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Triclosan inhibits the activation of human periodontal ligament fibroblasts induced by lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis 被引量:1
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作者 Wei Shu Yanman Zhang +3 位作者 Chen Zhang Qiang You Hong Zhou Shuang Wen 《The Journal of Biomedical Research》 CAS CSCD 2021年第3期206-215,共10页
Periodontitis is a highly prevalent,chronic,non-specific,and immunologically devastating disease of periodontal tissues,caused by microbial infection.This study aims to examine the efficacy and protective mechanism of... Periodontitis is a highly prevalent,chronic,non-specific,and immunologically devastating disease of periodontal tissues,caused by microbial infection.This study aims to examine the efficacy and protective mechanism of triclosan(TCS),a bisphenolic,non-cationic component of oral care products,against periodontal inflammation induced by lipopolysaccharide purified from Porphyromonas gingivalis(LPS-PG).TCS markedly downregulated interleukin-6(IL-6),IL-8,and IL-15 in human periodontal ligament fibroblasts(HPDLFs)treated with LPS-PG.By using a liquid chromatography-tandem mass spectrometry(LC-MS/MS)approach,318 differentially expressed proteins(161 upregulated and 157 downregulated)were identified in TCS-pretreated HPDLFs.TCS upregulated HSPA5 and HSP90B1 but downregulated HSPA2.Besides,TCS upregulated miR-548i in HPDLFs,which downregulated IL-15.These results indicate that TCS attenuates the activation of HPDLFs and downregulates the inflammatory cytokines through various mechanisms,thus highlighting its protective role in periodontal inflammation. 展开更多
关键词 human periodontal ligament fibroblasts LIPOPOLYSACCHARIDE TRICLOSAN heat shock protein
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EFFECTS OF TRANSFORMING GROWTH FACTOR β AND RECOMBINANT HUMAN BONE MORPHOGENETIC PROTEIN 2 ON HUMAN PERIODONTAL LIGAMENT FIBROBLASTS
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作者 司晓辉 刘正 《Journal of Shanghai Second Medical University(Foreign Language Edition)》 2001年第1期36-40,共5页
Objective To evaluate the effects of transforming growth factor β(TGF-β) and recombinant human bone morphogenetic protein 2 (rhBMP2) on human periodontal ligament fibroblasts (HPDLFs). Methods HPDLFs were done prima... Objective To evaluate the effects of transforming growth factor β(TGF-β) and recombinant human bone morphogenetic protein 2 (rhBMP2) on human periodontal ligament fibroblasts (HPDLFs). Methods HPDLFs were done primary culture to detect the distinct concentrations of TGF-P and rhBMF2 on its proliferation, alkaline phosphatase (ALP) activity, osteocalcin (OC) synthesis and formation of the minerali-zed nodules, respectively. Results TGF-β (5~100ng/ml) significantly stimulated the proliferation of HPDLFs. The ALP activity of HPDLFs was evaluated evidently by 5ng/ml TGF-β. TGF-β( 0. 5 ~ 100ng/ml) had no effects on OC synthesis and formation of the mineralized nodules of HPDLFs. rhBMP2 (0. 25~2mg/ ml) had no remarkable effect on the proliferation of HPDLFs. The ALP activity, OC synthesis and forma-tion of the mineralized nodules of HPDLFs were significantly stimulated by 0. 5~ 2mg /ml rhBMP2. Conclusion The effects of TGF-β and rhBMP2 on HPDLFs are dose-dependent. TGF-P can stimulate HPDLFs to express the early marker of osteoblastic phenotype, and it lacks the ability to promote maturation of the osteogenic phenotype. rhBMP2 can not only stimulate the expression but also promote the maturation of osteoblas-tic phenotype of HPDLFs. 展开更多
