γ-PGA降解酶系基因pgdS和ggt的克隆及生物信息分析

以实验菌株枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis 115基因组为模板,通过PCR技术成功克隆到γ-聚谷氨酸降解酶系基因pgd S和ggt,并进行测序,利用Ex PASy-Prot Param tool、Server 3.0 Signal P、TMHMM Server和Tmpred、PSORTB、Predict Protein、Swiss-Model Workspace软件,分别对蛋白质的理化性质、信号肽、跨膜区、亚细胞定位、二级结构、三维结构建模进行了分析和预测。结果表明:pgd S和ggt基因分别含1242个和1764个核苷酸,分别编码414个和588个氨基酸。Pgd S和GGT均为稳定型亲水性蛋白,都存在信号肽,其亚细胞分别定位于胞壁和胞外。GGT在N端存在一个强跨膜区。二级结构分析显示,Pgd S和GGT两种蛋白都以L(环)为主,分别占53.27%和52.47%。通过对γ-PGA降解酶系蛋白结构的分析,为日后有效控制γ-PGA合成及相关研究提供参考和理论依据。

肺移植术后需要临床干预的气道狭窄患者生存结局的影响因素

目的分析肺移植术后需要临床干预的气道狭窄患者生存结局的影响因素。方法回顾性分析肺移植术后需要临床干预的66例气道狭窄患者的临床资料。采用单因素和多因素Cox回归模型分析所有气道狭窄患者和早期气道狭窄患者生存结局的影响因素,采用Kaplan-Meier法计算总生存率并绘制生存曲线。结果66例气道狭窄患者,中位无气道狭窄时间为72(52,102)d,27%(18/66)发生中心气道狭窄,73%(48/66)发生远端气道狭窄。术后机械通气时间[风险比(HR)1.037,95%可信区间(CI)1.005~1.070,P=0.024]和手术类型(HR 0.400,95%CI 0.177~0.903,P=0.027)均与肺移植术后气道狭窄患者的生存结局存在相关性,术后机械通气时间越长,受者死亡风险越高;接受双肺移植的气道狭窄患者的总生存率优于单肺移植。在亚组分析中,3级原发性移植物失功(PGD)(HR 4.577,95%CI 1.439~14.555,P=0.010)和免疫抑制药(HR 0.079,95%CI0.022~0.287,P<0.001)与肺移植术后早期气道狭窄患者生存结局均存在相关性;无3级PGD的肺移植术后早期气道狭窄患者的总生存率优于有3级PGD的患者,使用他克莫司的肺移植术后早期气道狭窄患者的总生存率优于使用环孢素的患者。结论术后机械通气时间长、单肺移植手术方式、3级PGD和使用环孢素可能影响肺移植术后气道狭窄患者的生存。

山西地震预警站网数据质量评估

秒级地震预警信息发布和分钟级地震烈度速报服务要求高密度的预警台站分布及高质量的预警站网实时波形记录。面对数量庞大的预警台站,仅依靠人工监测方式难以第一时间发现波形异常台站,无法保证站网的观测数据质量。以在网运行的山西预警基准站、基本站、一般站的连续波形记录为基础,分别采用噪声功率谱分析法及以加速度噪声峰值PGA、速度噪声峰值PGV和位移噪声峰值PGD为指标评估山西预警站网三类站点的噪声水平,并用噪声功率谱面积占比法定量评估三类站点噪声水平。根据评估结果,对波形异常的站点进行排查处置,有助于台网运维人员及时发现异常站点及采取有效措施排除异常,提升站网观测数据质量及预警能力。

