缺氧对视网膜Müller细胞VEGF和PEDF表达的影响

目的探讨缺氧对体外培养的大鼠视网膜M櫣ller细胞血管内皮生长因子(vas-cular endothelial growthfactor,VEGF)和色素上皮衍生因子(pigment epitheliumderived fac-tor,PEDF)表达的影响。方法采用RT-PCR和Western印迹分析方法分别对不同缺氧时间视网膜M櫣ller细胞VEGF和PEDF的mRNA及蛋白水平进行测定。结果M櫣ller细胞VEGF mRNA及蛋白表达在缺氧12h后明显升高,缺氧24h更为显著,24h时2者分别为对照组的2.12倍(P<0.05)和1.70倍(P<0.05)。PEDF mRNA及蛋白表达在缺氧6h后明显下降(P<0.05),缺氧24h下降更为显著,24h时2者分别为对照组的0·11倍(P<0.01)和0.54倍(P<0.05)。结论缺氧条件下,体外培养的大鼠M櫣ller细胞VEGF和PEDF表达失衡,PEDF表达下降,同时VEGF表达增加,2者的表达失衡可能在视网膜病理性新生血管形成过程中起一定作用。

2型糖尿病患者房水中VEGF及PEDF水平的研究

目的探讨2型糖尿病患者与健康人房水中血管内皮生长因子及视网膜色素上皮源性因子水平是否存在差异。方法糖尿病患者组39例39只眼,存在糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)患者18例18只眼,无DR患者21例21只眼,老年性白内障患者20例20只眼作为对照组。用酶联免疫吸附法检测房水中VEGF及PEDF的水平。结果在2型糖尿病组中存在DR及无DR患者房水中VEGF浓度分别为(1 241.39±274.71)pg/ml及(1 183.31±231.12)pg/ml,与对照组[(951.47±280.39)pg/m1]相比,差异有统计学意义(P=0.004,P=0.013)。对照组、DR组及无DR组患者PEDF浓度分别为(40.11±15.87)ng/ml、(50.13±46.73)ng/ml、(34.68±4.77)ng/ml,与对照组相比,无DR患者房水中PEDF浓度明显降低(P=0.042)。对照组、DR组及无DR组患者房水中VEGF/PEDF分别为26.15±11.92、32.41±12.11、34.58±7.97,与对照组相比,其余两组患者房水中VEGF/PEDF明显升高(P=0.038,P=0.002)。结论糖尿病患者房水中VEGF水平及VEGF/PEDF升高,提示2型糖尿病患者房水中VEGF与PEDF的失衡可能与糖尿病性视网膜病变的发生、发展有关。

冬虫夏草对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞色素上皮衍生因子和血管内皮生长因子表达的影响

