人胚胎生殖细胞的传代培养

目的探求人胚胎生殖细胞最适宜的传代时间及最佳的传代方法。方法取8周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养人胚胎生殖细胞,选择原代培养第8天和第16天的细胞,采用挑取传代法和消化传代法,其中的消化传代法采用三种不同的消化液进行传代培养,记录各代培养的细胞集落数。结果在原代培养第8天时,挑取传代法传2代后获得的细胞集落数减少;消化传代法传4代后获得的细胞集落数明显增多。原代培养第16天时未能传代培养,但却看到人胚胎生殖细胞集落的分化。结论人胚胎生殖细胞传代培养最适宜的传代时间为原代培养第8天,最佳的传代方法为消化传代法。

玉米提胚的研究

根据胚与胚乳悬浮速度和比重的差异进行气流悬浮提胚试验,提出了分级、风选提胚乳、浓缩胚、压胚的提胚工艺,并由此工艺得到了得率较高的纯净的玉米胚(胚中含胚乳小于5%)及胚乳(含胚率小于2%)。

C1型尼曼–匹克病小鼠雄性不育的睾丸病理研究

该文主要研究C1型尼曼–匹克病小鼠(Npc1–/–小鼠)雄性不育的睾丸病理变化,并进一步探讨Npc1基因对雄性不育的影响。随机选取P60的Npc1–/–和Npc1+/+雄鼠各12只,观察隐睾发生率;然后,随机选取P20、P40和P60的Npc1–/–和Npc1+/+雄鼠睾丸组织,统计睾丸重量并计算睾丸指数, HE染色观察生殖细胞层数并测量生精小管直径, PAS糖原染色观察生殖细胞周期并统计精母细胞在总细胞数中的相对百分比,油红O染色观察间质细胞的脂质存储;最后,随机选择P60的Npc1–/–和Npc1+/+雄鼠睾丸,通过TUNEL染色观察生殖细胞凋亡,并通过Western blot检测凋亡蛋白Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、p53、Bax和Bcl-2的表达水平。结果显示,与Npc1+/+雄鼠相比, Npc1–/–雄鼠均有隐睾发生,睾丸重量和睾丸指数均显著降低(P<0.05, P<0.001),生殖细胞层数不明显,生精小管管径显著减小(P<0.001),生精周期不规律且精母细胞数量显著减少(P<0.001),间质细胞的脂质存储显著减少(P<0.001);生殖细胞凋亡大幅增加(P<0.001), Cleaved-caspase-3、Cleaved-caspase-9、p53、Bax表达量显著升高(P<0.001),Bax/Bcl-2比率显著升高(P<0.001)。该文结果提示, Npc1基因突变导致隐睾、睾丸结构异常、间质细胞脂质储存减少及生殖细胞凋亡,因此, Npc1基因可能成为研究男性不育的新靶点。