前列腺素D2调控自噬影响胃癌干细胞的干性

目的:探究前列腺素D2(Prostaglandins D2,PGD2)对胃癌干细胞(gastric cancer stem cells,GCSCs)干性的影响及机制。方法:通过无血清培养法富集7901‐GCSCs;然后通过流式细胞术检测无血清培养的7901‐GCSCs干性标志物CD44的阳性率;通过干细胞成球实验检测不同浓度PGD2(2.5、5、10)μg/mL刺激后的成球能力,并采用Western blot实验检测不同浓度PGD2刺激后干性相关指标(OCT4、CD44)和自噬相关蛋白(LC3、Beclin‐1)的表达。采用Western blot实验检测不同浓度CQ(2.5、5、10)μmol/L刺激后自噬相关蛋白的表达。通过Western blot实验检测PGD2以及PGD2+CQ处理后自噬相关蛋白(LC3、Beclin‐1)和干性相关指标(OCT4、CD44)的蛋白表达。结果:流式细胞术结果显示,与胃癌细胞SGC‐7901相比,无血清培养的7901‐GCSCs中CD44阳性率表达增加(P<0.05)。干细胞成球实验结果表明,与DMSO组相比,PGD2组中7901‐GCSCs的成球能力明显减弱(P<0.05)。Western blot结果显示,与DMSO组相比,PGD2组中7901‐GCSCs的干性相关指标(OCT4、CD44)蛋白表达下调(P<0.05),而自噬相关蛋白(LC3、Beclin‐1)表达增加(P<0.05)。与DMSO组相比,CQ组中自噬相关蛋白(LC3、Beclin‐1)表达降低(P<0.05)。Western blot结果还显示,与DMSO组相比,PGD2+CQ组中细胞自噬相关蛋白以及干性相关指标表达并无明显变化,提示CQ可阻断PGD2对7901‐GCSCs的干性抑制作用。结论:PGD2可能通过调控自噬影响7901‐GCSCs的干性。

Prostaglandin D2 regulation of autophagy affects stemness of gastric cancer stem cells

Objective:To explore the effect and mechanism of prostaglandins D2(PGD2)on the stemness of gastric cancer stem cells(GCSCs).Methods:7901-GCSCs were enriched by serum-free culture method;then the positivity rate of CD44,a stemness marker,was detected by flow cytometry in serum-free cultured 7901-GCSCs;the sphere-forming ability was detected by the sphere-forming assay after stimulation with different concentrations of PGD2(2.5,5,10)μg/mL,and the expression of stemness-related indicators(OCT4,CD44)and autophagyrelated proteins(LC3,Beclin-1)after PGD2 stimulation was detected by the western blot assay in different concentrations.The expression of stemness-related indexes(OCT4,CD44)and autophagy-related proteins(LC3,Beclin-1)were detected by Western blot assay after stimulation with different concentrations of PGD2.The expression of autophagy-related proteins after stimulation with different concentrations of CQ(2.5,5,10)μM was detected by Western blot experiment.The protein expression of autophagy-related proteins(LC3,Beclin-1)and stemness-related indexes(OCT4,CD44)was detected by Western blot experiment after PGD2 as well as PGD2+CQ treatment.Results:Flow cytometry results showed that the expression of CD44 positivity was increased in serum-free cultured 7901-GCSCs compared with gastric cancer cells SGC-7901(P<0.05),which fulfilled the needs of subsequent experiments.The results of stem cell spheroid formation assay showed that the spheroid formation ability of 7901-GCSCs in the PGD2 group was significantly weakened compared with that of the DMSO group(P<0.05).Western blot results showed that the protein expression of stemness-related indexes(OCT4,CD44)was down-regulated in the 7901-GCSCs in the PGD2 group compared with that of the DMSO group(P<0.05),and the expression of autophagy-related proteins(LC3,Beclin-1)expression increased(P<0.05).Compared with the DMSO group,the expression of autophagy-related proteins(LC3,Beclin-1)was decreased in the CQ group(P<0.05).Western blot results also showed that the expression of cellular autophagy-related proteins and stemness-related indexes in the PGD2+CQ group was not significantly changed compared with that of the DMSO group(ns:the difference was not significant),suggesting that the CQ could block the effect of PGD2 on the expression of stemness markers in 7901-GCSCs.7901-GCSCs stemness inhibition.Conclusion:PGD2 may affect the stemness of 7901-GCSCs by regulating autophagy.