关键词 transforming growth factor Precombinant human bone morphogenetic protein 2human periodontal ligament fibroblastsalkaline phosphataseosteocalcin mineralization
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The Interaction of Heat and Lipopolysaccharide on the Expression Levels of Receptor Activator of NF-κB Ligand and Osteoprotegerin in Human Periodontal Ligament Cells
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作者 Lan Zhang Qinghua Zheng +4 位作者 Xuedong Zhou Lu Tang Qian Wang Xiaoyu Li Dingming Huang 《Open Journal of Stomatology》 2015年第10期243-250,共8页
Aim: To investigate the expression levels of receptor activator of NF-κB ligand (RANKL) and oste-oprotegerin (OPG) in human periodontal ligament fibroblasts when stimulated with heat in infective conditions. Methods:... Aim: To investigate the expression levels of receptor activator of NF-κB ligand (RANKL) and oste-oprotegerin (OPG) in human periodontal ligament fibroblasts when stimulated with heat in infective conditions. Methods: Periodontal ligament fibroblasts were subjected to various temperature increases for 5 min with or without 10 ng/mL lipopolysaccharide (LPS) and then maintained at 37℃ for 6 h. After that, the expression levels of RANKL and OPG were investigated using real-time RT-PCR and ELISA. As a positive or negative control, the cells were cultured at 37℃ with or without 10 ng/mL LPS. Data were analyzed using one-way ANOVA at a significant level of p = 0.05. Results: The mRNA expression levels of RANKL and OPG were both down-regulated when the cells were heated in infective conditions. The release of sRANKL was increased at low temperatures in such infection;while at high temperatures heat treatment down-regulated the release of sRANKL induced by LPS. The relative RANKL/OPG expression ratios were increased at low temperatures in infective conditions. Conclusions: The interactions between heat and LPS would affect the balance between RANKL and OPG in periodontal ligament fibroblasts when they were heated in infective conditions. Such infection may be the reason why bone resorption occurs in the local area after warm vertical compaction. 展开更多
关键词 HEAT LIPOPOLYSACCHARIDE OPG periodontal ligament fibroblastS RANKL
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牙周炎伴口腔扁平苔藓中IL-17激活NF-kB调控hPDLFs促进MMPs的分泌 被引量:18
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作者 程凤峡 孙喜龙 +1 位作者 杨玉鹏 许彦枝 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期805-809,共5页
