山荷叶中木脂素成分的研究

从陕西产山荷叶(Diphylleia sinensis Li.)根茎中分得9个木脂素和1个黄酮化合物,通过光谱分析证明化合物Ⅸ为新木脂素,即苦鬼臼素-1-乙基醚(picropodophyllin-1-ethyl ether),其它化合物分别为鬼臼毒素(podophyllotoxin,Ⅰ)、异苦鬼臼酮(isopicropodophyllone,Ⅱ)、去氢鬼臼毒素(dehydropodophyllotoxin,Ⅲ)、山荷叶素(diphyllin,Ⅳ)、苦鬼臼素(picropodophyllin,Ⅴ)、鬼臼酯酮(podophyllotoxone,Ⅵ)、4′-去甲基鬼臼毒素(4′-demethylpodophyllotoxin,Ⅶ)、苦鬼臼素葡萄糖甙(picropodophyllin slucoside,Ⅷ)和山奈酚(kaempferol,Ⅹ)。其中化合物Ⅱ,Ⅵ,Ⅶ和Ⅷ为首次从山荷叶属植物中分得。

掌叶大黄悬浮培养细胞和根培养体系对鬼臼毒素的生物转化研究

目的:对鬼臼毒素进行生物转化研究。方法:利用已经建立的掌叶大黄细胞悬浮体系、根培养体系进行转化,色谱法分离化合物,波谱法鉴定转化产物的结构。结果:细胞悬浮体系使73.8%的鬼臼毒素发生了转化,根培养体系使56.3%的鬼臼毒素发生了转化。2种体系对鬼臼毒素的转化产物不同,前者转化生成鬼臼苦素,后者主要转化形成表鬼臼毒素和脱水鬼臼毒素。结论:鬼臼毒素对掌叶大黄细胞悬浮系统和根培养系统的pH无明显影响;2种掌叶大黄组织培养体系均能转化鬼臼毒素。

鬼臼苦素抗Ph^+急性淋巴细胞白血病细胞Sup-B15的作用及其机制

目的探讨鬼臼苦素(picropodophyllin,PPP)对Ph^+急性淋巴细胞白血病(Ph^+ALL)细胞Sup-B15的作用及其分子调控机制,为将PPP开发成为治疗Ph^+ALL药物提供理论依据。方法 MTS法检测PPP和格列卫(IM)对Sup-B15细胞增殖的影响;流式细胞术检测PPP和IM对Sup-B15细胞周期的影响;Western blot检测PPP对细胞增殖和周期相关蛋白表达,以及对IGF1R蛋白磷酸化和表达的影响。结果PPP和IM均呈时间和剂量依赖性关系抑制Sup-B15细胞的增殖,且相同剂量下PPP对细胞增殖的抑制作用均强于IM;PPP处理细胞12 h和24 h后G2/M期细胞比例显著升高,而S期细胞比例则相应减少;PPP能够上调p53和cyclin B1蛋白的表达以及抑制p21和c-myc蛋白的表达,但对IGF1R总蛋白表达水平和磷酸化水平均无明显影响。结论 PPP能有效抑制Sup-B15细胞增殖和诱导细胞发生G2/M期阻滞,其机制与上调p53和cyclin B1蛋白表达以及抑制p21和c-myc蛋白表达相关。

4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素及鬼臼苦素抑制肿瘤细胞生长作用研究

目的:探讨不同浓度4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素对宫颈癌细胞Hela和黑色素瘤细胞B16增殖的抑制作用;鬼臼苦素对Hela细胞、肝癌Hep G2细胞、肺癌A549细胞及骨肉瘤MG-63细胞增殖的抑制作用。方法:采用MTT法检测不同浓度的4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素及鬼臼苦素对以上多种癌细胞的抑制作用。结果:不同浓度4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素与对照组(0.1%DMSO)相比,对肿瘤细胞生长抑制率明显升高,均有显著性差异(P<0.05);不同浓度鬼臼苦素与对照组(0.1%DMSO)相比,对肿瘤细胞生长抑制率也明显升高,均有显著性差异(P<0.05)。结论:4’-去甲基-4’-氧-环丁甲酰基-去氧鬼臼毒素对Hela细胞和B16细胞增殖具有明显的抑制作用,鬼臼苦素对Hela、MG-63、Hep G2及A549细胞具有明显的抑制作用。

