An end-to-end anastomosis model of guinea pig bile duct:A 6-mo observation

AIM:To establish the end-to-end anastomosis (EEA) model of guinea pig bile duct and evaluate the healing process of bile duct.METHODS:Thirty-two male guinea pigs were randomly divided into control group,2-,3-,and 6-mo groups after establishment of EEA model.Histological,immunohistochemical and serologic tests as well as measurement of bile contents were performed.The bile duct diameter and the diameter ratio (DR) were measured to assess the formation of relative stricture.RESULTS:Acute and chronic inflammatory reactions occurred throughout the healing process of bile duct.Serology test and bile content measurement showed no formation of persistent stricture in 6-mo group.The DR revealed a transient formation of relative stricture in 2-mo group in comparation to control group (2.94 ± 0.17 vs 1.89 ± 0.27,P=0.004).However,this relative stricture was released in 6-mo group (2.14 ± 0.18,P=0.440).CONCLUSION:A simple and reliable EEA model of guinea pig bile duct can be established with a good reproducibility and a satisfactory survival rate.

运用复发型胆总管结石患者胆道细菌建立豚鼠胆石症模型

目的:运用复发型胆总管结石患者胆道细菌建立豚鼠胆石症模型,为研究胆道微生物在胆总管结石复发及胆石症形成的作用机制方面提供贴合临床的动物模型支撑。方法:普通级Dunkin Hartley豚鼠35只,雌雄不限,第一阶段实验20只,第二阶段实验15只。两阶段造模方法均采用胆道插管、注射复发型胆总管结石患者胆道菌液的方式。第一阶段实验造模后第9周时,观察动物模型术后存活率、动物模型胆汁性状及胆道系统内结石形成情况;留取动物胆汁样本做细菌培养。第二阶段实验从造模结束第2天起,每日取材2只动物模型观察其胆汁性状及胆道系统内结石形成情况。观察胆结石动物的肝脏、胆囊及胆总管组织的病理学变化;综合评估本实验方法建立胆石症动物模型的可行性。结果:与既往使用胆道插管注射大肠杆菌并结合不完全梗阻的造模方式相比,本实验使用的造模方法,更贴合临床胆总管结石患者结石复发及胆石症形成时的胆道微生物状态,且造模周期短,模型成功率高,操作难度相对较小,动物死亡率低。结论:本实验使用的造模方式可以成功建立豚鼠胆石症模型,能够为研究胆道微生物在ERCP术后胆总管结石复发及胆石症形成中的作用机制提供可靠的动物模型支撑。

猪胆药用历史考证

猪胆为常用中药,古人常直接药用或用其炮制他药。通过查阅整理猪胆相关本草典籍,考证其基原、药性、功效主治、炮制药物种类及历史等,为猪胆资源开发、临床使用及炮制研究等提供参考。考证发现自唐代起,医家已区分使用猪胆和野猪胆。张仲景最先确定猪胆苦寒之性,并沿用至今。其功效以滋阴清热、润燥通便为主。总结用猪胆炮制的中药共12味,猪胆炮药可以改变药物药性,降低药物毒性、燥性,提高药物清热、镇惊作用。