目的:探讨IL-17在人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中的表达对牙周炎伴口腔扁平苔藓患者中的作用及意义。方法:采用ELISA方法检测43例健康志愿者(对照组)和43例牙周炎伴口腔扁平苔藓患者(研究组)血清中IL-17蛋白表达水平及IL-17在研究组唾液... 目的:探讨IL-17在人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)中的表达对牙周炎伴口腔扁平苔藓患者中的作用及意义。方法:采用ELISA方法检测43例健康志愿者(对照组)和43例牙周炎伴口腔扁平苔藓患者(研究组)血清中IL-17蛋白表达水平及IL-17在研究组唾液中的表达水平;检测研究组牙周指标。CCK8法检测IL-17对hPDLFs细胞增殖能力的影响;qRT-PCR和ELISA方法分别检测IL-17对hPDLFs中MMP1,MMP2,MMP3和MMP9的mRNA及蛋白质表达水平影响。通过Western blot及ELISA检测IL-17对hPDLFs细胞中NF-kB P65蛋白磷酸化的影响及MMP1,MMP2,MMP3和MMP9的蛋白表达变化。结果:研究组血清IL-17水平明显高于对照组(P<0.05),唾液中IL-17水平与牙周破坏程度呈正相关。IL-17可促进hPDLFs中NF-kB P65蛋白磷酸化,并促进MMP-1,MMP-2,MMP-3和MMP-9 Mrna及蛋白的表达。结论:IL-17可通过激活NF-kB信号通路促进hPDLFs中MMP-1,MMP-2,MMP-3和MMP-9的分泌。 展开更多
关键词 牙周炎 口腔扁平苔藓 IL-17 NF-KB 人牙周膜成纤维细胞(hpdlfs)
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五倍子牙周缓释凝胶对LPS介导HPDLFs分泌MMP-3的影响 被引量:4
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作者 祝磊 唐荣银 +2 位作者 张海欧 张安生 杨素芳 《牙体牙髓牙周病学杂志》 CAS 北大核心 2009年第5期271-274,共4页
目的:探讨五倍子牙周缓释凝胶对内毒素(LPS)介导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)分泌基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的影响。方法:体外培养HPDLFs,运用ELISA分别检测在LPS作用下以及在LPS加不同时间五倍子凝胶释放液作用下HPDLFs分泌MMP-3的量。结... 目的:探讨五倍子牙周缓释凝胶对内毒素(LPS)介导人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)分泌基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的影响。方法:体外培养HPDLFs,运用ELISA分别检测在LPS作用下以及在LPS加不同时间五倍子凝胶释放液作用下HPDLFs分泌MMP-3的量。结果:与空白对照组相比,50μg/mL的LPS即能明显促进HPDLFs分泌MMP-3(P<0.05),100μg/mL的LPS促进作用更显著;加入五倍子凝胶释放液后,各时间点凝胶释放液组MMP-3的量均明显低于LPS组(P<0.05),而且,各时间点凝胶释放液组之间亦有显著性差异(P<0.05),其中,2h释放液组MMP-3最低,相对于LPS组,对MMP-3的抑制率为75.77%,随着释放时间的延长,抑制作用逐渐减弱,但第7天释放液仍有32.26%的抑制率。结论:五倍子牙周缓释凝胶可有效抑制LPS介导HPDLFs分泌MMP-3,抑制作用可持续7d。 展开更多
关键词 五倍子牙周缓释凝胶 人牙周膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶一3 内毒素
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康复新治疗牙周炎的机制研究
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作者 汤雁利 龚斌 +1 位作者 沈涛 李启艳 《现代医药卫生》 2024年第7期1098-1104,共7页
目的通过研究康复新对牙周组织相关细胞增殖的影响及康复新在细胞炎症反应模型中的抗炎作用,从促进牙周组织再生和抗炎2个方面探讨康复新治疗牙周炎的相关机制。方法(1)采用淋巴细胞增殖检测法(MTS法)检测不同浓度康复新对人牙周膜成纤... 目的通过研究康复新对牙周组织相关细胞增殖的影响及康复新在细胞炎症反应模型中的抗炎作用,从促进牙周组织再生和抗炎2个方面探讨康复新治疗牙周炎的相关机制。方法(1)采用淋巴细胞增殖检测法(MTS法)检测不同浓度康复新对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)、人牙龈上皮细胞(hGECs)、人单核巨噬细胞(THP-1)和小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)活性的影响;(2)通过细菌脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7建立细胞炎症模型,采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测康复新对细胞白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10、一氧化氮合酶(NOS)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达水平的影响。结果(1)与对照组比较:0.1000、0.0500、0.0250、0.0125 mg/mL的康复新组在24 h和48 h时间点均可刺激hPDLFs、THP-1和MC3T3-E1增殖(P<0.01),且促增殖作用具有浓度依赖性;(2)在炎症细胞模型中,与对照组比较,0.0500 mg/mL和0.0125 mg/mL的康复新组IL-1β和IL-10 mRNA表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05),NOS和MMP-13 mRNA表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论康复新在一定浓度范围内能促进hPDLFs、hGECs、THP-1和MC3T3-E1增殖;康复新可抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其抗炎机制可能是降低NOS和MMP-13 mRNA表达水平。康复新可能是通过促进牙周组织再生和抗感染治疗牙周炎。 展开更多
关键词 康复新 细胞增殖 抗炎 细胞炎症模型 人牙周膜成纤维细胞
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GRP78-c-Src信号通路介导周期性牵张力作用下牙周膜成纤维细胞成骨分化的机制研究
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作者 胡静 崔智华 +2 位作者 黄克强 苏荣健 赵颂 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期304-312,共9页