目的观察冬虫夏草对高糖诱导的大鼠肾小球系膜细胞色素上皮衍生因子（PEDF）和血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响，探讨其肾脏保护的作用机制。方法35只8周龄清洁级雄性sD大鼠，体重260～280g，根据体重按随机数字表法分为正常血清组（n=18）、低剂量虫草提取液喂养组（5g·kg^-1·d^-1，n=8）和高剂量虫草提取液喂养组（10g·kg^-1·d^-1，n=9），采用生理盐水及不同剂量虫草提取液灌胃8d后，分离静脉血提取对照血清及不同浓度的冬虫夏草含中药血清。体外培养HBZY-1大鼠肾小球系膜细胞，之后分别加入正常血糖正常血清[正常血糖组（NC组）：5．6mmol／L葡萄糖＋10％胎牛血清（FBS）＋1％正常大鼠血清]、高血糖正常血清[高血糖组（HG组）：30．0mmol／L葡萄糖＋10％FBS＋1％正常大鼠血清]、低剂量虫草含药血清[低药组（LD）：30．0mmol／L葡萄糖＋10％FBS＋1％低剂量虫草含药血清]和高剂量虫草含药血清[高药组（HD）：30．0mmol／L葡萄糖＋10％FBS＋1％高剂量虫草含药血清]进行培养，采用逆转录．聚合酶链反应（RT—PCR）测定各组细胞PEDF及VEGFmRNA的表达，酶联免疫吸附试验（ELISA）测定各组细胞上清液中PEDF及VEGF的水平。组间资料比较采用单因素方差分析，样本间资料比较采用t检验。结果与NC组相比，HG组PEDFmRNA表达明显下降（24h：0．375±0．011比0．507±0．008，t=16．828，P〈0．0l；72h：0．376±0．014比0．515±0．010，t=14．034，P〈0．01），VEGFmRNA表达明显上升（24h：1．005±0．011比0．864±0．012，t=14．963，P〈0．01；72h：1．168±0．012比0．873±0．011，t=31．417，P〈0．01）；LD组和HD组PEDFmRNA表达较HG组显著上调（24h：0．505±0．018、0．639±0．012比0．375±0．011，F=354．719，P〈0．01；72h：0．612±0．023、0．700±0．019比0．376±0．014，F=97．82，P〈0．01），VEGFmRNA表达明显下降（24h：0．838±0．014、0．767±0．017比1．005±0．011．F=79．55，P〈0．01：72h：0．923±0．016、0．784±0．012比1．168±0．012，F=244．28，P〈0．01），且HD组疗效更明显。经对照血清及CS血清培养24、72h后，与NC组相比，HG组PDEF水平明显降低[24h：（267±8）比（303±10）ng／L，t=6．493，P〈0．01；72h：（265±27）比（338±42）ng／L，t=3．259，P〈0．01]，VEGF明显升高[24h：（128±3）比（113±8）ng／L，t=3．737，P〈0．01；72h：（144±7）比（125±7）ng／L，t=4．215，P〈0．01；与HG组相比，LD组和HD组PEDF明显升高[24h：（297±12）、（296±26）比（267±8）ng／E，F=5．427，P〈0．01；72h：（323±20）、（332±33）比（265±27）ng／L，F=5．690，P〈0．01]，VEGF明显降低[24h：（106±6）、（109±11）比（128±3）ng／L，F=5．738，P〈0．01；72h：（124±9）、（125±7）比（144±7）ng／L，F=7．878，P〈0．01]。结论冬虫夏草可能通过降低肾小球系膜细胞VEGF的表达，升高PEDF的表达，对肾脏起到保护作用。

色素上皮衍生因子抑制人肝癌裸鼠移植瘤生长

目的观察人色素上皮衍生因子（PEDF）对血管生成的抑制作用，探讨PEDF在肝癌基因治疗中的应用前景。方法构建色素上皮衍生因子慢病毒表达质粒pLentiPEDF，经293T细胞包装，收集病毒上清液，感染肝癌细胞株HepG2。收集各组细胞的条件培养基，通过Western blot分析各组细胞PEDF的表达情况，并通过人脐静脉血管内皮细胞增殖及迁移试验研究其体外生物学活性。人肝癌细胞HepG2移植到裸鼠皮下，研究Lenti-PEDF病毒对肝癌移植瘤生长的抑制作用，逆转录聚合酶链反应检测肿瘤组织中PEDF mRNA表达。多组间均数比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD法。结果限制性内切酶酶切分析和测序结果均表明成功构建了PEDF慢病毒表达载体，以293T细胞包装的重组慢病毒能够高效感染肝癌细胞，肝癌细胞感染重组慢病毒后可高效表达PEDF并分泌到培养上清液中。体外研究结果表明，重组PEDF可明显抑制人脐静脉血管内皮细胞的增殖及迁移，抑制率分别达29％和48％，与空白对照组相比，差异有统计学意义（P值均〈0．01）。Lenti-PEDF病毒能明显抑制人肝癌裸鼠皮下移植瘤的生长（P〈0．01）。瘤内注射Lenti-PEDF病毒21d后，逆转录聚合酶链反应在肿瘤组织检测到PEDFmRNA的过表达。结论本研究初步提示PEDF能有效遏制肿瘤的血管生成和肿瘤生长，为肝癌的基因治疗提供了一条新的思路。