散养云南地方猪源乳酸菌分离、鉴定及其益生特性的研究

本试验旨在筛选优质猪源乳酸菌,为猪用益生菌制剂研发奠定基础。以散养云南地方猪新鲜粪便为菌株分离来源,采用MRS+碳酸钙固体培养基分离纯化乳酸菌,经生理生化和16S rRNA测序鉴定得到9株乳酸菌,测定并评价其抗生素敏感性、抑菌活性、胃肠道耐受性、黏附能力和抗炎能力,综合比较不同菌株之间的益生特性。结果表明:从散养云南地方猪新鲜粪便中分离筛选出9株对氨苄青霉素、头孢噻吩和青霉素G等6种抗生素敏感或中度敏感且抑菌活性较强的菌株,经过16S rRNA基因序列分析和生理生化鉴定,DBS4-3、DBS5-5、DBS2-3、SBC4-9、SBC5-3和ZK3-1为罗伊氏乳杆菌,SBC1-6和ZK7-2为发酵乳杆菌,ZK2-2为黏膜乳杆菌。DBS2-3、SBC5-3和ZK7-2可耐受低pH和高胆盐环境;SBC5-3和ZK7-2对肠上皮细胞HT-29具有较强的黏附能力;SBC5-3可显著降低肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导HT-29细胞白细胞介素-8(IL-8)基因相对表达量(P<0.05)。综上所述,SBC5-3是一株具有良好的黏附和抗炎效果、抑菌能力强、对抗生素敏感且能耐受胃肠道环境的猪源乳酸菌,可用作微生态制剂候选菌株进一步开展深层次研究。

猪胆汁中胆红素提取工艺的研究

以猪胆汁为原料,利用水解法提取胆红素,研究抗氧剂用量、碱水解pH、水解温度、保温时间和酸化pH等单因素对胆红素的提取率和含量影响。结果表明:用水解法提取胆红素的最佳条件是:抗氧剂用量为0.5%,碱水解pH 11.0~11.5,水解温度75~80℃,保温时间10 min,酸化pH 5.5~6.0,胆红素的提取率为95%,含量大于98.0%。

高纯胆红素的制备与鉴定

从新鲜猪胆汁制备高纯度的胆红素，通过荧光光谱，ＵＶ，ＩＲ，＾１ＨＮＭＲ，ＭＳ，热重分析，差示热分析等分析测试手段研究了胆红素的性质。

茵陈合剂对麻醉豚鼠肝胆汁泌量及其成分的影响

目的:观察茵陈合剂对麻醉豚鼠肝胆汁分泌的作用。方法:选用健康豚鼠36只,随机分为6组:即非用药对照组、茵陈合剂组、茵陈组、陈皮组、陈皮油组、熊去氧胆酸组(ursodoxycholic acid,UCDA)。每组6只,建立豚鼠胆管引流模型。各组豚鼠于给药后30min、60min、90min、120min收集胆汁标本,分别测定各组豚鼠胆汁流量、胆汁中总胆汁酸及胆汁中胆固醇的含量。结果:与非用药对照组相比,茵陈合剂用药30min后能显著地促进正常豚鼠胆汁流量、胆汁总胆汁酸和胆固醇的分泌。结论:茵陈合剂能改善正常豚鼠的胆汁分泌。

大鼠免疫性与淤胆性肝纤维化发病机制比较

目的大鼠肝脏长期暴露于猪血清后可出现免疫损伤及随后发生的肝纤维化,而胆总管结扎后亦可诱导大鼠发生胆汁淤积性肝损伤,最终发生肝纤维化。这两种损伤后肝脏纤维化的发生、发展及机制均不同。本研究比较这两种不同处理后肝脏损伤的发生发展,探讨炎症与纤维化形成之间的关系。方法(1)通过给大鼠腹腔注射猪血清(IPS)(3ml/kg,1次/周,连续12周)诱导慢性肝纤维化(IPS组)。通过结扎胆总管诱导急性淤胆性肝纤维化(BDL组);(2)采用Knodell组织学评分评价肝脏组织学改变;(3)采用抗αSMA抗体、抗ED1抗体、抗CK7抗体、抗CD45抗体对肝脏进行免疫荧光染色;(4)采用实时定量PCR技术分别检测肝脏中与炎症相关的细胞因子,包括白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白1(MIP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、受激活调节正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、转化生长因子β(TGF-β)、血小板衍生生长因子A(PDGF-A);与纤维化相关的细胞因子,包括I型胶原蛋白(col-1)、α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的表达。结果(1)Knodell组织学评分示BDL组汇管区坏死、肝小叶内变性和灶性坏死、汇管区炎症均显著高于IPS组(P<0.01),而肝纤维化评分则低于IPS组(P<0.05);(2)免疫荧光染色显示BDL组肝脏内炎性细胞浸润极为明显,并伴有多量αSMA阳性细胞,IPS组肝脏见较多αSMA阳性细胞,但炎性细胞浸润不明显;(3)实时定量PCR显示与正常对照组肝脏相比,IPS组肝脏中与细胞外基质重建有关的基因表达显著上调;而与炎症相关的细胞因子除RANTES外,均与正常对照组相当(P>0.05)。而BDL组肝脏中所有的与炎症相关的前炎性因子及与纤维化相关的细胞因子均增高(P<0.05)。结论IPS诱导的肝纤维化表现为显著的细胞外基质的重建而不伴明显的炎性细胞浸润,其肝纤维化在无明显活动性炎症的情况下隐袭发展而形成。结扎胆总管诱导的肝纤维化则继发于肝细胞坏死及明显炎症增生。