目的探讨在周期性牵张力作用下葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对牙周膜成纤维细胞成骨分化的影响,并阐述其机制。方法应用FlexCell 5000细胞应力装置模拟牙齿正畸受力环境;应用流式细胞术细胞分选技术获得牙周膜成纤维细胞GRP78高表达细胞和GR... 目的探讨在周期性牵张力作用下葡萄糖调节蛋白78(GRP78)对牙周膜成纤维细胞成骨分化的影响,并阐述其机制。方法应用FlexCell 5000细胞应力装置模拟牙齿正畸受力环境;应用流式细胞术细胞分选技术获得牙周膜成纤维细胞GRP78高表达细胞和GRP78低表达细胞;采用基因转染技术敲减GRP78、c-Src的表达以及过表达c-Src;蛋白质印迹实验检测成骨转录因子Runt相关基因2(RUNX2)、锌指结构转录因子(Osterix)以及成骨标志蛋白骨钙蛋白(OCN)、骨桥蛋白(OPN)的表达;免疫共沉淀实验检测GRP78与c-Src激酶的相互作用;茜素红染色实验检测细胞矿化结节的形成。结果GRP78在牙周膜成纤维细胞呈异质性表达,流式分选实验获得GRP78高表达和GRP78低表达细胞。周期性牵张力处理后,与GRP78低表达细胞相比,GRP78高表达细胞成骨分化能力及c-Src激酶磷酸化水平均升高,差异具有统计学意义(P<0.05);GRP78与c-Src激酶存在相互作用;与对照组相比,过表达c-Src组细胞成骨分化能力升高(P<0.05),sic-Src组细胞成骨分化能力降低(P<0.05)。结论GRP78通过与c-Src激酶相互作用并上调其表达,进而促进周期性牵张力诱导的牙周膜成纤维细胞成骨分化。 展开更多
关键词 周期性牵张力 成骨分化 牙周膜成纤维细胞 葡萄糖调节蛋白78
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没食子水提物对人牙周膜成纤维细胞生物学活性的影响
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作者 梁猛猛 李恺 +2 位作者 赵玉绒 张若冰 艾林 《中国药业》 CAS 2024年第18期42-46,共5页
目的 探讨没食子水提物在防治口腔炎性疾病中的作用。方法 分离培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLF),设立阴性对照组(PBS)、脂多糖组(1μg/mL)、没食子组(10 mg/mL)、氯己定组(0.2%,m/m)。对没食子水提物粉末进行大体检查,采用扫描电子显微... 目的 探讨没食子水提物在防治口腔炎性疾病中的作用。方法 分离培养人牙周膜成纤维细胞(HPDLF),设立阴性对照组(PBS)、脂多糖组(1μg/mL)、没食子组(10 mg/mL)、氯己定组(0.2%,m/m)。对没食子水提物粉末进行大体检查,采用扫描电子显微镜观察没食子水提物粉末的微观特征。采用MTT法检测细胞活力,XTT法检测细胞增殖水平,以划痕伤口愈合迁移试验考察细胞迁移情况,采用酶联免疫吸试验(ELISA)法检测白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果 没食子水提物粉末大体检查及显微特征明显。没食子组细胞活力显著高于其他组(P <0.05)。给药后第3,5,7天,没食子组HPDLF增殖水平显著高于其他组(P <0.05)。与阴性对照组比较,没食子组IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平显著降低(P <0.05)。没食子组细胞24 h划痕伤口几乎完全闭合。结论 没食子水提物可减轻HPDLF相关炎性反应。 展开更多
关键词 没食子 牙周炎 人牙周膜成纤维细胞 生物学活性 炎性反应
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bFGF对牙周膜成纤维细胞与骨髓间充质干细胞共育影响的体外研究
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作者 杨临博 高秀秋 《锦州医科大学学报》 CAS 2024年第1期1-7,共7页
目的探讨碱性成纤维细胞(重组人型)生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)与牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)共育条件下BMSCs向PDLF... 目的探讨碱性成纤维细胞(重组人型)生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)与牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts,PDLFs)共育条件下BMSCs向PDLFs分化的影响。方法体外培养大鼠BMSCs和PDLFs,并进行细胞鉴定。采用Millicell悬挂式细胞共育室建立BMSCs/PDLFs间接共培养模型。将实验分为5组:阴性对照组(单独BMSCs组);阳性对照组(单独PDLFs组);实验组:0 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组、1 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组和10 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组。在细胞共育的第3天、第5天和第7天进行ALP活性测定。培育至2 w后,停止共育,RT-PCR法监测各组细胞的骨钙素(osteocalcin,OCN)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,COLⅢ)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和金属蛋白酶1(metalloproteinase 1,ADAMTS1)的mRNA含量。采用SPSS 17.0软件对数据进行统计学分析。结果ALP活性测定显示第3天、第5天和第7天共培养后,在各个时间点,各实验组与阴性对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);与阳性对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05);各实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测结果显示阴性对照组与其余4组的OCN和OPN mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),后4组之间差异无统计学意义(P>0.05);单独BMSCs组与其余4组的COLⅢ和ADAMTS1 mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05),其中10 ng/mL bFGF+BMSCs/PDLFs组的COLⅢ、ADAMTS1 mRNA表达量高于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论bFGF能诱导BMSCs向PDLFs分化,高浓度组(10 ng/mL)bFGF的诱导效果优于低浓度组(1 ng/mL)。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 骨髓间充质干细胞 牙周膜成纤维细胞 共培养 碱性磷酸酶活性
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利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞迁移、增殖和炎症反应的影响