Lipocalin型前列腺素D合成酶研究进展:基因结构和理化性质

Lipocalin型前列腺素D合成酶 (L PGDS)定位于人 9号染色体 (9q34 2～ 34 3)和鼠 4号染色体上 ,在单倍体基因组中为单一拷贝基因。L PGDS的结构基因约 3 6kb ,由 7个外元和 6个内元组成 ,鼠、人L PGDS结构基因与Lipocalin家族成员的结构基因十分类似。L PGDS基因启动子中心区较小 ,有一些功能尚未确定的特殊序列 ;启动子远端有甲状腺激素应答元件 ,可接受甲状腺激素的调控。L PGDScDNA有两种 ,其存在的意义尚不清楚。L PGDSmRNA编码 190个氨基酸 ,其在转运粗面内质网和高尔基复合体期间被糖基化 ;成熟L PGDS具有一定量的糖类和复合型寡糖结构 ,由 8个或 9个 β片层结构组成特定的空间结构。L PGDS代谢快速 ,主要在肝内代谢。L PGDS为一双功能蛋白 ,不仅可催化PGH2 转变为PGD2 ,亦有运输亲脂 /疏水物质的能力。

前列腺素D_2及其受体与哺乳动物生殖

前列腺素D2 (PGD2 )是前列腺素 (PGs)家族成员之一 ,广泛分布于各种哺乳动物组织中 ,并发挥多种生理功能。PGD2 可以促进睡眠、诱导过敏反应、抑制血小板凝集及松弛平滑肌等 ,并且在生殖系统中起重要作用。机体中存在生化和免疫功能截然不同的两类前列腺素D合成酶 (PGDS) :脑型PGDS(L PGDS)和生血型PGDS(hPGDS)。生殖系统中 ,L PGDS主要存在于雄性生殖道 ,可能在睾丸发育、精子发生、精子成熟以及血 睾和血 附睾屏障等方面发挥重要作用。hPGDS在妊娠时期的子宫内膜和胚胎滋养层中表达 ,由其产生的PGD2 可能通过DP和CRTH2两种受体来维持妊娠。此外 ,PGD2

归脾安神颗粒对失眠模型大鼠PGD2表达的影响

目的运用中医辨证论治,对疾病进行整体分析并作理论指导,探讨归脾安神颗粒治疗失眠的临床疗效,更进一步的深入了解归脾安神颗粒发挥药效的具体作用机制。方法选用清洁的wistar大鼠,并经过处理后制成失眠大鼠模型,然后将失眠大鼠模型随机分成失眠模型组、归脾安神颗粒低、中、高3个剂量组、阳性对照(枣仁安神胶囊)组,并设置空白对照组,各18只。观察戊巴比妥钠翻正实验对大鼠睡眠潜伏期及睡眠总时间的影响。采用酶联免疫法观察激素PGD2的含量,采用荧光定量PCR检测PGD2 mRNA、L-PGDS mRNA、DPR mRNA的表达。结果归脾安神颗粒可增加失眠大鼠模型的总睡眠时间,并且可以提高失眠模型大鼠下丘脑PGD2含量及PGD2 mRNA、L-PGDS mRNA、DPR mRNA的表达的作用。结论归脾安神颗粒能够改善失眠模型大鼠的睡眠,延长总的睡眠时间。药效发挥机理基本确认为通过干预失眠模型大鼠下丘脑激素而发挥改善睡眠的作用。

人Lipocalin型前列腺素D合酶的克隆表达及其抗体制备

目的 研究人Lipocalin型前列腺素D合酶 (L PGDS)的编码蛋白质在大肠杆菌中的表达 ,进一步制备抗L PGDS编码蛋白质的多克隆抗体。方法 用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法克隆L PGDS基因蛋白编码序列。构建该基因的表达质粒 ,在大肠杆菌中诱导表达 ,SDS PAGE分析表达的蛋白质。用RediPackGST亲和层析柱纯化的蛋白质免疫BALB/c小鼠制备多抗。结果 RT PCR所分离的L PGDS基因蛋白编码序列 ,经测序证明与基因库所报道的L PGDS的基因序列完全一致。SDS PAGE分析证实该基因编码的蛋白质在大肠杆菌中表达 ,并获得效价为 1∶6 40 0的多克隆抗体。结论 L PGDS基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达 ,并能获得抗L PGDS基因编码蛋白质的多克隆抗体 。

