辐射对骨髓间充质干细胞增殖分化及相关基因表达的影响

为观察大鼠局部大剂量辐射后,骨髓间充质干细胞增殖分化及相关基因的表达,以137Csγ射线对大鼠股骨头部位局部照射,吸收剂量为30Gy,剂量率为0.83Gy/min,照后两周取股骨头进行骨髓间充质干细胞(BMSCs)培养,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)绘制生长曲线及进行集落计数,RT-PCR检测Cbf-α1,PPAR-γ,VEGF-a和KDR的表达。骨髓间充质干细胞大剂量辐射后细胞增殖能力明显降低,集落形成数目减少;Cbf-α1,PPAR-γ,VEGF-a和KDR的表达均降低,其中Cbf-α1,PPAR-γ,VEGF-a表达降低幅度分别达18.98%,9.46%和57.34%,与对照组相比差异显著(p<0.05)。故体外大剂量局部辐射明显损伤骨髓间充质干细胞,使其增殖分化及相关基因的表达降低。

体外局部大剂量辐射对大鼠骨髓间充质干细胞分化的影响

介绍了30 Gyγ射线局部照射大鼠股骨头部位,观察辐射对骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化的影响。辐照2周后取股骨进行骨髓间充质干细胞培养,经细胞诱导液诱导后进行碱性磷酸酶染色,油红O染色,CD31免疫荧光鉴定,同时RT-PCR检测Cbf-α1、PPAR-γ、VEGF-a和KDR的表达。大剂量辐射抑制BMSCs向相关细胞的分化,降低其Cbf-α1、PPAR-γ、VEGF-a和KDR的表达。诱导可促进体外培养BMSCs向成骨细胞、脂肪细胞和血管内皮细胞的分化,照射组Cbf-α1、PPAR-γ、VEGF-a和KDR mRNA水平明显上调,其中PPAR-γ和VEGF-a表达水平接近对照组。体外大剂量辐射抑制BMSCs向成骨细胞、脂肪细胞、内皮细胞分化,给予一定诱导,辐射损伤的BMSCs体外分化能力可以部分恢复,其相关基因的表达恢复明显,但其向成熟成骨细胞、脂肪细胞和内皮细胞分化的数目依然较少。

17β-雌二醇对成骨细胞生成的作用

目的 研究骨髓基质细胞在向成骨细胞分化的介质中 ,17β 雌二醇 (E2 )对其核结合因子α1(Cbfα1)及过氧化物酶增殖活化受体γ2 (PPAR γ2 )mRNA表达的影响 ,探讨雌二醇对成骨细胞生成的作用。方法 1,2 5 (OH ) 2 D3 和地塞米松 (DEX)诱导大鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化 ,应用半定量RT PCR及Northernblot技术 ,观察不同浓度E2对骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1及PPAR γ2mRNA表达的影响 ,以α 磷酸奈酚为底物 ,测定细胞碱性磷酸酶 (ALP)的活性 ,VanGieson染色法显示Ⅰ型胶原的含量。结果 E2能明显抑制骨髓基质细胞分化过程中Cbfα1mRNA的表达 ,E2浓度为 (0 10 -6)mol/L时 ,Cbfα1mRNA的表达量从 (2 5 0± 3 3 ) %降至 (14 5± 1 3 ) % (P <0 0 1)和 (6 5± 1 9) % (P <0 0 1) ;E2能明显促进骨髓基质细胞在分化介质中PPAR γ2mRNA的表达 ,在上述E2浓度时 ,PPAR γ2mRNA的表达从 (1 75± 0 5 ) %增至 (9 5± 2 1) % (P <0 0 1)和 (19 3± 3 0 ) % (P <0 0 1) ;Northernblot结果显示随着E2浓度的增加 ,CbfαlmRNA的表达量从 4 42± 0 3 9降至 1 88± 0 16(P <0 0 1)和 1 2 0± 0 11(P <0 0 1) ;PPAR γ2mRNA的表达量从 1 47± 0 12增至 2 81±0 2 2 (P <0 0 1)和 4 0 2± 0 3 6(P

法舒地尔保护小鼠脑缺血再灌流损伤的机制

目的探讨法舒地尔(Fasudil)保护小鼠脑缺血/再灌流(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的作用机制。方法对成年C57BL/6J雄性小鼠进行法舒地尔灌胃处理,然后行大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAo)动物模型,用氯化三苯四氮唑染色法(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色以分析脑梗死情况,激光散斑(LaserSpeckle)图像系统分析脑血流改变情况;对成年C57BL/6J雄性小鼠进行法舒地尔灌胃处理后,取脑组织用免疫印迹分析过氧化物酶体激活受体α(peroxisome proliferators-activated receptoralpha,PPARα)的表达状态,实时荧光定量PCR检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)1~3的表达及化学发光法检测SODs的活性。结果雄性C57BL/6J小鼠经法舒地尔处理后,脑组织中PPARα和SOD1、SOD2、SOD3的表达升高(P=0.000、0.000、0.000、0.000),SODs酶活性升高(P=0.000);在小鼠脑MCAO动物模型中,法舒地尔预处理使脑坏死体积明显减小(P=0.000),再灌流后脑坏死区域的脑血流强于羟甲基纤维素(carboxymethyl cellulose,CMC)处理小鼠。结论法舒地尔通过促进PPARα的表达,影响SOD1、SOD2、SOD3的表达及活性,以改善小鼠脑缺血区域的脑血流,从而保护I/R损伤。

减味二藤汤对宫腔机械性损伤大鼠子宫内膜基质细胞过氧化物酶体增殖物激活受体α/脂肪酸氧化信号通路的影响

【目的】在细胞水平探讨减味二藤汤(红藤、忍冬藤等组成)对宫腔机械性损伤所致宫腔粘连的治疗作用机制。【方法】对宫腔机械性损伤所致宫腔粘连大鼠及正常大鼠的子宫内膜基质细胞(ESCs)进行体外原代培养,所培养的细胞进行免疫荧光染色法鉴定,共分为正常组、模型组、减味二藤汤含药血清组、空白血清组、拮抗剂组[减味二藤汤含药血清+过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)抑制剂GW6471],其中,正常组为正常大鼠来源的ESCs,其余各组为宫腔粘连大鼠来源的ESCs。各组细胞处理48 h后,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法观察细胞活性,采用Western Blot法检测各组细胞PPAR-α、酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(CPT1A)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)及纤连蛋白(Fibronectin)的表达。【结果】与空白血清组和拮抗剂组比较,减味二藤汤含药血清组细胞活性下降,α-SMA、Collagen I、Fibronectin的蛋白表达水平降低(P<0.05),PPAR-α、ACOX1、CPT1A的蛋白表达水平升高(P<0.05)。【结论】减味二藤汤可激活PPAR-α/脂肪酸氧化(FAO)通路,促进脂肪酸氧化,从而改善宫腔机械性损伤引起的宫腔粘连纤维化。