现 ,为早期诊断、治疗提供经验 ,降低死亡率。方法 取淋巴结穿刺液、血液进行真菌培养鉴定。结果 氢氧化钠涂片和革兰染色能检出马尔尼菲青霉菌所特有的孢子。结论 氢氧化钠涂片和革兰染色能早期发现真菌孢子 ,是一种快速、可行的方法 ,此外 ,组织病理学也可作为诊断马尔尼菲青霉病的一种很重要的方法 ,但需做过碘酸雪夫染色与荚膜组织胞浆菌病作鉴别。

甘薯可溶性蛋白的分离提取及特性研究

通过调节pH值和离心分离的方法,从″玉丰″甘薯汁液中快速地分离提取出可溶性甘薯蛋白(Ipomoein),然后应用生物化学方法,对冷冻干燥的甘薯蛋白粉末进行了分析。结果表明:随着pH值的增加,离心后得到的沉淀率逐渐降低。当pH值为4时,获得的最大沉淀率为7.8%,而此时上清中可溶性蛋白的含量降至最小,为2.9mg/mL。当pH值为4和4.5时,未经透析的沉淀悬浮液在冷冻干燥后,所含的可溶性蛋白分别为41.5%和45.5%;经过透析,粉末中的可溶性蛋白的含量明显增加,分别达到了58.9%和69.0%。此外,与透析前相比,透析后的可溶性甘薯蛋白呈现出了多孔构造。在非还原条件下,电泳显示出甘薯可溶性蛋白存在着三种不同的分子形式:22kDa,31kDa及50kDa;但在还原条件下,只显示出25kDa一种蛋白分子形式,说明这三种蛋白质分子之间是通过S-S联结而成的。然而,PAS染色实验未能显示它们是糖蛋白。

PAS、AB染色法在软骨蛋白黏多糖检测中的运用

[目的 ] 探讨过碘酸雪夫氏反应PAS染色 (PeriodicAcidSchiff)及阿利辛兰AB染色 (AlcianBlue)组织化学分析法在检测软骨组织蛋白黏多糖含量中的运用价值。 [方法 ] 以原发性退行性骨关节炎动物模型的软骨为检测标本 ,分别采用PAS和AB染色法 ,观察软骨组织中蛋白黏多糖的含量。 [结果 ] PAS染色法中软骨组织基质中的中性黏多糖呈紫红色 ,软骨细胞内为无色。AB法中软骨细胞周围的酸性黏多糖呈深蓝色 ,基质呈淡蓝色。此外 ,随着动物模型关节炎程度的不断加剧 ,即软骨组织中蛋白黏多糖丢失的不断增加 ,标本中的紫红色和深蓝色也相应减退 ,直至消失。 [结论 ] PAS染色法和AB染色法能清楚地区分软骨基质中的中性黏多糖和细胞囊内的酸性黏多糖 ,并能对它们的改变进行量化分析。可作为软骨组织中黏多糖检测的有效方法。

肺泡蛋白沉积症的临床研究

目的探讨肺泡蛋白沉积症(PAP)的临床特点、确诊方法和治疗效果。方法对7例经病理证实的PAP患者病史进行回顾性分析,观察支气管肺泡灌洗(BAL)和全肺灌洗前后症状、体征、影像学等的改变。结果PAP的临床表现有反复咳嗽、咳痰,进行性呼吸困难,慢性呼吸功能衰竭以及与临床症状不相称的影像学表现。BAL和全肺灌洗后PaO2显著提高(P<0.05),肺功能虽然有所改善,但无统计学意义(P>0.05)。大部分临床症状和X线表现有所改善。结论X线影像和CT扫描有助于早期诊断PAP,肺组织活检仍是确诊PAP的最可靠手段,支气管肺泡灌洗液的过碘酸雪夫染色阳性可作为确认PAP的重要依据。BAL和全肺灌洗能够有效地改善临床症状和血气交换功能。