RP-HPLC法测定蛇胆、鸡胆、猪胆的胆汁酸成分及其抑菌作用的研究

建立了反相液相色谱法同时测定动物胆汁样品中的牛磺胆酸、牛磺去氧胆酸、牛磺鹅去氧胆酸、甘氨石胆酸等结合型胆汁酸成分的方法。采用色谱柱为Agilent SB-C18柱(4.6×250 mm,5μm),流动相为乙腈-25mM磷酸二氢钾盐溶液(30:70),检测波长200nm。流速1.0mL/min,柱温40℃。各组分在一定范围内有良好的线性关系。本法具有简单快速、分离效果好、重复性好、回收率高的优点。同时研究了动物胆汁及其主要胆汁酸成分的体外抑菌作用,结果表明胆汁酸对于金黄色葡萄球菌的生长有明显的抑制作用,且牛磺结合型胆汁酸TCA的抑菌作用强于游离型胆汁酸CA。

猪胆粉抗炎作用研究

为研究猪胆粉抗炎作用及其抗炎机制,采用小鼠耳肿胀法、小鼠足肿胀法、小鼠棉球肉芽肿法急性和慢性炎症模型,观察猪胆粉抗炎作用,通过测定小鼠足趾炎性渗出液中组胺含量,小鼠气囊炎渗出液中白三烯B_4(leukotriene B_4,LTB_4)、前列腺素E_2(prostaglandin E_2,PGE_2)含量探究猪胆粉抗炎机制。结果显示:猪胆粉高剂量组(400mg/kg)对二甲苯致小鼠耳肿胀、蛋清致小鼠足肿胀、棉球致小鼠肉芽肿有显著抑制作用(P<0.05),对小鼠足趾炎性渗出物中组胺含量、小鼠气囊炎渗出液中PGE_2和LTB_4的浓度有极显著的降低作用(P<0.01)。中剂量组(200mg/kg)对二甲苯致小鼠耳肿胀、蛋清致小鼠足肿胀、棉球致小鼠肉芽肿有极显著抑制作用(P<0.01),对小鼠足趾炎性渗出物中组胺含量、小鼠气囊炎渗出液中PGE_2和LTB_4的浓度有极显著的降低作用(P<0.01)。低剂量组(100mg/kg)效果不明显(P>0.05)。结果表明,猪胆粉具有显著抗炎作用,其作用机制可能与降低组胺分泌及影响花生四烯酸代谢有关。

饮食诱发豚鼠胆结石及维生素C防止结石形成的实验研究

本实验采用高胆固醇及低蛋白两种致石食物诱发豚鼠形成胆结石,8周后成石率均为100%;在致石食物中加入维生素C,成石率分别降至16.7%和52.9%并通过对动物胆石的细微结构观察和成份分析,肝脏、胆囊的亚微及超微结构的变化以及胆汁结合胆汁酸量及其组成的观测,探讨饮食成份改变诱发豚鼠胆结石及维生素C防止胆石形成的机制。

