应用光敏生物素探针检测Vero细胞乙脑疫苗中细胞残余DNA

用国产光敏生物素,标记Veto细胞全DNA,通过与疫苗中同源DNA的狭缝杂交,检测Vero细胞乙脑疫苗中细胞残余DNA含量。检测灵敏度可达1pg。探针稳定长达一年。杂交反应特:异性高,结果重复性好。与同位素探针相比,生物素标记探针简便、经济、快速、稳定。由本法测得,Vero细胞乙脑粗制疫苗中,含DNA为200～400pg/0.5ml;超滤浓缩苗为4×10~4～6×10~6pg/0.5ml;通过柱层析和沉淀法提纯的疫苗则分别低于60pg/0.5ml和1pg/0.5ml。本法同样适用于传代细胞制备的其它生物制品中细胞残余DNA的检测。

用光生物素核酸探针检测牛传染性鼻气管炎病毒

用光生物素标记牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitisvirus,IBRV)9.6kb DNA片段做探针,可检测出10pg的IBRV DNA、1个TCID50的病毒和1～10个TCID50的实验感染牛精液。用核酸探针检测IBRV与分离病毒的符合率为84.4％。若将采集的样品在牛肾细胞上增毒一次,再抽提培养物的核酸,用核酸探针检测,则敏感性和符合率大为提高。

应用光敏生物素标记探针检测杂交瘤细胞中小鼠白血病病毒

采用BamHⅠ酶切和琼脂糖凝胶电泳技术，从重组质粒pSF11中回收5kb小鼠白血病病毒（MuLv）DNA片段，用光敏生物素标记制备DNA探针，采用斑点杂交法检测杂交癌细胞，McAb纯品以及SP2／0细胞中的MuLv。结果表明，此探针特异性好，灵敏度可达25pg。在检测的13株杂交瘤细胞和2株SP2／0细胞中分别有5株和1株为MuLv阳性，在McAb纯品中未查出MuLv。

光敏生物素标记流行性出血热病毒R22株M片段cDNA探针的研究

应用光敏生物素标记我国流行性出血热病毒R22株M片段R3克隆cDNA,制备出生物素化的cNNA探针。用此探针与流行性出血热病毒R22株和陈株进行斑点杂交,结果R3克隆与R22株和陈株均出现阳性杂交信号,而与单纯疱疹病毒、柯萨奇B组病毒和正常对照细胞组的杂交结果均为阴性。光敏生物素标记探针可检出10pg的cDNA,并用此方法检测TEHF病毒在感染乳鼠体内的分布情况。

光敏生物素标记IgG检测农产品重金属污染

重金属污染的植物体内会产生较高的金属硫蛋白(MT),实验以光敏生物素标记用MT免疫家兔产生的抗体,用碱性磷酸酶标记亲和素,对MT进行免疫印迹检测,方法简单准确,标记的IgG最低检出量为1 ng/mL。通过对天水秦城区不同地域采集到的16种农产品样本进行检测,其检测结果与样本中金属硫蛋白的含量测定结果一致。

光敏生物素标记核酸探针检测A群轮状病毒的研究

采用光敏生物素标记Ａ群轮状病毒（ＧＡＲＶ）全基因组ＲＮＡ，制备了ＧＡＲＶ群特异核酸探针，该探针与样品进行打点杂交，经亲和素－碱性磷酸酶（ＡＶ－ＡＰ）系统显色，可检出１００ｐｇ病毒ＲＮＡ序列。试验表明轮状病毒光敏生物素核酸探针具有特异、灵敏、稳定的特点，可用于ＧＡＲＶ的检测和进行基因相关性研究。

牛疱疹病毒Ⅳ型(DN-599株)DNA的限制性酶切位点图及重复序列分析

牛疱疹病毒Ⅳ型(BHV-4)DNA片段分别被重组到质粒pUC9或pBR322的EcoRI、Hind Ⅲ和BamHⅠ位点中,用光生物素(Photobiotin)标记这些重组质粒作为探针,分别与转移到硝基纤维素膜上的病毒DNA的EcoRⅠ、Hind Ⅲ和BamHⅠ片段进行杂交,根据杂交结果及克隆的BHV-4DNA片段的双酶切分析,画出了病毒DNA的EcoRⅠ、Hind Ⅲ和BamHⅠ位点图,井证明在病毒DNA的两末端含有多聚重复序列,左侧含12个重复单位,右侧含6个重复单位,两侧重复单位的排列方向相同,重复单位的大小为2.35kb。病毒DNA分子无任何异构体.