大米蛋白水解机制研究——Ⅲ酶水解对大米蛋白-糖结合特性的影响

凝胶色谱洗脱组分分析和β-消去反应结果表明,酶水解所溶出的大米蛋白与糖分子仍以N-糖肽键形式连接。红外光谱分析显示酶解后可溶性蛋白和残余物蛋白中均含有糖组分。SDS-PAGE分离和Schiff试剂染色结果表明,13ku亚基是能抵抗碱性蛋白酶水解的糖蛋白。

薄型子宫内膜小鼠模型的建立及初步鉴定

目的探讨宫腔注射95%乙醇制作薄型子宫内膜小鼠模型的可行性。方法雌性C57BL/6J小鼠30只,性成熟未交配,动情期规律。随机分为实验组、对照组、空白对照组,每组10只。实验组宫腔注射95%乙醇并滞留2 min进行损伤,对照组宫腔注射生理盐水,注射量和滞留时间与实验组相同,空白组进行开腹缝合手术但不对宫腔进行任何处理。造模结束后第3个动情期处死小鼠,取子宫样本进行外观、子宫内膜厚度和HE染色等观察分析。结果宫腔注射95%乙醇后小鼠子宫迅速脱水,发白,失去弹性。3个动情期后子宫粗细不均,局部有出血点,红白相间。子宫内膜厚度变薄。HE染色后发现实验组子宫内膜层明显变薄,宫腔隙增大;腺体数量减少,内膜上皮及腺上皮细胞扁平化,局部血管稀疏。结论宫腔注射95%乙醇形成的薄型子宫模型符合预期,可用于薄型子宫形成机制、修复等研究,是一种较理想的薄型子宫内膜动物模型。

口腔鳞状细胞癌中血管生成拟态的研究

目的:探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)中是否存在血管生成拟态(VM),观察其组织形态学特征、领域分布情况,分析其形成规律,并进一步阐述VM存在的临床意义。方法:筛选106例OSCC石蜡标本,进行CD34免疫组化染色结合过碘酸雪夫氏反应(PAS反应)双重染色检测OSCC中是否存在VM。结果:在106例OSCC患者发现15.09%(16/106)存在VM。VM与患者性别、年龄、淋巴结转移无关,与肿瘤组织分化程度有关,有VM组的OS-CC分化程度低于无VM组OSCC(χ2/Z=2.0340,P<0.05),差异有统计学意义。结论:OSCC中存在VM,恶性度越高OSCC形成拟态的能力越强。血管生成拟态参与口腔鳞状细胞癌血液供给,起到"替代供养器"的作用。

异硫氰酸荧光素染色在真菌性角膜炎中的应用

目的:寻找真菌性角膜炎组织切片快速、准确、方便操作的特殊染色方式。方法:采用经真菌培养均为阳性的真菌性角膜炎患者的角膜标本38例,常规固定脱水透明浸蜡,进行4μm石蜡切片,脱蜡至水,选用异硫氰酸荧光素(FITC)荧光法和过碘酸雪夫氏染色法(PAS)进行染色对比。结果:异硫氰酸荧光素法检测阳性率为97.4%(37/38),过碘酸雪夫氏染色法检测阳性率为86.8%(33/38)。结果比较有统计学差异(P<0.001)。结论:异硫氰酸荧光素法镜检真菌性角膜炎优于过碘酸雪夫氏染色法镜检。

脂褐素三种染色方法比较

目的比较显示脂褐素的3种特殊染色方法,探讨哪一种方法更适合应用于临床病理诊断。方法分别采用三氯化铁-铁氰化钾、醛品红和PAS 3种特殊染色方法,检测HE染色石蜡切片中呈浅棕色或金黄色的颗粒是否为脂褐素。三氯化铁-铁氰化钾染色的脂褐素呈蓝黑色颗粒,醛品红染色的脂褐素呈深紫色颗粒,PAS染色的脂褐素呈红色颗粒。结果通过3种染色结果的比较,发现三氯化铁-铁氰化钾染色对比清晰,定位准。结论三氯化铁-铁氰化钾、醛品红、PAS三种染色均可用于显示脂褐素,但三氯化铁铁氰化钾染色方法优于其他两种。