RGDS肽对晶状体上皮细胞与细胞外基质蛋白粘附作用的影响

目的 探讨纤维连接蛋白、 型胶原蛋白对晶状体上皮细胞粘附的影响 ,研究Arg-Gly-Asp-Ser( RGDS)肽抑制晶状体上皮细胞与基质蛋白粘附的作用。方法 应用MTT法观测纤维连接蛋白、 型胶原蛋白对体外培养的牛晶状体上皮细胞的粘附作用 ,其次测定 RGDS肽对牛晶状体上皮细胞与细胞外基质蛋白粘附和细胞增殖的影响。结果 牛晶状体上皮细胞能够粘附到包被有不同浓度的纤维连接蛋白、 型胶原蛋白培养板表面上 ,呈现浓度效应特点 ;RGDS肽能够抑制牛晶状体上皮细胞在基质蛋白上的粘附。结论 纤维连接蛋白、 型胶原蛋白能够介导晶状体上皮细胞粘附到后囊上 ,在后囊混浊发生过程中起到重要的促进作用 ;在细胞水平上证实了 RGDS肽通过竞争细胞外基质蛋白与晶状体上皮细胞表面的整合素受体结合 ,阻止细胞粘附和增殖 ,具有潜在的防治后囊混浊的作用。

PGD2-DP1受体途径在人腹主动脉瘤形成中的作用

目的了解前列腺素D2（prostaglandin D2，PGD2）-DPI受体途径相关的酶前列腺素G／H合成酶（cyclooxygenase，COX）-1、COX-2和脂质运载蛋白型前列腺素D合成酶（lipocalin—type prostagladin Dsynthase，L—PGDS）及DPI受体在人腹主动脉瘤（abdominal aortic aneurysm，AAA）组织中的表达定位，分析其与人AAA直径及破裂的相关性，探讨PGD2-DPI受体途径对人AAA的血管平滑肌细胞表型变异及炎性细胞趋化的影响。方法采用免疫组化及免疫荧光染色方法，检测已破裂、未破裂AAA组织和正常胸内动脉组织COX-1、COX-2、L—PGDS及DPI受体表达，利用RT—PCR方法检测人AAA组织中COX-1、COX-2、L—PGDS及DPI受体mRNA表达，使用Westernblot方法检测L—PGDS及DPI受体蛋白的表达，结合临床资料记录的AAA直径和是否破裂进行相关性分析。结果COX-1、COX-2、L—PGDS及DPI受体表达于人AAA组织的结构性细胞和炎性细胞，L—PGDS的表达量与AAA的直径和破裂呈负相关，COX-2的表达量与AAA的直径呈正相关。结论人AAA中存在PGD2-DPI受体途径相关的酶及受体表达，且COX-2的表达量与AAA直径相关，L—PGDS表达量与AAA直径和破裂相关。

载脂蛋白A-Ⅰ(apoA-Ⅰ)促进单核细胞源性巨噬细胞产生前列腺素E_2(PGE_2)和前列腺素D_2(PGD_2)