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作者 崔丽娟 李桂平 《广东医学》 CAS 2024年第4期433-438,共6页
目的探讨利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞(PDLF)迁移、增殖和炎症反应的影响。方法体外培养牙周膜成纤维细胞,根据培养液成分设置为低糖对照组(L组,含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、高糖组(H组,25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、... 目的探讨利拉鲁肽对高糖环境下牙周膜成纤维细胞(PDLF)迁移、增殖和炎症反应的影响。方法体外培养牙周膜成纤维细胞,根据培养液成分设置为低糖对照组(L组,含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、高糖组(H组,25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)、低糖给药组(L+G组,10×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽+含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)和高糖给药组(H+G组,10×10^(-7)mmol/L的利拉鲁肽+25 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基)。采用CCK-8法测定细胞增殖能力,Transwell小室测定细胞迁移能力,应用流式细胞仪测定细胞凋亡情况,采用Western blot法测定牙周膜成纤维细胞中Bax、Bcl-2表达水平,采用酶联免疫吸附法检测牙周膜成纤维细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β、IL-6、C反应蛋白(CRP)的表达水平。结果与L组相比,H组PDLF细胞OD值、Transwell小室PDLF迁移数量、胞内Bcl-2蛋白水平降低(P<0.05);细胞凋亡率、胞内Bax蛋白、培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP水平升高(P<0.05)。H+G组PDLF细胞OD值、Transwell小室PDLF迁移细胞数量、胞内Bcl-2蛋白水平显著高于H组(P<0.05);而细胞凋亡率、胞内Bax蛋白、培养液中TNF-α、IL-1β、IL-6、CRP水平则低于H组(P<0.05)。结论利拉鲁肽能够抑制高糖诱导的牙周膜成纤维细胞凋亡,通过调控Bax/Bcl-2表达和降低炎症反应,从而促进牙周组织愈合修复。 展开更多
关键词 利拉鲁肽 高糖 牙周膜成纤维细胞 BAX/BCL-2 炎症反应
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姜黄素通过激活GSK-3β/β-catenin通路抑制正畸牙齿移动过程中牙周膜自噬
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作者 杨玮杰 石洪波 黄文河 《广州中医药大学学报》 CAS 2024年第8期2136-2145,共10页
【目的】观察姜黄素对正畸牙齿移动(OTM)的作用及其潜在机制。【方法】将30只大鼠随机分为5组,即正常组,模型组,姜黄素40、80、160 mg/kg组,每组6只。除正常组,其余各组大鼠均构建OTM模型。干预后,微型CT断层扫描上颌骨观察位移,苏木素... 【目的】观察姜黄素对正畸牙齿移动(OTM)的作用及其潜在机制。【方法】将30只大鼠随机分为5组,即正常组,模型组,姜黄素40、80、160 mg/kg组,每组6只。除正常组,其余各组大鼠均构建OTM模型。干预后,微型CT断层扫描上颌骨观察位移,苏木素-伊红(HE)染色法观察上颌组织病理形态,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)染色法观察牙周膜组织细胞凋亡,采用流式细胞术测定牙周膜活性氧簇(ROS)水平,酶标仪测量牙周膜组织丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,分别采用免疫荧光染色法、Western Blot法检测牙周膜组织中糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)/β-连环蛋白(β-catenin)通路相关蛋白表达和自噬水平。【结果】与模型组比较,姜黄素各剂量组OTM诱导的牙周膜成纤维细胞增多,牙周膜中MDA和ROS水平降低,SOD和GSH-Px活性升高,牙周膜自噬指标Beclin1、Lamp和LC3B的蛋白表达水平降低,牙周膜p-GSK-3β/GSK-3β和β-catenin蛋白表达水平降低(均P<0.05)。【结论】姜黄素可能通过阻断GSK-3β/β-catenin通路抑制氧化应激,从而抑制正畸牙齿移动过程中牙周膜自噬。 展开更多
关键词 姜黄素 正畸牙齿移动 牙周膜 成纤维细胞 GSK-3β/β-catenin通路 自噬 大鼠
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黄芪多糖调控AMPK⁃mTORC1通路对牙周膜成纤维细胞增殖、凋亡、自噬的影响
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作者 朗么磋 周靖淞 袁小平 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 2024年第3期323-329,共7页
目的探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPLF)增殖、凋亡、自噬及磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)通路的影响。方法原代培养HPLF细胞;免疫组织化... 目的探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide,APS)对牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPLF)增殖、凋亡、自噬及磷酸腺苷蛋白激酶(AMPK)/雷帕霉素靶蛋白(mTORC1)通路的影响。方法原代培养HPLF细胞;免疫组织化学法鉴定HPLF细胞;设置对照组、0.1 mg·mL^(-1)组(0.1 mg·mL^(-1) APS)、0.2 mg·mL^(-1)组(0.2 mg·mL^(-1) APS)、0.4 mg·mL^(-1)组(0.4 mg·mL^(-1) APS),细胞增殖及毒性(CCK-8)法检测各组细胞增殖抑制率;用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;透射电子显微镜观察各组HPLF细胞自噬情况;Western blot检测各组细胞自噬、凋亡、通路相关蛋白表达情况。结果与对照组相比,细胞增殖抑制率、细胞凋亡率在0.1 mg·mL^(-1)组、0.2 mg·mL^(-1)组显著降低,而0.4 mg·mL^(-1)组与0.2 mg·mL^(-1)组相比细胞增殖抑制率与凋亡率则明显增多。与对照组相比,0.1 mg·mL^(-1)和0.2 mg·mL^(-1) APS显著抑制细胞自噬,而0.4 mg·mL^(-1) APS则促进细胞自噬;与对照组相比,Beclin⁃1、LC3⁃Ⅱ/LC3⁃Ⅰ、半胱氨酸蛋白酶⁃3(Caspase⁃3)、bcl⁃2相关X蛋白(Bax)、p⁃AMPK/AMPK在0.1 mg·mL^(-1)组、0.2 mg·mL^(-1)组显著降低,而0.4 mg·mL^(-1)组与0.2 mg·mL^(-1)组相比表达水平则显著增加;p62、survivin、Bcl⁃2、p⁃mTORC1/mTORC1表达水平与其呈现相反趋势。结论APS具有促进HPLF细胞增殖、抑制细胞凋亡的作用,并可能通过调节AMPK⁃mTORC1通路抑制细胞自噬的发生。 展开更多