高碘酸钾氧化瑞士色素催化动力学光度法测定微量钛(Ⅳ)

基于硫酸介质中，Ti（Ⅳ）对KIO4氧化瑞士色素（曙红亚甲基蓝）反应的催化作用建立了测定微量钛的动力学光度法新体系。考察了酸度、反应物浓度、反应时间、反应温度、共存离子等因素对反应的影响，确定了测定的适宜条件。测得非催化反应和催化反应的活化能分别为70．65kJ／moL和31．59kJ／moL，方法的线性范围为0．08～1．0μg／mLTi（Ⅳ），检出限为0．056μg／mL。将该方法用于硅铁中微量钛的测定，回收率在98．2％～104．7％之间。

球旁细胞光学显微镜下4种染色法结果观察

目的探讨显示小鼠球旁细胞的适宜染色方法,更好地为教学和科研服务。方法取20只小鼠肾组织做石蜡切片,随机分为4组,分别用HE染色、高碘酸-Schiff氏反应染色、改良结晶紫染色和免疫组织化学染色。结果 HE染色和高碘酸-Schiff氏反应染色不能显示肾球旁细胞;改良结晶紫染色和免疫组织化学均能较好地显示肾球旁细胞(胞质内有特征性的被染色的分泌颗粒)。结论改良结晶紫染色和免疫组织化学染色对球旁细胞有较好的染色效果,但改良的结晶紫染色更为简便、经济、稳定。

星形细胞瘤不同区域血管生成模式的组织形态学观察

目的通过对星形细胞瘤水肿区和瘤体区的组织学观察,探讨其不同区域的血管生成,并观察拟态血管的形态学基础。方法对照磁共振精确留取51例星形细胞瘤水肿区和瘤体区组织后行CD34-PAS双染色。结果在水肿区发现CD34-PAS双染呈CD34、PAS均阳性的管道样结构,均为血管或微血管。在4例胶质母细胞瘤瘤体区发现除了占绝大多数的CD34、PAS均为阳性的血管或微血管外,还有:(1)拟态血管(PAS阳性且CD34阴性的物质形成的管状结构,其两侧有瘤细胞排列,内含红细胞);(2)PAS阳性且CD34阴性的物质形成内含红细胞的管状结构,其两侧无明显细胞排列;(3)PAS阳性和部分CD34阳性的血管或微血管;(4)PAS阳性且CD34阴性的血管或微血管。结论大部分星形细胞瘤水肿区和瘤体区血管生成模式仍然以血管或微血管形式存在,而一些高度恶性的星形细胞瘤瘤体区出现的拟态血管可能是血管生成不良的表现。

慢性炎症介导的基底膜改变在食管上皮癌变中的作用

背景与目的:基底膜对于食管上皮的分化、增殖和极性具有调节作用,其完整性的改变在上皮癌变过程中具有重要意义。本实验着重研究在食管上皮癌变过程中基底膜改变与上皮增殖的关系,探讨慢性炎症引起的基底膜改变在食管癌发生中的作用及可能机制。方法:采用过碘酸-雪夫氏(periodicacide-chiffstain,PAS)特殊染色观察200例食管癌手术标本癌旁组织、10例癌组织基底膜变化形态学类型与上皮炎症分数和增生类型的关系,对其中的51例基底膜变化典型标本进行层粘连蛋白(laminin,LN)、增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)、Ki-67免疫组织化学染色,观察LN改变与上皮细胞增殖变化的关系。结果:单纯增生、非典型增生、原位癌上皮和浸润癌基底膜可出现点状缺失、片状缺失、带状缺失、分支增厚等不同类型的形态学改变,基底膜的改变与食管上皮炎症分数具有相关性(rs=0.795,P<0.05);基底膜改变区邻近上皮细胞高表达PCNA、Ki-67(P<0.01)。结论:食管慢性炎症反应引起的基底膜改变与食管上皮细胞异常增生相关。

