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Molecular epidemiology of piliated pneumococcal isolates at a major tertiary hospital in the Klang Valley,Malaysia
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作者 Nurul Diana Dzaraly Mohd Nasir Mohd Desa +11 位作者 AbdulRahman Muthanna Siti Norbaya Masri Niazlin Mohd Taib Nurul Hana Zainal Baharin Nurshahira Sulaiman Nurul Asyikin Abdul Rahman Navindra Kumari Palanisamy Zarizal Suhaili Semiat Opeyemi Yusuff Nor Iza A.Rahman Tuan Suhaila Tuan Soh Fatimah Haslina Abdullah 《Asian Pacific Journal of Tropical Medicine》 SCIE CAS 2023年第2期80-88,共9页
Objective:To characterise a collection of pili-carrying and none pili-carrying pneumococcal isolates of clinical origin for serotypes,antibiotic resistance and genotype.Methods:In total,42 clinical isolates were colle... Objective:To characterise a collection of pili-carrying and none pili-carrying pneumococcal isolates of clinical origin for serotypes,antibiotic resistance and genotype.Methods:In total,42 clinical isolates were collected between October 2017 and December 2019.Those isolates were analysed for antimicrobial susceptibility,serotype distribution,detection of pneumococcal virulence and pilus genes.Multilocus sequence typing was performed only for piliated isolates,followed by phylogenetic analysis.Results:The common isolation sites among the pneumococcal isolates were tracheal aspirate(28.6%),blood(26.2%),and sputum(23.8%).Fifty percent isolates were resistant to erythromycin,tetracycline(50.0%)and trimethoprim-sulfamethoxazole(43.0%).The most frequent were serotypes 19F(28.6%),6A/B(23.8%)and 19A(14.3%).Piliated isolates were detected in a small proportion(33.3%);64.3%were multidrug-resistant.ST320 was the prevalent sequence type among the piliated isolates and genetically related to the Pneumococcal Molecular Epidemiology Network clones Taiwan19F-14(CC271).In the phylogenetic analysis,some piliated isolates showed a close association having similar ST320,carrying serotype 19A and both pilus genes indicating their clonal spread.Conclusions:Pneumococcal lineages of piliated isolates have been globally disseminated and pili could have played a role in the spread of antibiotic resistant clones. 展开更多
关键词 Pneumococci pili GENOTYPE MALAYSIA
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Genomic characteristics of Dickeya fangzhongdai isolates from pear and the function of type Ⅳ pili in the chromosome 被引量:1
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作者 CHEN Bin TIAN Yan-li +4 位作者 ZHAO Yu-qiang WANG Yuan-jie CHUAN Jia-cheng LI Xiang HU Bai-shi 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2020年第4期906-920,共15页
Dickeya fangzhongdai, the causal agent of bleeding canker of pear, is a new member of the Dickeya genus and the only one that infects woody plants. Recent studies have reclassified several Dickeya isolates as D. fangz... Dickeya fangzhongdai, the causal agent of bleeding canker of pear, is a new member of the Dickeya genus and the only one that infects woody plants. Recent studies have reclassified several Dickeya isolates as D. fangzhongdai, which were isolated from various environments, including water, Phalaenopsis sp. and Aglaonema sp. To provide genomic characterization of D. fangzhongdai isolates from pear, the genomes of D. fangzhongdai strain JS5(=China General Microbiological Culture Collection Center, CGMCC 1.15464 ~T=DSM 101947 ~T), along with two other isolates, LN1 and QZH3, were sequenced and compared to those of other Dickeya spp. Homology greater than 99% was observed among three D. fangzhongdai strains. Plasmid, type IV secretion system(T4 SS) and type IV pili(TFPs) were found in genomes of D. fangzhongdai