肝硬变状态下胆石发生机理的实验研究

采用四氯化碳灌胃方法制成豚鼠肝硬变模型。通过观察豚鼠胆囊结石形成．扫描电镜观察胆石细微结构，并结合豚鼠肝脏及胆囊超微结构变化及胆囊胆汁结合胆汁酸簿层色谱扫描定量测定，以探讨肝硬变状态下胆石发生机理。结果显示各组动物胆石发生率：对照组5％，慢性肝损害组37．5％，肝硬变组83．3％。胆囊胆汁中结合胆汁酸：慢性肝损害组及肝硬变组均明显低于对照组，以肝硬变组下降最为明显。结果表明：肝硬变状态下结合胆汁酸含量下降，胆石发生率明显增高。

猪胆汁乙醇提取物对消化系统的影响

目的:观察猪胆汁乙醇提取物对消化功能的影响。方法:采用离体与在体两种方法观察猪胆汁乙醇提取物对消化功能的影响。结果:猪胆汁乙醇提取物能减弱家兔离体肠平滑肌收缩,抑制小鼠小肠碳墨推进率,缓解蓖麻油所致小鼠腹泻,且对大肠杆菌、痢疾杆菌等有明显抑制作用。结论:猪胆汁乙醇提取物对维持消化道正常功能有重要调节作用。

人与猪胆总管的弹性模量及其在异种肝移植中的意义

目的:探讨人与猪胆总管弹性模量的关系,为猪到人异种肝移植提供理论依据。方法:获得5例成年人尸体和50例3￣12月龄湖北白猪的胆总管,在软组织生物力学试验机上测定胆总管的压力-直径关系,计算出增量弹性模量(Einc)、压力-应变弹性模量(Ep)和容积弹性模量(Ev)。横断取材,冰冻切片,HE法染色,用计算机图像分析系统测量其管径和壁厚。结果:人与各月龄组猪胆总管的Einc(F=502.08,P=0.00)、Ep(F=137.42,P=0.00)和Ev(F=134.59,P=0.00)差异有统计学意义;7～10月龄猪胆总管的弹性模量与成人的相近(P>0.05),而3～6月龄及11、12月龄猪的弹性模量比成人的大(P<0.01)。结论:7～10月龄猪胆总管的生物力学特性与成人的比较接近,故在猪到人异种肝移植时,选用7～10月龄猪的肝脏作为供体材料,也许能提高移植肝的存活率。

猪去氧胆酸与鹅去氧胆酸的提取纯化工艺

从提取胆红素后的猪胆粉中同时提取猪去氧胆酸与鹅去氧胆酸。将猪胆粉皂化制得混合猪胆汁酸粗品,在浓盐酸催化下形成甲酯,猪去氧胆酸甲酯与甲苯形成的复合物不溶于甲苯而结晶析出,蒸干回收溶剂;用柱层析法,以乙酸乙酯-石油醚为洗脱剂分离鹅去氧胆酸甲酯;最后经碱水解得到纯猪去氧胆酸与鹅去氧胆酸,纯度经HPLC测定均大于98%。该提取工艺能同时提取出猪胆粉中的猪去氧胆酸与鹅去氧胆酸,步骤少、操作简单、原料利用充分,适合于工业化生产。

不同中药对豚鼠胆色素结石模型的生化学影响

目的:观察中药清胆胶囊和养肝利胆颗粒对豚鼠胆囊胆色素结石模型的生化学影响。方法:雄性豚鼠皮下注射林可霉素建立胆色素结石模型,并设立空白组、模型组、清胆胶囊干预组和养肝利胆颗粒干预组,观察各组动物的成石率、胆汁中总胆红素(total bilirubin,TBIL)、游离胆红素(unconjugated bilirubin,UCB)和钙离子浓度等指标的变化。结果:与模型组比较,清胆胶囊组和养肝利胆颗粒组成石率均显著降低(P<0.01),胆汁中总胆红素、游离胆红素和钙离子浓度也明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论:清胆胶囊和养肝利胆颗粒可通过降低胆汁中总胆红素、游离胆红素和钙离子含量而逆转成石胆汁,起到预防胆色素结石形成的作用。