关键词 黄芪多糖 牙周膜成纤维细胞 磷酸腺苷蛋白激酶/雷帕霉素靶蛋白
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胶原蛋白肽对人牙周膜成纤维细胞损伤的保护作用
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作者 刘爱青 王海燕 +3 位作者 邹国庆 李鹏程 宋萃 闫征 《工业微生物》 CAS 2024年第2期176-178,共3页
文章以脂多糖(LPS)为致病因子,通过刺激人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)建立模型,研究胶原蛋白肽(CP)对口腔的保护作用及其可能机制。结果表明,100 mg/mL以上质量浓度的CP能有效降低LPS对hPLDFs的毒性,显著提高h PLDFs的增殖能力,同时也能... 文章以脂多糖(LPS)为致病因子,通过刺激人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)建立模型,研究胶原蛋白肽(CP)对口腔的保护作用及其可能机制。结果表明,100 mg/mL以上质量浓度的CP能有效降低LPS对hPLDFs的毒性,显著提高h PLDFs的增殖能力,同时也能有效降低TLR4和NF-κB的表达量,对炎症因子的分泌产生明显的影响。作用机理可能是,CP作为一种信号分子作用于TLR4,通过抑制TLR4和NF-κB的表达来抑制LPS引起的炎症反应,从而促进hPDLFs增殖。 展开更多
关键词 口腔修护 牙周膜成纤维细胞 胶原蛋白肽 炎症因子
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pEGFP-N_1-BMP_2真核表达载体的构建及其经超声微泡介导转染HPDLFs后的表达 被引量:3
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作者 仲琳 钟晓波 +4 位作者 张云燕 骆书美 Nameeta Shrestha 齐进 李春光 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1045-1047,1050,F0003,共5页
目的构建pEGFP-N1-BMP2真核表达质粒,并检测其经超声微泡转基因技术转染人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)后的瞬时表达情况。方法从人胎盘滋养层细胞系中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因人骨形成蛋白-2(hBMP2)基因片段,连接pMD19-T载... 目的构建pEGFP-N1-BMP2真核表达质粒,并检测其经超声微泡转基因技术转染人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs)后的瞬时表达情况。方法从人胎盘滋养层细胞系中提取总RNA,采用RT-PCR方法获得目的基因人骨形成蛋白-2(hBMP2)基因片段,连接pMD19-T载体并测序正确后与真核荧光表达载体pEGFP-N1连接,酶切鉴定后利用超声微泡转基因技术转染入HPDLFs中,通过荧光显微镜和RT-PCR检测目的基因在HPDLFs中的表达。结果成功克隆人BMP2基因,重组质粒pEGFP-N1-BMP2经PCR及双酶切鉴定均证实hBMP2基因已与pEGFP-N1正确重组。pEGFP-N1-BMP2经超声微泡转染HPDLFs后,通过绿色荧光观察和RT-PCR检测证实hBMP2能够在体外培养的HPDLFs内有效的转录和瞬时表达。结论成功构建pEG-FP-N1-BMP2真核表达载体,通过超声微泡转基因技术成功转染入HPDLFs并得到有效表达,为进一步研究该质粒与超声微泡转基因技术在牙周再生基因治疗中的应用提供实验基础。 展开更多
关键词 牙周再生 超声微泡 人骨形成蛋白-2 增强型绿色荧光蛋白 基因转染 人牙周膜成纤维细胞
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EPA对P.gingivalis LPS诱导人牙周膜成纤维细胞炎症反应的影响
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作者 周子超 束蓉 吴轶群 《上海口腔医学》 CAS 北大核心 2023年第5期475-479,共5页
目的:分析二十碳五烯酸(eicosapntemacnioc acid,EPA)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)分泌炎症因子的作用... 目的:分析二十碳五烯酸(eicosapntemacnioc acid,EPA)对牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)分泌炎症因子的作用。方法:利用组织块法培养hPDLCs,MTT法检测不同浓度EPA对hPDLCs细胞活性的影响。根据MTT结果选择合适的EPA浓度,分别采用实时定量PCR和ELISA法检测EPA对P.gingivalis LPS诱导hPDLCs分泌白细胞介素6(Interleukin-6,IL-6)、IL-8和IL-1β能力的影响,采用SPSS 10.0软件包对数据进行统计学分析。结果:25~100μmol/L EPA对hPDLCs细胞活性无影响,但可呈剂量依赖性下调P.gingivalis LPS诱导hPDLCs分泌IL-6、IL-8和IL-1β的能力。结论:EPA有望在不影响细胞活性的情况下,抑制P.gingivalis LPS诱导hPDLCs分泌炎症因子的能力,EPA可能成为牙周炎抗炎治疗的潜在靶点。 展开更多
关键词 二十碳五烯酸 脂多糖 人牙周膜成纤维细胞 炎症因子
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Beagle犬牙周韧带成纤维细胞和骨髓基质细胞体外成骨再生潜能的比较
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作者 黄永玲 《福建医药杂志》 CAS 2023年第1期106-110,F0004,共6页