掌叶大黄细胞悬浮系统和根培养系统对鬼臼毒素的生物转化研究

目的对鬼臼毒素的生物转化进行研究。方法利用掌叶大黄细胞悬浮系统和根培养系统进行生物转化。采用色谱技术和波谱手段对转化产物进行分离鉴定。结果加入鬼臼毒素对掌叶大黄细胞悬浮系统和根培养系统的pH值无明显影响;两种组培系统均能转化鬼臼毒素。在本实验条件下,细胞悬浮系统使73.8%的鬼臼毒素发生了转化,根培养系统中使56.3%的鬼臼毒素发生了转化。两种系统对鬼臼毒素的转化产物不同,前者只转化生成鬼臼苦素,后者转化生成表鬼臼毒素等多种化合物。结论掌叶大黄细胞悬浮系统和根培养系统均能有效转化鬼臼毒素。

峨参提取物抗肿瘤活性及对细胞凋亡机制研究

目的:探讨5-(3-甲氧基-1-丙烯)-1,3-苯并二氧杂茂(13号)和鬼臼苦素(15号)抗Hep G2、A549、Hela及MG-63 4种肿瘤细胞活性和13号、15号对4种肿瘤细胞周期及凋亡的影响,以及对Bcl-2、Bax作用。方法:采用MTT比色法检测不同浓度13号、15号对肿瘤细胞增殖抑制作用;采用Elisa试剂盒检测13号、15号对肿瘤细胞Bcl-2、Bax作用及Bcl-2、Bax的变化;采用流式细胞仪检测细胞周期进程及细胞凋亡。结果:13号、15号对4种肿瘤细胞均有增殖抑制作用,且随着药物浓度增加,其抑制率越高,呈药物浓度依赖性。通过ELISA试剂盒检测表明,13号与空白对照组比较,Hela、MG-63细胞48h后Bcl-2/Bax比值明显降低,且有显著性差异(P<0.05);15号与空白对照组比较,Hep G2、MG-63及A549细胞的Bcl-2/Bax比值明显降低,且有显著性差异(P<0.05)。通过流式细胞术检测13号、15号对4种肿瘤细胞周期进程及凋亡表明,随着作用时间的增加,G0/G1期细胞百分数逐渐降低,G2/M期细胞百分数变化不大,而S期细胞百分数逐渐上升,且细胞亚二倍体凋亡峰随着时间的增加而增多,阻滞4种肿瘤细胞于S期。结论:13号、15号具有明显抗肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞凋亡的作用。

鬼臼苦素对人结直肠癌HCT-15细胞增殖和周期的影响及其作用机制

目的探讨鬼臼苦素(PPP)对人结直肠癌细胞系HCT-15细胞增殖和周期的影响及其作用机制。方法不同浓度PPP处理HCT-15细胞,采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测HCT-15细胞的增殖活性;倒置显微镜下观察HCT-15细胞的形态变化;流式细胞术检测HCT-15细胞周期的改变;Western blotting检测增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的蛋白表达水平。结果CCK-8法结果显示,PPP能显著抑制HCT-15细胞的增殖活性,并呈剂量-时间依懒性;倒置显微镜下观察发现,细胞失去原有形态回缩为圆形,折光性降低,活细胞数量明显减少;流式细胞术结果显示,G2/M期细胞比例显著升高,G0/G1期和S期细胞比例明显降低;Western blotting结果显示,PCNA、细胞周期蛋白D1的表达水平明显降低。结论PPP可显著抑制人结直肠癌HCT-15细胞的增殖,其作用机制可能是通过下调PCNA、cyclin D1的表达水平,进而将细胞阻滞于G2/M期发挥抑制作用。

4′-去甲苦鬼臼毒酮的化学结构研究

从桃儿七 (Podophyllun emodi Wall var. Chinese sparague)的根茎中分得 9个鬼臼树脂类化合物 ,对其中的 4′-去甲苦鬼臼毒酮 ,采用了 CD谱及 6 0 0兆核磁共振谱 ,运用 DIF- NOE技术确定了它的立体结构为 1β,2β,3β,4′去甲苦鬼臼毒酮 ,该化合物对 P388小鼠淋巴白血病的 ID5 0 为 7.5 8× 10 - 3mg/

