利用脂肪酸合成酶抑制剂和磷酸香草醛反应筛选高产油脂酵母菌

利用80MeV/u碳离子束对产油菌株粘红酵母进行辐照诱变,采用含有脂肪酸合成酶抑制剂cerulenin的培养基进行高产油脂突变株的初筛,并通过磷酸香草醛反应和氯仿甲醇抽提法对初筛菌株油脂含量进行分析。结果表明,cerulenin对酵母细胞生长有较好的抑制作用,浓度为8.96×10?6mol/L时,抑制率达98%以上,可作为筛选浓度。通过磷酸香草醛反应法对初筛菌体油脂含量进行定量分析,发现菌体油脂含量与该反应在530nm处的光吸收成线性正相关,初筛菌株的正突变率达65%以上。该方法快速方便,是一种较为理想的产油酵母筛选方法。通过该方法,筛选出了2株油脂含量高于对照90%以上的突变株。

磷酸香草醛法测定不同培养条件下四尾栅藻(Scenedesmus obliquus)总脂含量

验证了磷酸香草醛反应在不同氮(0.2、2、20、40 mg/L)、磷(0.1、1、10、20 mg/L)质量浓度培养条件下测定四尾栅藻总脂含量的可靠性。结果表明:不同氮、磷质量浓度条件下栅藻总脂含量和磷酸香草醛测定吸光度之间均呈显著的线性回归关系(不同氮质量浓度条件:R=0.997,P=0.003;不同磷质量浓度条件:R=0.994,P=0.006),在不同氮、磷质量浓度培养条件下该方法的测定结果准确可靠,可以用于栅藻的总脂含量测定。磷酸香草醛反应的显色强度可能与脂肪酸的饱和度有关,为保障该方法测定总脂含量的准确性,用该方法估算总脂含量须在氮、磷质量浓度变化范围内进行预先验证。

DHA生产菌的原生质体诱变

对1株DHA生产菌裂殖弧菌Schizochytrium sp.的原生质体化及再生条件进行了优化研究,并在此基础上利用代谢途径分析原理,结合紫外诱变,筛选获得DHA的高产菌。实验结果表明:以0.2mol/L磷酸盐缓冲液作为渗透压调节剂,0.3g/L蜗牛酶在30℃下作用20min,原生质体化率可达77.78%,再生率为0.57%。在此基础上,进行紫外诱变3min,获得了1株DHA高产菌Schizochytrium sp.HX-204M,其细胞干质量、脂肪酸产量较出发菌株分别提高了12.27%、13.76%,并且DHA占脂肪酸的百分含量提高了8.43%。