目的 比较Beagle犬牙周韧带成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts cells, PDLFs)和骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)体外成骨潜能,为筛选合适的种子细胞促进牙周组织再生提供实验依据。方法 体外通过茜素红染色... 目的 比较Beagle犬牙周韧带成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts cells, PDLFs)和骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells, BMSCs)体外成骨潜能,为筛选合适的种子细胞促进牙周组织再生提供实验依据。方法 体外通过茜素红染色、Realtime-PCR比较两种细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)及骨保护素(osteoprotegerin, OPG)的表达。结果 茜素红染色显示PDLFs成骨能力高于BMSCs;Realtime-PCR显示,PDLFs的OPG表达量高于BMSCs,差别有统计学意义(P<0.05);PDLFs的ALP表达量虽低于BMSCs,但两者之间差别无统计学意义(P>0.05)。结论 PDLFs体外成骨潜能不低于BMSCs。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 牙周韧带成纤维细胞 聚合酶链反应 碱性磷酸酶 骨保护素
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沉默Foxp3对牙周膜成纤维细胞在炎症环境下炎症因子的表达及增殖和迁移的影响 被引量:3
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作者 芦婷 朱嘉皓 +2 位作者 杨仕鹤 沈喆 钟良军 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期269-275,共7页
目的探究炎症环境下Foxp3基因对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)炎症因子表达及细胞增殖、迁移的影响,探索Foxp3基因在牙周炎发生发展中的作用。方法使用小干扰RNA(siRNA)沉默hPDLFs的Foxp3基因,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹(W... 目的探究炎症环境下Foxp3基因对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)炎症因子表达及细胞增殖、迁移的影响,探索Foxp3基因在牙周炎发生发展中的作用。方法使用小干扰RNA(siRNA)沉默hPDLFs的Foxp3基因,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹(Western blotting)实验验证Foxp3沉默效率,筛选Foxp3基因沉默效果最佳的siRNA。使用牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)来源脂多糖(LPS)模拟体外炎症环境,CCK-8检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs增殖的影响;划痕实验及transwell细胞迁移实验检测炎症环境下沉默Foxp3对hPDLFs迁移的影响;RT-PCR、Western blotting实验检测炎症环境下hPDLFs炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-8的表达。结果siRNA转染后,RT-PCR、Western blotting检测显示,Foxp3-si3组Foxp3的mRNA和蛋白表达均显著降低(mRNA表达,t=21.03,P<0.0001;蛋白表达,t=12.8,P<0.001)。在炎症环境下,Foxp3基因沉默对hPDLFs的增殖无显著影响(P>0.05);Foxp3基因沉默促进hPDLFs的迁移,IL-6、IL-8的表达升高(P<0.05)。结论在炎症环境下,Foxp3基因沉默可促进hPDLFs迁移和炎症因子表达升高,但对hPDLFs的增殖无明显影响。Foxp3基因在牙周炎中具有抑制炎症的作用。 展开更多
关键词 牙周膜成纤维细胞 FOXP3 脂多糖 小干扰RNA 牙周炎
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TGF⁃β1对炎症状态下人牙周膜成纤维细胞的调控作用 被引量:2
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作者 朱嘉皓 芦婷 钟良军 《口腔疾病防治》 2023年第2期94-103,共10页
目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fi... 目的探讨转化生长因子⁃β1(transforming growth factor⁃β1,TGF⁃β1)对在牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖(lipopolysaccharide from Porphyromonas gingivalis,Pg⁃LPS)刺激模拟炎症状态下的人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,hPDLFs)的调控作用。方法获取hPDLFs并进行免疫组化鉴定,通过qRT⁃PCR与CCK⁃8确定Pg⁃LPS的刺激浓度。将hPDLFs分成4组:空白对照组,单纯100μg/mL Pg⁃LPS;低浓度组,1 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;中浓度组,10 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS;高浓度组100 ng/mL TGF⁃β1+100μg/mL Pg⁃LPS。CCK⁃8检测细胞增殖情况;划痕实验与Transwell小室实验检测hPDLFs细胞迁移能力;流式细胞术检测hPDLFs的细胞周期;qRT⁃PCR检测hPDLFs的转录因子叉头盒p3(forkhead/winged helix transcription⁃al factor p3,Foxp3)、白细胞介素6(interleukin⁃6,IL⁃6)及EB病毒诱导基因3(Epstein⁃Barrvirus⁃induced gene 3,EBI3)mRNA表达;Western blot检测hPDLFs的Foxp3、IL⁃6及EBI3蛋白表达。结果免疫组化鉴定显示抗波形丝蛋白阳性及抗角蛋白阴性;Pg⁃LPS浓度为100μg/mL时,hPDLFs中IL⁃6 mRNA表达相比空白对照组显著上升(P<0.0001)且细胞增殖能力下降(P<0.0001),所以选择100μg/mL Pg⁃LPS用于模拟炎症状态。10、100 ng/mL TGF⁃β1能提高炎症状态下hPDLFs的增殖能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1能促进炎症状态下hPDLFs的迁移能力(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可加快炎症状态下hPDLFs的细胞周期(P<0.0001);1、10、100 ng/mL TGF⁃β1可抑制炎症状态下hPDLFs的IL⁃6基因和蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的EBI3基因及蛋白表达量(P<0.0001),1、10 ng/mL TGF⁃β1可提高炎症状态下hPDLFs的Foxp3基因表达量,10 ng/mL TGF⁃β1可提高Foxp3蛋白表达量(P<0.05)。结论TGF⁃β1可促进炎症状态下hPDLFs的增殖及迁移能力、上调EBI3表达,可能与转录因子Foxp3表达有关。 展开更多