目的探讨人单核细胞THP-1源性巨噬细胞产生的Lipocalin型前列腺素D合酶(lipocalin typeprostaglandin D synthase,L-PGDS)、前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)和前列腺素D2(PGD2)与载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,apoA-Ⅰ)抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)作用之间的关系。方法采用MTT法确定合适的给药浓度。用不同浓度(0、12.5、25、50、100和200μg/mL)apoA-Ⅰ处理体外培养的THP-1细胞源性巨噬细胞24 h后,逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)检测L-PGDS mRNA表达的变化,酶联免疫测定法(ELISA)检测PGE2和PGD2蛋白表达的变化。结果 apoA-Ⅰ处理24 h的巨噬细胞中L-PGDS mRNA、PGE2和PGD2蛋白的表达均显著高于未用apoA-Ⅰ处理的巨噬细胞(P均<0.001);apoA-Ⅰ浓度为50μg/mL时,作用效果最明显。结论 apoA-Ⅰ的抗AS作用可能与上调THP-1细胞源性巨噬细胞中L-PGDS mRNA以及PGE2和PGD2蛋白的表达有关。

基于HAZUS平台的中国公路桥梁震害评估模型研究

我国目前尚缺乏合理有效的公路桥梁震害评估模型。为促进我国公路桥梁震害评估系统的发展,基于HAZUS软件中使用的桥梁震害评估模型,对中国公路桥梁进行抗震等级分类,分别以1.0s时的谱加速度、地面峰值加速度和地面永久变形为指标,给出每类桥梁的震害评估模型参数,形成一个初步适用的中国公路桥梁震害评估模型。利用汶川地震后四川地区公路桥梁震害数据对该模型进行验证,结果表明该模型能较为准确地预测震害统计结果,从而证明该模型的合理性和适用性,可以为我国公路桥梁震害评估系统的发展提供一定的借鉴。

应用G6PD/6PGD比值法检测育龄夫妇6-磷酸葡萄糖脱氢酶

目的 了解佛山地区育龄夫妇的 6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏症的发生率。方法 应用 G6PD/6PGD比值法检测 80 5 7例育龄夫妇的 G6PD缺乏。结果 40 0 8例男性受检者中 ,G6PD缺乏的 2 2 7例 ,40 4 9例女性受检者中检出 1 46例 ,检出率分别是 5 .66%和 3.5 7% ,总检出率为 4.63%。结论 佛山地区G6PD缺乏症有较高的发生率。在育龄夫妇中进行 G6PD缺乏症的筛查 ,并及早采取措施 ,是减轻新生儿病理性黄疸发生率和核黄疸发生率的有效途径。比值法简单、快速、较准确 ,是

胚胎植入前遗传学诊断10个周期的临床分析

目的:初步探讨使用荧光原位杂交(FISH)方法对染色体异常患者进行胚胎植入前遗传学诊断(PGD)的临床意义。方法:7对不孕夫妇采用长方案控制性超排和卵胞浆内单精子注射,受精后d3胚胎活检、卵裂球固定和FISH,d4或d5择合适胚胎移植。结果:7对夫妇共进行10个PGD周期。获卵251个,可供活检胚胎133个,活检卵裂球207个,胚胎活检成功率为96.2%(128/133)。128个成功活检胚胎的197个卵裂球,其单细胞固定率为93.9%(185/197),FISH信号率为90.8%(168/185)。10个周期共移植22个胚胎,3例获得妊娠,并均足月分娩健康婴儿,其中1例孕妇平衡易位携带者于孕中期时,羊水核型分析为平衡易位携带者。结论:应用FISH方法进行PGD,是遗传病高危夫妇预防流产和染色体异常患儿出生的有效手段。

民猪PGD和LDHA基因的表达与冷诱导研究

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因(6-phosphogluconate dehydrogenase,PGD)是戊糖代谢途径中的一个关键酶,乳酸脱氢酶A(Lactate dehydrogenase A,LDHA)是动物体内参与糖酵解的重要酶类之一。为了探讨PGD和LDHA基因在民猪抵御寒冷气候的过程中是否起着一定的生物学作用,研究采用RT-PCR和Real-time PCR的方法,分析了这2个基因在民猪大肠,腿肌、肺、脂肪、心脏、脾脏和肝脏的表达情况以及冷诱导后在腿肌的表达变化情况。结果表明,PGD基因在所检的7个组织内均高水平表达,冷诱导后表达水平显著上升(P<0.05),LDHA基因在所检的7个组织中也均有表达,冷诱导后表达水平出现显著下降(P<0.05)。

