用SDS—PAGE研究NaHCO_3处理后西伯利亚蓼不同部位蛋白表达的变化

利用酚抽提法分别提取对照、3%NaHCO3处理 5d和 1 0d的西伯利亚蓼地茎、茎和叶部蛋白 ,用十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS—PAGE)和分析软件 (Labwork 3.0 )对提取蛋白进行分离和定量分析。结果表明 ,地茎蛋白图谱在 34.1和 2 5 .0× 1 0 3D位置处出现了两条明显受正向调控的蛋白条带 ,茎部蛋白图谱在 5 8.1× 1 0 3D、47.8× 1 0 3D和 9.6× 1 0 3D位置处出现三条正向调控的条带 ,叶组织蛋白图谱在 2 5 .0× 1 0 3D处出现一受正调控的条带。除地茎和叶组织在 2 5 .0× 1 0 3D处同时出现受正向调控的蛋白条带外 ,盐处理后其它组织间表达受正向调控的蛋白条带间存在差异 。

藏酋猴毛干DNA的3种提取方法

为寻求一种从藏酋猴毛干中提取总DNA的有效方法,从一藏酋猴个体背部剪取数量不等的毛干样品(不含毛囊),经蛋白酶K消化后,分别采用高盐沉淀抽提法、酚氯仿抽提法、纳米磁珠抽提法分离获得用于PCR扩增的模板DNA,通过紫外分光光度计测定OD值并计算出质量浓度,同时进行琼脂糖凝胶电泳和PCR扩增检测,分析3种方法提取藏酋猴毛干DNA的质量差异。每处理设置10个重复。结果表明,纳米磁珠法提取藏酋猴毛干中DNA是一种快捷、简便、经济、高效、安全的有效方法;进行毛发取样时以5～10根较为合适。

酚/氯仿法和盐析法提取人类外周血基因组DNA方法的比较

目的比较两种不同方法提取的基因组DNA的纯度、产量和后续实验效果。方法采用酚/氯仿法和盐析法两种方法直接从全血中提取基因组DNA,并采用电泳、PCR和基质支持的激光释放/电离飞行时间质谱分析(MALDI-TOF MS)方法进行检测。结果酚/氯仿法提取的基因组DNA纯度高于盐析法(P<0.001),但两组纯度平均值都高于1.80;没有发现两种方法提取的DNA浓度存在差异(P=0.819)。两组DNA在电泳中都没有出现明显拖尾现象,均很容易扩增出胰岛素诱导基因2片段,并且在MALDI-TOF MS检测中,两组DNA样本结果没有明显差异。结论酚/氯仿法和盐析法提取的基因组DNA质量无明显差异。相比酚/氯仿法,盐析法能简便、快速、无毒地进行DNA提取,适合于大规模的分子生物学实验。

三种提取卤虫基因组DNA方法的比较

以盐生动物卤虫为材料,分别用氯化钠高盐沉淀法和两种酚/氯仿抽提法对卤虫基因组DNA进行了提取;并用紫外光分光光度计法、琼脂糖电泳法和PCR对所提取的DNA进行检测,将它们在DNA的产量、质量等方面的优缺点进行比较,通过三种方法的比较,认为改进的酚-氯仿法是卤虫基因组DNA的最佳提取方法.

红碱淖遗鸥血液基因组DNA提取方法的比较研究

采用酚-氯仿法和改良Miller盐析法从红碱淖遗鸥冷冻血液样品中提取基因组DNA,以筛选遗鸥冷冻血液DNA的最佳提取方法。结果显示:酚-氯仿法琼脂糖凝胶电泳DNA样品亮度和清晰度较高,条带较粗,纯度较高;而改良Miller盐析法提取基因组DNA,获得率较低,并且难以去除杂质;酚-氯仿法提取时,酶解16 h比酶解10 h的DNA提取效果好,说明在一定时间范围内,延长酶解时间可有效地提高DNA提取效果。上述结果提示,酚-氯仿法对遗鸥冷冻血液基因组DNA提取的效果优于改良Miller盐析法。

亚铜盐催化碱性水解法合成氟代苯酚及其工艺优化

1-卤代氟苯在亚铜盐催化下发生碱性水解反应,生成氟代苯酚,以单因素结合正交实验,对合成工艺进行优化。结果表明,合成五氟苯酚的最佳工艺条件为:全氟苯93.0 g(0.5 mol),Raney Ni 5.0 g,Cu2O 7.5 g,90%工业KOH 65.0 g,水200 g,环丁砜60.0 g,转速500 r/min,120℃反应8 h,收率达到80.0%。经过非均相反应、脱色、除氟、分子精馏等工艺,五氟苯酚达到质量标准:含量≥99.8%,单杂含量≤0.1%,掉氟物≤0.01%,水分≤100 mg/kg,溶剂残留≤100 mg/kg,符合液晶中间体和医药中间体的质量要求。

