猪口蹄疫病毒受体β3亚基的基因克隆与分子特征

目的为研究β3亚基在口蹄疫感染过程中所扮演的角色,同时也为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定基础。方法从正常的猪肾细胞(pk15)中克隆到了整联蛋白β3亚基的基因,对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析并与真核表达载体pCDNA3.1(+)相连接。结果猪整联蛋白β3亚基基因的编码区含有2 355个核苷酸,编码785个氨基酸残基,其信号肽由22个氨基酸组成;胞外域由692个氨基酸组成,含有8个潜在的糖基化位点(NXS/NXT)和57个半胱氨酸(Cys)残基;跨膜区由29个氨基酸组成;胞浆域由41个氨基酸组成。猪β3基因与羊、人、马、犬、家鼠和挪威大鼠此基因核苷酸序列的同源性分别为94.3%、90.1%、92.1%、90.9%、86.1%、86.2%,推导氨基酸序列的同源性分别为95.0%、91.8%、92.5%、91.7%、88.8%、88.7%。结论通过生物学软件分析发现猪β3亚基形成复杂的2、3级结构,其中1-22位、715-743位氨基酸区段疏水性较强,分别是该亚基的信号肽和跨膜区,以及成功构建了β3亚基的重组真核表达载体pCDNA3.1(+)β3。

用RACE技术快速扩增五指山猪来源的猪内源性反转录病毒3'LTR

测定我国小型猪来源的猪内源性反转录病毒(PERV)3'LTR,以便于PERV全基因的克隆和分析。用cDNA末端快速扩增(RACE)技术,从五指山猪外周血淋巴细胞mRNA中扩增到PERV-3'LTR,并克隆入pGEM-Teasy载体,将阳性克隆进行序列测定和同源性分析。测序结果显示该克隆3'端的尾部有一个由12个A组成的poly(A)信号;其R区与PERV-MSL的R区(约64bp)基本一致,同源性分析表明其与PERV-MSL的3'LTR具有81%的序列同源性。说明成功扩增了我国五指山猪来源的PERV-3'LTR,将有利于PERV全基因的克隆。

口蹄疫病毒受体猪源β1亚基基因的克隆和分子特征

首次从FMDV试验感染康复猪的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白β1亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。猪整联蛋白β1亚基基因的编码区含有2397个核苷酸，编码798个氨基酸残基，含有10个潜在的糖基化位点（NXTX/NXSX），2个表皮生长因子相似结构域和3个半胱氨酸丰富区。其信号肽由20个氨基酸组成，胞外域由708个氨基酸组成，跨膜区由29个氨基酸组成，胞浆域由41个氨基酸组成。猪脚基因与牛、猩猩、猫、犬、人、小鼠和鸡的脚基因的核苷酸序列一致性分别为99．5％，90．0％，91．8％，90．7％，90．2％，86．5％和77．4％，推导的氨基酸序列一致性分别为99．9％，93．9％，97．5％，96．7％，94．2％，92．4％和94．9％。通过生物学软件分析发现β1亚基形成复杂的二、三级结构，其中1～20位、729～757位氨基酸区段疏水性较强，分别是该亚基的信号肽和跨膜区。为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。