糖蛋白PAGE分离后的糖基显色法

鸡卵清蛋白通过SDS-PAGE分离后,用过碘酸-希夫(PAS)显色法可以使卵清蛋白显红色,而用糖苷酶去除卵清蛋白的糖基可以去除相应的红色。考马斯亮兰染色结果显示,去糖基后的卵清蛋白分子量略有减小。可见,PAS可方便地使糖蛋白呈现红色。

棒曲霉素对KM小鼠肾脏的毒性效应

该研究以KM小鼠作为实验动物,研究2.5、5.0、7.5、10、15μmol/L五个浓度梯度下棒曲霉素对小鼠体重、肾脏系数等的影响,并通过各项肾脏切片染色试验验证PAT对肾脏的毒性损伤。其中PAT浓度对体重增长率基本无影响,两者之间几乎无相关关系;而随着PAT浓度增大,肾脏系数有逐渐增大的趋势,其中7.5μmol/L和10μmol/L PAT处理的差异显著(p<0.05);随着PAT浓度增加,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色后可观察到大片细胞基质和胞外基质,蓝紫色细胞核逐渐减少且细胞核密度逐渐降低,此外PAT浓度较高时出现了长条状空白;Masson染色后肾小球发生明显的纤维硬化情况,且胞间充血;过碘酸雪夫(Periodic Acid-Schiff,PAS)染色后出现了少量糖原,可知糖原没有被正常降解。因此,PAT浓度的增加会导致核密度降低、肾脏细胞皱缩、胶原纤维增加、糖原分解被抑制等问题,从而对KM小鼠肾脏造成严重损伤。研究结果将为进一步研究棒曲霉素对肾脏的损伤提供理论支持。

声带鳞状细胞癌早期改变的病理学观察

目的探讨声带鳞状细胞癌早期病理学的特点,提高病理诊断水平。方法总结89例声带鳞状细胞癌早期改变病例的病理资料,对其石蜡切片进行HE染色、PAS染色及p53、Ki-67免疫组化染色;以59例声带角化症(分为单纯增生组40例和异型增生组19例)和30例声带浸润癌(浸润深度>3mm的癌)作为对照。结果在HE染色下,声带鳞状细胞癌的早期改变可区分为两种类型:Ⅰ型为上皮全层癌变型,占67.4%(60/89);Ⅱ型为上皮基底层及副基底层癌变型,占32.6%(29/89),又可分为Ⅱa和Ⅱb两个亚型。HE染色显示有可疑微小浸润者52例,PAS染色示其中的43例(83%)的可疑病灶周边基膜样物质消失,有微浸润,Ⅰ型微浸润的比例较Ⅱ型明显偏低(P=0.007)。HE染色下3例(3.4%,3/89)认为无微浸润者经深切证实有浸润,并经PAS染色确认。Ⅰ型和Ⅱ型的p53表达率差异无显著性(P=0.445),而Ki-67阳性率Ⅰ型高于Ⅱ型(P=0.048)。癌早期改变组的p53阳性率高于声带角化症伴单纯增生组(P=0.008),而与声带角化症异型增生组和声带进展癌组之间的差异无统计学意义(P=0.240,P=0.268)。癌早期改变组的Ki-67阳性率明显低于浸润癌组(P=0.000),并明显高于角化症伴单纯增生组(P=0.001),但与角化症伴异型增生组之间差异无显著性(P=0.248)。结论声带鳞状细胞癌早期改变可区分为Ⅰ型和Ⅱ型,Ⅱ型癌变可在不累及上皮全层的情况下,由上皮的基底层和(或)副基底层细胞直接向固有膜内增生及癌变,此型占全部病例的近1/3,早期浸润是Ⅱ型诊断的可靠依据;Ⅱ型的存在提示声带鳞状细胞癌的早期发生和演进可能存在不同的机制;PAS染色和p53、Ki-67免疫组化染色有助于声带鳞状细胞癌Ⅱ型早期的诊断。