普鲁兰酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

以普鲁兰酶生产真菌YBJ10-2基因组DNA为模板,PCR扩增出普鲁兰酶的结构基因,将此基因插入载体pPIC9K,构成重组质粒pPIC9K-Pullulanase,转化毕赤酵母SMD1168,并通过G418平板培养基筛选高拷贝转化子,普鲁兰酶表达并分泌到胞外。该酶的表达受甲醇的严格调控和诱导,摇瓶培养中,当甲醇达到最佳诱导浓度3%,酶的最高表达量可达225U/mL。该酶能够长时间保持稳定,并具有较高的酶活力。重组毕赤酵母遗传稳定性良好。