提取山羊免疫组织总RNA两种方法的比较研究

采用山羊不同免疫组织作为原料,以氯化钠-柠檬酸钠法与苯酚-稀盐法进行RNA提取的比较;分别确定两种方法对于不同免疫组织(肝脏、脾脏和淋巴)最大提取率分别为0.156%、0.150%、0.182%和0.142%、0.127%、0.164%。采用华特生公司蛋白质浓度检验试剂盒BCA法测定蛋白含量。定磷法测DNA含量,地衣酚显色法测RNA含量,样品用紫外分光光度计进行扫描,苯酚-稀盐法提取淋巴组织,RNA紫外吸收OD260:OD280=2.042077;氯化钠-柠檬酸钠法提取淋巴组织RNA紫外吸收OD260:OD280=2.1098。

几种偶氮化合物的合成

以芳胺和酚为原料,用重氮盐耦合法合成了3种偶氮化合物,并用红外光谱表征了其结构,对其合成条件、酸碱变色性及光学性能进行了研究。结果表明:合成的化合物结构与目标产物一致,合成该化合物较为适宜的条件是:低温(<5℃),弱碱性;这3种化合物易溶于水,具有良好的酸碱变色性,且可与一些金属离子络合,表现出良好的光学性能,是一类性能优良的水溶性偶氮化合物。

碱盐法提取煤加氢液化轻油中的低级酚

通过改进传统的碱洗脱酚和硫酸解析回收粗酚的方法,利用碱盐代替强碱、CO2代替硫酸分离回收煤液化轻油中的酚类化合物。通过正交试验的方法获得了试验参数对煤液化油中酚类分离回收效率影响的主次顺序依次为:碱盐浓度>碱洗温度>CO2过量程度>酸解温度,且最优工艺条件为:碱洗温度为60℃,碱性盐质量分数为30%,酸化温度为60℃,CO2过量4倍。同时分析了最优条件下回收得到的粗酚中低级酚的种类及组分含量。

烟粉虱全基因组DNA四种提取方法的比较

获得大量、高质量的全基因组DNA是在DNA水平上研究许多生物的分子机制的基本前提。微小昆虫由于其体型微小,单头提取DNA浓度低,无法满足部分试验所需。为寻找一种方便、快捷、高效的全基因组提取方法,参考国内外单头微小昆虫基因组DNA提取常用方法,以烟粉虱为研究材料,选取醋酸钾(KAc)法、盐析法、氯仿-异戊醇法和苯酚提取法四种方法进行多头烟粉虱的全基因组DNA提取。通过微量核酸蛋白分析仪、基因组DNA直接琼脂糖凝胶电泳、甲基化敏感扩增多态性(Methylation sensitive amplification polymorphism,MSAP)引物扩增产物的琼脂糖凝胶电泳对DNA样品进行检测,比较提取DNA的产量、质量,并综合分析各提取方法所需时间及所用试剂的毒性大小。结果表明,盐析法提取的DNA平均浓度为521 ng/μL,纯度能满足分子检测要求,用MSAP引物能得到较好的扩增结果,相比其它方法,盐析法更简便、快速且无毒。因此盐析法是多头烟粉虱全基因组DNA提取的最佳方法。

半夏总蛋白提取及其动态变化研究

目的优选出半夏总蛋白提取的最适方法并研究不同生长时期总蛋白量及成分的变化,为半夏药用成分的监控及合理采收提供科学依据。方法采用丙酮沉淀法、95%(NH4)2SO4盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取半夏总蛋白,筛选半夏总蛋白提取的最佳方法。分别于半夏出芽期、全苗期、珠芽期、佛焰苞期及倒苗期采集样品,分为新鲜组和干燥处理组,提取样品总蛋白,进行SDS-PAGE电泳检测及Bradford浓度测定。结果丙酮沉淀法、95%(NH4)2SO4盐析法、TCA-丙酮法和Tris-饱和酚法提取的半夏总蛋白量分别为0.369、0.678、1.082、0.493 mg/mL;新鲜半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期4.53 mg/g、全苗期2.28 mg/g、珠芽期2.79 mg/g、佛焰苞期7.61 mg/g、倒苗期10.21 mg/g;干燥半夏5个不同生长时期总蛋白量占块茎的质量分数分别为出芽期31.85 mg/g、全苗期18.52 mg/g、珠芽期42.08 mg/g、佛焰苞期28.56 mg/g、倒苗期56.84 mg/g;新鲜半夏块茎中蛋白含有15条蛋白带,干燥处理半夏块茎中蛋白含有5条蛋白带。结论 TCA-丙酮法是半夏总蛋白提取的最佳方法,不同生长时期的半夏块茎中蛋白成分各异,倒苗期总蛋白量最高。