双重套式PCR对不同取样胚胎性别鉴定灵敏度测试

目的 :测定双重套式PCR微量扩增体系的灵敏度 ,为附植前遗传学诊断 (PGD)、家畜胚胎性别鉴定等提供技术保障。方法 :以桑椹胚卵裂球为模板进行扩增 ,建立昆明白小鼠特异的SRY ZFX双重套式PCR性别鉴定体系。按卵裂球数量的不同分为五组 ,对应的卵裂球个数分别为 1、2、3、4、5及以上。根据有效扩增结果得出双重套式PCR的灵敏度。结果 :第 1组 (卵裂球个数为 1 ) ,有效检出率为 85 % ( 34 /40 ) ,污染率为 7 5 % ( 3 /40 ) ,漏检率为 7 .5 % ( 3 /40 )。随着卵裂球个数的增多 ,有效检出率逐渐升高 ,而污染率和漏检率则呈逐渐下降趋势。第 5组 (卵裂球达到 5及以上 ) ,有效检出率达到 1 0 0 % ,漏检率为 0。对于第 2、3、4、5组而言 ,有效检出率及漏检率各组间并无显著差异 (P >0 . 0 5 ) ;而第一组与其它各组间 ,有效检出率及漏检率存在显著差异 (P <0 .0 5 )。结论 :双重套式PCR可以有效扩增基因组DNA量约为 1 2pg的模板 ,且扩增片段为单拷贝片段。

PGD血小板细菌污染检测系统效果的评价

目的评价PGD检测系统用于混合血小板制品细菌污染检测的效果。方法分别将配制后经浓缩血小板稀释为101、103和105CFU/ml的大肠埃希菌和表皮葡萄球菌菌悬液进行PGD检测限的评估;将上述菌株分别接种于浓缩血小板中制成菌液浓度为101、103CFU/ml的模拟细菌污染浓缩血小板,经22℃振荡保存24、72、120 h后分别用PGD法和Bact/ALERT法进行细菌检测,比较2种方法的细菌污染检测限和阳性反应时间。结果 PGD法对大肠埃希菌的检测限为105CFU/ml,表皮葡萄球菌为103CFU/ml;将103CFU/ml的大肠埃希菌和表皮葡萄球菌分别接种到浓缩血小板,24 h后PGD检测均为阴性,72 h后均为阳性,而Bact/ALERT法检测在10 h均呈阳性反应;将105CFU/ml的大肠埃希菌和表皮葡萄球菌接种浓缩血小板4 h后PGD检测均为阳性,Bact/ALERT法在3—6 h内均呈阳性反应。结论 PGD检测系统对血小板细菌污染的检测限为(103—105)CFU/ml,适用于医院输血部门在血小板输血前的快速细菌检测。

G6PD/6PGD比值法和高铁血红蛋白还原试验检测G6PD缺陷症的比较

广东省是地中海贫血(地贫)和G6PD缺陷症的高发区,地贫和G6PD缺陷症的发生率分别是9.54%和10%,因此,地贫复合G6PD缺陷的患者在临床上并不少见,为求较准确的实验诊断,我室用G6PD/6PGD比值法和高铁血红蛋白还原试验(改良法)(MetHbRT)同时检测965例并进行比较。

近断层地震动速度、位移峰值衰减规律的研究

在全球范围内选取6.0≤Mw≤7.6、震源深度H≤20km且断层距df≤40km的地震动速度和位移峰值数据,进行分组统计分析,确定了PGV和PGD的近断层研究区域分别为20km和15km。认为两水平分量为2条独立数据,在各自研究区域分别得到由366条PGV和265条PGD数据组成的数据库;其中水平方向分为硬土和软土2类场地,竖向只考虑土层场地,利用作者前文已提出的近断层地震动衰减模型和最小二乘法进行数据拟合分析,得到PGV和PGD随断层距和震源深度变化的衰减曲面,分析了水平、竖向以及竖向与水平比值的衰减规律。