用斑点杂交法检测肾综合征出血热患者尿沉渣细胞中病毒核酸

用光敏生物素标记的肾综合征出血热(HFRS)病毒R22株M片段R3克隆cDNA探针检测HFRS患者尿沉渣细胞内的病毒核酸,共检测81份患者尿液标本,阳性率为65.4％,而正常人及其他疾病患者的55份尿液标本均呈阴性,病程第1—7日病毒核酸检出率为80.8％(21/26),在发病第22日以后有的(5/13)仍可检出。7份尿液标本同时用光敏生物素和x-^(32)P标记探针检测,均为4份阳性,本实验结果提示,光敏生物素标记的核酸杂交技术可作为HFRS早期诊断及流行病学调查之用。

光敏生物素标记犬细小病毒核酸探针的制备及其应用

将含有犬细小病毒2.0 kb DNA 克隆片段的重组质粒 pBI-264转化大肠杆菌 JF-803,扩增后用碱裂解法提取重组质粒,纯化后电泳,用冷榨法回收克隆片段。用光敏生物素分别标记重组质粒及克隆片段,制成重组质粒探针及克隆片段探针两种核酸探针,它们对犬细小病毒有相同的杂交特异性,检测灵敏度达 pg 水平,保存期至少8个月。检测25份犬粪样,阳性率为32%(8/25),而 HA-HI 试验为24%(6/25),两种方法的符合率为92%(23/25)。本试验从粪样直接提取病毒 DNA,用非放射性的光敏生物素标记探针检测,方法简便,可直接应用于兽医病毒学诊断。

用光生物素标记F20探针检测柑桔裂皮病类病毒

用光生物素标记Ｆ２０探针检测柑桔裂皮病类病毒陈纯贤，万蜀渊（武汉华中农业大学柑桔研究所４３００７０）关键词柑桔裂皮病类病毒，Ｆ２０探针，光生物素，斑点杂交核酸分子杂交技术因其灵敏度高、特异性强，也广泛用于病毒和类病毒的检测。最初，一般采用放射性同位素...

光敏生物素标记总DNA探针对大豆根瘤菌的检测

以光敏生物素标记慢生型大豆根瘤菌(Bradyrhizobium japonicum)USDA110总DNA作为探针,与快生型大豆根瘤菌杂交时,没有杂交斑点形成,而与慢生型大豆根瘤菌中的部分菌株能形成杂交斑点,表明该探针具有种和部分菌株特异性,用该探针与压碎的根瘤汁液进行DNA杂交,检测USDA110在不灭菌的盆栽土壤中的竞争结瘤能力,发现USDA110在大豆不同生育期的占瘤率为70%～90%。

光生物素标记抗体用于人心钠素基因表达的检测

光生物素与兔抗鼠IgG以不同克分子比在可见光照射下进行标记。标记抗体用于抗原的检测,敏感度可达62.5pg/2μl。用同样方法对大肠杆菌TAP106(pYX40)中心钠素的表达进行了检测,与(125)~Ⅰ标记的兔抗鼠IgG得到一致的结果。

新疆细粒棘球绦虫DNA限制性酶切片段长度多态性的初步分析

应用光敏生物素标记细粒棘球绦虫特异性DNA探针pEG18,对新疆5个不同地区绵羊、1例肝包虫病人、阿勒泰地区牛细粒棘球绦虫原头节以及羊源、牛源细粒棘球绦虫成虫DNA进行限制性酶切谱和Southern杂交分析。牛源、羊源样本经EcoRI酶切后产生的杂交图型基本上是一致的。BamHI酶切后产生的杂交结果,在新疆5个不同地区绵羊感染的细粒棘球绦虫没有发现差别,而人源和牛源细粒棘球绦虫DNA产生的杂交图型与绵羊源细粒棘球绦虫DNA产生的杂交图型大体上是一致的,但又存在着各自的差异。与绵羊样本相比,人源细粒棘球绦虫产生的杂交图型约在8.3kb处明显可见一条杂交带,而牛源细粒棘球绦虫约在3.5kb处有一条清晰的杂交带。这些差异的意义有待进一步研究。用光敏生物素代替同位素标记DNA探针,简便易行,稳定可靠,可取得满意的结果,在边远的地区是一种值得推广的方法。

光生物素探针对白血病患者c-myc和c-fos原癌基因表达水平的检测

用国产光生物素标记探针,经RNA-DNA斑点杂交技术检测了41例白血病患者中c-myc和c-fos原癌基因的RNA表达水平。c-myc和c-fos的强阳性表达率分别为82.8%和76.6%,c-myc在急性白血病和慢性粒细胞白血病急变时表达水平明显高于慢性粒细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病及对照组,化疗完全缓解后表达水平下降,而与FAB分型无关;c-fos在AML的M_4和M_5中表达水平明显增高。提示c-myc表达与细胞增殖潜能有关,能为诱导缓解治疗结果的预测提供有意义的临床和生物学方面的信息,c-fos反映细胞分化状态,可作为白血病亚型分类的辅助指标之一。同时,本研究还探讨了光生物素探针标记技术的优越性,操作简便,方法敏感,可代替放射性核素探针在一般实验室的常规实验和诊断之用。