isolates. Comparative analysis of the type Ⅲ secretion systems(T3 SS), type Ⅲ secretion effectors(T3 SE), plant cell wall degradation enzymes(PCWDE) and membrane transport proteins of Dickeya spp. showed some differences which might reflect the variations of virulence, phylogenetic and phenotypic characteristics of Dickeya spp. In addition, deletion mutant of TFP in D. fangzhongdai JS5 showed no twitching motility and reduced virulence and biofilm formation. The fingdings of the distinctive plasmid, T4 SS and TFPs, as well as the differences of T3 SE, PCWDE and membrane transport proteins make D. fangzhongdai isolates unique. These results also suggested that acquisition of virulence genes by horizontal gene transfer might play some role in the genetic variation of D. fangzhongdai. 展开更多
关键词 Dickeya fangzhongdai comparative GENOMICS VIRULENCE typeⅣpili
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Fate of polyphenols in pili(Canarium ovatum Engl.) pomace after in vitro simulated digestion
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作者 Elizabeth Hashim Arenas Trinidad Palad Trinidad 《Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine》 SCIE CAS 2017年第1期53-58,共6页
Objective: To evaluate the stability and bioavailability of polyphenols in pili(Canarium ovatum Engl.) pomace during simulated in vitro digestion.Methods: Freeze-dried pili pomace was subjected to in vitro digestion s... Objective: To evaluate the stability and bioavailability of polyphenols in pili(Canarium ovatum Engl.) pomace during simulated in vitro digestion.Methods: Freeze-dried pili pomace was subjected to in vitro digestion simulating conditions in the stomach, small intestine and colon. Total polyphenols, anthocyanins, fl avonoids and condensed tannins, and its antioxidant activity – 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, 2,20-azinobis-3-ethylbenzothiozoline-6-sulfonic acid, and ferric reducing antioxidant power were measured using standard spectrophotometric methods.Results: In vitro digestion of pili pomace resulted in reduction of phenolic compounds.Condensed tannins and anthocyanins were released in the gastric and intestinal stages,while total polyphenols and flavonoids after fermentation simulating colonic conditions.Antioxidant values of the bioavailable fractions showed that more than 90% of activity was lost during simulated digestion.Conclusions: Findings indicate that pili pomace is a promising functional ingredient for food and dietary supplements which can furnish potentially bioavailable phenolic antioxidants to the body. 展开更多
关键词 Antioxidant In VITRO DIGESTION Phenolics BIOAVAILABILITY Canarium ovatum pili
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Are type IV pili involved in <i>Vibrio anguillarum</i>virulence towards sea bass (<i>Dicentrarchus labrax</i>L.) larvae?
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作者 Ingeborg Frans Pieter Busschaert +5 位作者 Kristof Dierckens Chris W. Michiels Kris A. Willems Bart Lievens Peter Bossier Hans Rediers 《Agricultural Sciences》 2013年第6期30-38,共9页
Vibrio anguillarum, an important bacterial fish pathogen, expresses a variety of virulence factors contributing to its ability to cause vibriosis in fish. Many virulence factors of this pathogen remain however unknown... Vibrio anguillarum, an important bacterial fish pathogen, expresses a variety of virulence factors contributing to its ability to cause vibriosis in fish. Many virulence factors of this pathogen remain however unknown. For example, a type IV pilus system was previously reported to be potentially involved in the virulence of this bacterium but no experimental evidence was reported yet. In this study, complete genome sequencing of V. anguillarum