运动训练通过上调IGF-1表达促进小鼠海马神经发生

目的:观察运动训练对小鼠海马胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的影响,探究运动训练促进海马神经发生的机制。方法:取3月龄BALB/c小鼠随机分为对照组(control)和运动组(runner)。运动训练4周后,采用real time RT-PCR和ELISA检测小鼠海马IGF-1的表达。另取3月龄BALB/c小鼠随机分为二甲基亚砜运动组(DMSO-runner)和鬼臼苦素运动组(PPP-runner),运动训练4周,运动期间腹腔注射DMSO或PPP。运动训练后采用Y迷宫和新物体识别实验评估小鼠的学习记忆能力,利用免疫荧光染色检测小鼠海马细胞增殖相关抗原Ki67和双皮质素(DCX)表达,使用荧光分光光度法检测小鼠海马蛋白酶体活性。结果:运动组海马IGF-1 mRNA和蛋白表达比对照组显著升高(P<0.05)。相比DMSO运动组,PPP运动组运动训练后在Y迷宫实验的自发交替正确率明显下降(P<0.05),在新物体识别实验检测期的新物体识别指数显著降低(P<0.05),海马齿状回颗粒下区Ki67^(+)细胞数目显著减少(P<0.05),DCX^(+)细胞数目明显下降(P<0.05),DCX^(+)细胞树突长度显著变短(P<0.05),且海马蛋白酶体活性显著降低(P<0.05)。结论:运动训练可显著上调海马IGF-1表达,IGF-1通过提高蛋白酶体活性促进海马神经发生。

胰岛素样生长因子-1在病理性疼痛中的作用机制

病理性疼痛又称为慢性疼痛,包括神经病理性疼痛、炎症性疼痛和癌性疼痛。以上3种疼痛类型主要来源于多种疾病的并发症或后遗症。病理性疼痛作为一种感觉,不同于视觉和听觉等独立存在,而是与其他感觉混杂在一起,难以准确区分,给临床治疗及患者恢复带来极大困难。虽然镇痛靶点的寻找在疼痛相关领域已经有较为广泛及深入的研究,但临床仍然缺乏有效且无副作用的治疗手段或药物。胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)属于胰岛素样生长因子家族中的一员,广泛表达于中枢神经系统与外周神经系统,发挥神经营养及神经修复作用,近些年在疼痛领域逐渐受到关注。但在对病理性疼痛的研究过程中有学者发现,IGF-1在神经病理性疼痛和炎症性疼痛的发生及维持过程中发挥了神经保护和神经毒性两种截然相反的作用——既能促进伤害性信息的传递也能阻断伤害性信息的传递。在癌性疼痛中却发现,IGF-1只参与伤害性信号的传递,进而发挥神经毒性作用。本文根据目前已有的IGF-1参与3类病理性疼痛的有关机制研究进行简要综述,探讨IGF-1作为镇痛靶点的可能性。

鬼臼苦素对人结直肠癌HCT-15细胞增殖的影响

目的:研究鬼臼苦素对人结直肠癌细胞HCT-15增殖的影响。方法:体外培养人结直肠癌HCT-15细胞,采用CCK-8法检测不同浓度鬼臼苦素作用HCT-15细胞24h、48h、72h后的增殖活性,并在倒置显微镜下观察HCT-15细胞形态的变化。结果:CCK8法结果显示鬼臼苦素能显著抑制HCT-15细胞的增殖活性,鬼臼苦素浓度在0.125μmol/L～2μmol/L范围内,随着鬼臼苦素浓度的增加和作用时间的延长,HCT-15细胞的抑制率逐渐增加,呈剂量-时间依赖性。倒置显微镜下观察发现,鬼臼苦素作用后HCT-15细胞不同程度皱缩、折光性降低、活细胞数明显减少。结论:鬼臼苦素对人结直肠癌HCT-15细胞具有明显的抑制作用。

鬼臼苦素诱导Ph^(+)慢性髓系白血病细胞焦亡及其相关分子机制研究

目的 探讨鬼臼苦素(picropodophyllin, PPP)对费城染色体阳性(Ph^(+))慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)细胞系K562和Ku812细胞焦亡的作用及其分子机制,为将PPP开发成为治疗Ph^(+)CML药物提供理论依据。方法 流式细胞术检测PPP对K562和Ku812细胞死亡的影响以及Caspase泛抑制剂QVO对PPP诱导细胞死亡的影响;Western blot检测PPP对凋亡、焦亡和坏死性凋亡相关蛋白以及对Bcl-2家族蛋白表达的影响。结果 PPP呈剂量依赖性关系诱导CML细胞发生死亡,且相同剂量下PPP对Ku812细胞的作用明显强于K562细胞;QVO预处理Ku812细胞后,明显抑制PPP诱导细胞发生的死亡;PPP能够上调Ku812细胞中Bak蛋白的表达,诱导Caspase-3、7和9的活化以及非综合征性耳聋蛋白5(DFNA5/GSMDE)和PARP的切割;在K562细胞中,PPP能够抑制Mcl-1和Bcl-2蛋白的表达。结论 PPP能显著地诱导Ku812细胞发生焦亡,其机制可能是通过上调促凋亡蛋白Bak表达,进而活化Caspase-3并诱导焦亡相关蛋白DFNA5/GSMDE的切割。

