花粉管通道和农杆菌介导植酸酶基因phyC对桑树的遗传转化

植酸酶可以促进单胃动物利用饲料中的植酸磷。桑叶中的含磷量较高,培育转植酸酶基因的桑树品种有利于桑叶饲料的开发利用。构建含中性植酸酶基因phyC的植物表达载体pCAMBIA-2300-phyC,利用花粉管通道结合农杆菌介导的方法将phyC基因导入红果1号×育2号杂交桑种子,1 301粒杂交桑种子经卡那霉素抗性筛选和大田播种共获得154株桑苗,其中11株经PCR鉴定为阳性的phyC基因转化桑苗。该转基因方法具有操作简便、转化范围较广的特点,获得的转phyC基因桑树植株可作为饲料桑品种选育的素材。

植酸酶phyC基因表达载体的构建及其在E.coli中的表达

以phyC -PUC18-T为模板 ,扩增出枯草芽孢杆菌中性植酸酶phyC基因 ,克隆至T载体中 ,经酶切鉴定及序列测定后重组入谷胱甘肽S -转移酶融合表达载体pGEX - 4T - 1中 ,转化大肠杆菌JM10 9,重组质粒在宿主JM10 9中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下传代 4 5次基本保持稳定 ,0 1mMIPTG诱导后酶活测定结果表明 ,表达产物具有生物学活性。SDS -PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带 ,相对分子量 (Mr)为 6 9kD ,30℃诱导 3h后 ,表达的目的蛋白量占菌体总蛋白的 4 7 4 %。