长臂光敏生物素和光敏地高辛核酸探针检测医学真菌灵敏度的比较研究

建立应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针杂交。检测真菌的方法 ,并比较二者检测临床常见医学真菌的敏感性。设计并合成医学真菌通用引物 ,用PCR扩增白色念珠菌标准株的核糖体RNA基因 ,用长臂光敏生物素或光敏地高辛标记其纯化的扩增产物制备成相应的核酸探针 ,然后用上述两种探针对标本中的PCR扩增产物进行Southern杂交 ,检测医学真菌。通过用白色念珠菌感染大鼠 ,建立念珠菌病的实验动物模型 ,验证血培养法、PCR法和PCR扩增结合Southern杂交 ,检测真菌的敏感性。结果表明 ,这两种核酸探针可分别与白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等 9种真菌杂交呈阳性结果 ;与临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA杂交结果为阴性。利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增结合长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度 ,实验证明后者的敏感性最高。总之 ,应用长臂光敏生物素核酸探针和光敏地高辛核酸探针与标本PCR扩增物杂交 ,检测上述真菌既特异和敏感 ,又不需放射性同位素。光敏地高辛核酸探针检测医学真菌的灵敏度略高于长臂光敏生物素核酸探针。

用光敏生物素标记鸡传染性支气管炎病毒cDNA探针及其应用的研究

应用光敏生物素标记鸡传染性支气管炎病毒ｃＤＮＡ，制备核酸探针、经斑点杂交法和碱性磷酸酶显色后，探针同以ｃＤＮＡ为模板合成的ＰＣＲ产物及其重组子ｐＳＸＩＢＶＳ１均呈现强阳性的蓝色斑点，而与正常尿囊液、新城疫病毒和鸡败血霉形体无杂交。一个初诊为ＩＢ感染的田间病料与探针杂交阳性结果相符合。试验表明该ｃＤＮＡ探针是敏感和特异的检测方法。

应用长臂光敏生物素核酸探针检测医学真菌的研究

〔目的〕建立PCR结合长臂光敏生物素核酸探针杂交检测医学真菌的方法。〔方法〕首先合成医学真菌通用引物 ,用PCR扩增白色念珠菌 18SrRNA基因 ,用长臂光敏生物素标记纯化的扩增产物作为核酸探针 ,然后用此探针对PCR后的基因扩增产物进行Southern杂交检测医学真菌。通过用白色念珠菌感染人鼠 ,建立念珠菌病的实验动物模型 ,验证血培养法、PCR法和PCR扩增及Southern杂交检测医学重要真菌的敏感性。〔结果〕通用引物可以扩增白色念珠菌、热带念珠菌、新型隐球菌、黄曲霉菌、烟曲霉菌等 9种医学常见真菌的 18SrRNA基因 ,扩增片段长度为 62 1～ 687bp。此引物只扩增真菌DNA ,不扩增临床常见的细菌、病毒和哺乳动物组织细胞DNA。利用实验动物模型比较了血培养法、PCR法和PCR扩增及长臂光敏生物素核酸探针Southern杂交法检测真菌血症的灵敏度 ,实验证明后者的敏感性最高。〔结论〕本方法快速、敏感、不需放射性同位素 ,有较好的临床应用前景。

光敏生物素标记cDNA探针在肾综合征出血热实验诊断中的初步应用

本文用光敏生物素标记的R3 cDNA探针杂交检测了HFRS患者外周血淋巴细胞、血清和尿沉淀细胞中HFRS病毒核酸。结果42份淋巴细胞标本中30份为阳性,48份血清标本中有24份出现阳性杂交信号,81份尿沉淀细胞标本中53份为阳性,表明将此光敏生物素标记的cDNA探针用于HFRS实验诊断和致病机理的研究是可行的。

光敏生物素和^(32)P标记DNA打点杂交检测钩端螺旋体

应用光敏生物素和^(32)P标记黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体DNA(简称017DNA)作为探针,打点杂交检测问号状钩体。结果表明:两种探针均能检测不同群、型的问号状钩体DNA,最小检测量分别为5pg和1pg;与双曲钩体patoc型PatocⅠ株、细螺旋体属illini型3055株及其他致病菌和正常人血清未发现明显杂交信号。提示光敏生物素制备的017DNA探针可以用于检测钩体,也可应用于钩体病的早期诊断和流行病学调查。

光生物素标记Patoc 1株DNA探针鉴别双曲和问号钩端螺旋体的初探

本文以光生物素标记的双曲钩体Ｐａｔｏｃ１株全ＤＮＡ作为探针，对不同血清型的问号钩体与双曲钩体在硝酸纤维素膜上和微量反应板中进行ＤＮＡ－ＤＮＡ杂交试验。结果发现标记探针只能识别双曲钩体ＤＮＡ，而对问号钩体ＤＮＡ无一发生杂交，表明该探针具有高度特异性和敏感性，可用于鉴别双曲钩体和致病性钩体。