鬼臼苦素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用

目的:探讨鬼臼苦素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用。方法:体外培养人乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法检测不同浓度鬼臼苦素(0.1μmol/L、0.2μmol/L、0.4μmol/L、0.8μmol/L、1.6μmol/L、3.2μmol/L、6.4μm o l/L)分别作用24h、48h、72h对MCF-7细胞增殖的抑制作用;同时,在倒置显微镜下观察不同浓度鬼臼苦素作用48h时MC F-7细胞形态结构的变化。结果:浓度范围在0.1μm o l/L^6.4μm o l/L,随着鬼臼苦素药物浓度的增加及作用时间的延长,MCF-7细胞的生长抑制率逐渐升高,呈现一定的剂量-时间依赖关系(P<0.05)。鬼臼苦素作用MCF-7细胞24h、48h、72h的IC50值分别为7.32μmol/L、0.720μmol/L、0.318μmol/L。倒置显微镜下观察,鬼臼苦素作用48h后MC F-7细胞回缩、结构不清、折光性降低。结论:鬼臼苦素对人乳腺癌MCF-7细胞具有明显的抑制作用。

鬼臼苦素对卵巢癌耐药SKOV-3/DDP细胞株裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察鬼臼苦素对上皮性卵巢癌耐药系SKOV-3/DDP细胞株裸鼠移植瘤的作用并对其机制进行评价。方法:建立30只人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,裸鼠随机分成两组,溶剂对照组(生理盐水)和PPP(40 mg/kg)组各15只,每隔3天腹腔给药1次,18天后处死,测量裸鼠实验前后体重及肝肾功能,绘制生长曲线,计算抑瘤率,免疫组化法测定肿瘤内磷酸化胰岛素样生长因子-1受体(pIGF-1R)、微血管密度(MVD)。结果:PPP组抑瘤率为(40.17±9.13)%。PPP组血清丙氨酸转移酶、尿素氮、肌酐值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。PPP组移植瘤内pIGF-1R﹑MVD较生理盐水对照组均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:鬼臼苦素对卵巢癌耐药SKOV-3/DDP细胞株裸鼠移植瘤具有抑制生长作用,且对裸鼠肝肾功能没有明显的不良反应。鬼臼苦素可能有抑制肿瘤新生血管生成的作用。

鬼臼苦素单用或联合顺铂对上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:观察鬼臼苦素单用及其与顺铂联合应用对上皮性卵巢癌裸鼠移植瘤的作用,并对其机制进行评价。方法:建立32只人卵巢癌裸鼠移植瘤模型,裸鼠随机分成4组:溶剂对照组(生理盐水)、DDP(5mg/kg)组、PPP(40mg/kg)组、DDP(5mg/kg)+PPP(40mg/kg)组,每隔3天腹腔给药1次,18天后处死,测量裸鼠实验前后体重及肝肾功能,绘制生长曲线,计算抑瘤率;免疫组化法测定肿瘤内磷酸化胰岛素样生长因子-1受体(pIGF-1R)、微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)的标记指数,TUNEL方法检测肿瘤细胞凋亡情况。结果:DDP组、PPP组和PPP+DDP组抑瘤率分别为(26.53±8.42)%,(39.18±10.12)%和(72.17±30.79)%,按金正均法计算q值为1.341;PPP组血清丙氨酸转移酶、尿素氮、肌酐值与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),DDP组裸鼠的血清尿素氮、肌酐值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),DDP组与DDP+PPP组的血清尿素氮、肌酐值与DDP组比较差异无统计学意义(P>0.05)。PPP组和PPP+DDP组移植瘤内pIGF-1R?MVD、VEGF较对照组均明显降低,DDP组移植瘤内MVD、VEGF较对照组有所降低,差异有统计学意义(P>0.05),但均高于PPP组和PPP+DDP组,且与这两组差异有统计学意义(P<0.05)。PPP组,DDP组及PPP+DDP组的凋亡指数与对照组比较均明显升高,以PPP+DDP组最为显著,PPP组凋亡指数高于DDP组差异有统计学意义(P<0.05)。PPP+DDP组与PPP组调亡指数无明显差异(P>0.05)。结论:鬼臼苦素对裸鼠上皮性卵巢移植癌具有抑制生长作用。鬼臼苦素与顺铂存在协同作用,且对裸鼠肝肾功能没有明显的不良反应。鬼臼苦素可能有抑制肿瘤新生血管生成的作用。