关键词 转化生长因子⁃β1 牙龈卟啉单胞菌来源脂多糖 转录因子叉头盒p3 白细胞介素6 IL⁃35亚基 EB病毒诱导基因3 牙周炎 人牙周膜成纤维细胞 细胞周期 免疫治疗
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SOCS6通过JAK2/STAT3信号通路对人牙周膜成纤维细胞炎症及凋亡的影响 被引量:2
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作者 邱枫 杜宇 +1 位作者 罗惠冰 刘星 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期815-820,共6页
目的:探究SOCS6通过JAK2/STAT3信号通路对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)炎症及凋亡的影响。方法:取对数生长期的hPDLFs,分组如下:对照组、0.1 mg/L LPS组、1 mg/L LPS组、5 mg/L LPS组,qRT-PCR观察LPS对hPDLFs中SOCS6 mRNA表达的影响,West... 目的:探究SOCS6通过JAK2/STAT3信号通路对人牙周膜成纤维细胞(hPDLFs)炎症及凋亡的影响。方法:取对数生长期的hPDLFs,分组如下:对照组、0.1 mg/L LPS组、1 mg/L LPS组、5 mg/L LPS组,qRT-PCR观察LPS对hPDLFs中SOCS6 mRNA表达的影响,Western blot观察LPS对hPDLFs中SOCS6蛋白表达的影响,CCK-8法观察LPS对hPDLFs细胞活力的影响,ELISA法观察LPS对hPDLFs细胞炎症因子TNF-α、IL-1β的含量的影响。慢病毒滴度检测、靶细胞感染预实验及细胞转染,并且qRT-PCR检测细胞SOCS6 mRNA表达。取对数生长期的hPDLFs,过表达转染SOCS6后,LPS诱导hPDLFs炎症细胞模型,用JAK2信号激活剂香豆霉素A1(CA1)处理过夜,分组如下:LPS组(5 mg/L LPS)、LPS+oe-NC组、LPS+oe-SOCS6组、LPS+oe-SOCS6+CA1组,CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡,ELISA法检测细胞炎症因子TNF-α、IL-1β的含量,Western blot检测细胞SOCS6、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达。结果:SOCS6在hPDLFs细胞表达,随着LPS刺激,SOCS6基因表达下调,并且LPS浓度越高,细胞中SOCS6基因表达下调越明显。而且,hPDLFs细胞过表达SOCS6基因后,p-JAK2、p-STAT3蛋白表达明显降低,细胞炎症因子TNF-α、IL-1β含量减少,凋亡率下降。结论:SOCS6在LPS诱导的牙周炎细胞模型中表达下调,过表达SOCS6后细胞活力显著升高,凋亡率降低,此作用可能与抑制JAK2/STAT3信号通路及炎症因子IL-1β、TNF-α的表达有关。 展开更多
关键词 细胞因子信号传导抑制因子6 JAK2/STAT3信号通路 人牙周膜成纤维细胞 TNF-Α IL-1Β
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力生长因子对牙周膜干细胞增殖分化的影响 被引量:1
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作者 屠腾 刘艳丽 +2 位作者 王惠 赵萤 张旻 《口腔疾病防治》 2023年第2期86-93,共8页
目的探讨力生长因子(mechano⁃growth factor,MGF)对牙周膜干细胞增殖、分化的影响及其作用的分子机制。方法采用免疫磁珠法分选人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs),流式细胞仪检测表面标志物,并观察分选细胞的克... 目的探讨力生长因子(mechano⁃growth factor,MGF)对牙周膜干细胞增殖、分化的影响及其作用的分子机制。方法采用免疫磁珠法分选人牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs),流式细胞仪检测表面标志物,并观察分选细胞的克隆形成能力及多向分化能力;CCK8法检测不同浓度MGF功能肽段(MGF⁃Ct24E肽)作用下PDLSCs的增殖活性;Western blot检测MGF⁃Ct24E肽作用下PDLSCs中的增殖细胞核抗原(pro⁃liferating cell nuclear antigen,PCNA)、碱性螺旋环螺旋转录因子Scleraxis、Ⅰ型胶原ɑ1(collagen type I alpha 1,COL1A1)、成骨细胞特异性转录因子Osterix、Yes相关蛋白(Yes⁃associated protein,YAP)、磷酸化YAP(phosphory⁃lation yes⁃associated protein,P⁃YAP)蛋白表达量;免疫荧光观察YAP的表达情况;siRNA干扰YAP表达后,观察PDLSCs中MGF⁃Ct24E作用下PCNA、Scleraxis和COL1A1的表达。结果免疫磁珠分选的PDLSCs高表达干细胞表面标志物CD29、CD90、CD105,低表达造血细胞表面标志物CD34、CD45;细胞具有较强的克隆形成能力,成骨诱导茜素红染色后可见红色钙结节,成脂诱导油红O染色后可见红色脂滴;50 ng/mL和100 ng/mL MGF⁃Ct24E肽作用24 h后,PDLSCs的增殖活性增强(P<0.05);细胞中PCNA、Scleraxis和COL1A1蛋白表达上调,而Osterix蛋白表达量下调(P<0.05);50 ng/mL MGF⁃Ct24E肽作用24 h后,YAP蛋白357位点磷酸化水平增强(P<0.05),免疫荧光染色观察发现,YAP蛋白在胞核聚集;MGF⁃Ct24E肽作用下,siRNA抑制YAP表达后,细胞中PCNA、Scler⁃axis蛋白表达量下调(P<0.05)。结论MGF通过激活YAP促进PDLSCs增殖及成纤维分化。 展开更多
关键词 力生长因子 牙周膜 牙周膜干细胞 牙周膜成纤维细胞 Yes相关蛋白 P⁃Yes相关蛋白 细胞增殖 成纤维分化 成骨分化 再生修复
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