德氏乳杆菌对育肥猪生产性能、血脂指标及粪和组织中总胆固醇和总胆汁酸含量的影响

本试验旨在研究德氏乳杆菌对育肥猪生产性能、血脂指标及粪和组织中总胆固醇（TC）和总胆汁酸（TBA）含量的影响。试验选用健康、平均体重为（65.34±3.64） kg的杜×（长×大）育肥猪120头,随机分为2组,每组6个重复,每个重复10头（公母各占1/2）。对照组饲喂无抗基础饲粮,试验组饲喂无抗基础饲粮＋0.1%德氏乳杆菌制剂。预试期7 d,试验期42 d。试验期间,依次采集育肥猪在第14、28和42天的前腔静脉血（每组公母各3头）,第12～14天、第26～28天和第40～42天的新鲜粪便（每重复）；试验结束后,每重复选取1头体重接近平均体重的阉公猪进行屠宰,分离肝脏、背最长肌和心脏。结果表明：1）与对照组相比,试验组平均日增重（ADG）、平均日采食量（ADFI）及料重比（F/G）无显著差异（P〉0.05）,而腹泻率和发病率则极显著或显著降低（P〈0.01或P〈0.05）。2）试验第14、28和42天,2组间血清TC、甘油三酯（ TG）、低密度脂蛋白胆固醇（ LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（ HDL-C）含量和HDL-C/LDL-C差异不显著（ P〉0.05）,而血清TBA含量在试验第14和42天差异显著（ P〈0.05）。3）试验第12～14天,试验组粪中TBA含量显著提高（ P〈0.05）,TC含量极显著降低（ P〈0.01）；第26～28天,2组间粪中TBA和TC含量差异不显著（P〉0.05）；第40～42天,试验组粪中TBA含量较对照组显著提高（P〈0.05）,TC含量差异不显著（P〉0.05）。4）2组间肝脏、心肌和背最长肌中TC含量以及肝脏中TBA含量差异不显著（ P〉0.05）。结果提示：饲粮中添加0.1%德氏乳杆菌制剂具有改善育肥猪生产性能和血脂状况、促进粪胆固醇和胆汁酸排泄的功效。

两种动物胆管损伤实验研究中的比较

目的比较杂种犬与小型猪用于胆管损伤实验的效果。方法将成年杂种犬与小型猪麻醉后,做胆管损伤手术,比较分析两种动物的麻醉情况,分别在1d、7d、30d、90d采血测血清转氨酶与血脂,观察切口愈合情况以及死亡率,清创次数。结果猪愈合较好,且能耐麻药,死亡率较低。结论小型猪用于胆管损伤手术实验优于杂种犬。

熊胆预防豚鼠胆囊胆固醇结石的实验研究

目的 探讨熊胆粉对豚鼠胆囊胆固醇结石的预防作用及其可能的作用机制。方法 将 80只豚鼠随机分为 4组 ,分别为空白组、致石组、熊胆粉预防组、熊去氧胆酸 (UDCA)预防组。喂养 2个月后检测胆石生成情况及胆汁生化。结果 熊胆粉能显著降低豚鼠的胆石生成率 ,升高胆汁酸浓度 ,降低胆汁中胆固醇浓度及致石指数。

猪肝内管道研究

猪肝内管道及其叶、段划分与人肝基本一致，全肝可分为左、右二叶，它们各又分为内、外侧叶（或称内、外侧段），方叶属于左内叶。外形上的尾状叶以中裂为界分为左、右二部，分别隶属于左、右叶。各叶、段由同名的门静脉分支、肝动脉分支供应血液，它们分别为左外叶动、静脉，左内叶动、静脉，右内叶动、静脉，右外叶动、静脉及走向尾状叶左、右二部的尾叶支。胆汁由同名肝管汇流。