strain VIB15, shown to be highly virulent towards sea bass (Dicen- trarchus labrax L.) larvae, revealed the presence of a PilA pilin. A V. anguillarum VIB15 pilA mutant was constructed and the pathogenicity of this mutant was assessed in a gnotobiotic sea bass system developed for virulence screening. Our results suggest that the V. anguillarum pilA gene is not crucial for virulence towards sea bass larvae. Possibly, another type IV pilus system identified in V. anguillarum, showing homology to the mannose-sensitive hemagglutinin pilin of Vibrio cholerae, may complement the pilA mutation. Alternatively, the type IV pilus system has a role in infection of juvenile or adult fish, rather than in the larval phase. As such, further research is required to unravel the potential role of type IV pili in V. anguillarum virulence. 展开更多
关键词 VIRULENCE VIBRIO ANGUILLARUM Fish Pathogen Type IV pili
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Study on the mechanism of Porphyromonas gingivalis pili mediated ather osclerosis
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作者 Zhu-Ling Guo Sha-Sha Liu +1 位作者 Yu Zhang Qi-Ya Fu 《Journal of Hainan Medical University》 2020年第18期69-72,共4页
Chronic periodontitis is the most common infectious periodontal disease caused by plaque biofilm.Pili is an important bacterial component of Porphyromonas gingivalis.Epidemiological studies have shown that chronic per... Chronic periodontitis is the most common infectious periodontal disease caused by plaque biofilm.Pili is an important bacterial component of Porphyromonas gingivalis.Epidemiological studies have shown that chronic periodontitis can increase the risk of cardiovascular disease,and atherosclerosis is the pathological basis of cardiovascular disease.This article will summarize the mechanism of Porphyromonas gingivalis pili protein mediated chronic periodontitis and atherosclerosis,in order to expand new ideas of disease prevention and treatment. 展开更多
关键词 Porphyromonas gingivalis pili Chronic periodontitis ATHEROSCLEROSIS
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《温病条辨》霹雳散方证探析
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作者 王居义 李楠 吴文清 《中国中医急症》 2024年第5期902-905,921,共5页
霹雳散见于《温病条辨》,其制方特色、学术渊源、临床应用、同名方剂等未见系统性地考察。霹雳散同名方剂用于外感热病、妇科崩漏、内科癫狂、温病中燥、痢疾痧霍、中恶惊风6种病证。《温病条辨》霹雳散是针对1821年顺天真性霍乱大流行... 霹雳散见于《温病条辨》,其制方特色、学术渊源、临床应用、同名方剂等未见系统性地考察。霹雳散同名方剂用于外感热病、妇科崩漏、内科癫狂、温病中燥、痢疾痧霍、中恶惊风6种病证。《温病条辨》霹雳散是针对1821年顺天真性霍乱大流行而设,主治寒湿伤阳之证。其理论基础为吴鞠通秋燥胜复学说,主治病证有燥极似泽、吐泻厥痛的特点,其制方具有苦热刚燥、芳香逐秽的鲜明特色。该方丰富了中医治疗燥疫、寒湿疫一类疾病的辨治经验,与秋燥胜复学说一起拓展了中医燥淫致病的理论体系。 展开更多
关键词 霹雳散 《温病条辨》 秋燥胜气论 燥疫 方证
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舍饲条件下藏仔猪腹泻源大肠杆菌毒力和粘附因子基因检测与耐药性分析
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作者 李龙 谭占坤 +1 位作者 李文凤 刘锁珠 《湖北农业科学》 2024年第6期156-160,共5页
为有效预防和治疗藏仔猪腹泻,采用PCR和Kirby-Bauer纸片扩散法对西藏林芝市舍饲藏仔猪分离的102株腹泻源大肠杆菌(Escherichia coli)毒力基因、粘附因子基因和耐药性进行检测。大肠杆菌毒力基因和菌毛粘附因子基因检测结果表明,检出率... 为有效预防和治疗藏仔猪腹泻,采用PCR和Kirby-Bauer纸片扩散法对西藏林芝市舍饲藏仔猪分离的102株腹泻源大肠杆菌(Escherichia coli)毒力基因、粘附因子基因和耐药性进行检测。大肠杆菌毒力基因和菌毛粘附因子基因检测结果表明,检出率最高的菌毛粘附因子基因是F18(45.10%),其次是F4(15.69%),所有菌株均未检出F41基因;102株菌株中有37株菌株未检出菌毛粘附因子基因。毒力基因中检出率最高的是Stx2e基因(25.49%),其次为STb:EAST-1基因(21.57%)和STa:STb基因(17.65%)。大肠杆菌菌毛粘附因子基因和非菌毛粘附因子基因检测结果表明,在检出AIDA-1基因的菌株中菌毛粘附因子基因(F18、F4)的菌株占比为44.73%,在检出paa基因的菌株中菌毛粘附因子基因(F18、F4)的菌株占比为54.17%;在检出eae基因的菌株中没有检测到F4基因。大肠杆菌对氯霉素、四环素、氨苄西林和链霉素表现出高的耐药性,对3种及以上抗生素产生耐药性的大肠杆菌菌株数占总菌株数的86.27%。 展开更多
关键词 藏仔猪 腹泻源 大肠杆菌(Escherichia coli) 毒力基因 耐药性 菌毛粘附因子基因 非菌毛粘附因子基因
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鲍曼不动杆菌运动性、影响因素及其生物学作用的研究进展
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作者 张玲玲 成婷婷 王崇刚 《微生物与感染》 CAS 2023年第2期123-128,共6页
鲍曼不动杆菌是一种多重耐药的机会致病菌,其致病机制复杂多样,对人类健康造成了严重威胁,故研究其致病机制势在必行。细菌运动不仅在细菌的迁移中起作用,还与其毒力、耐药性、黏附性、趋化性及生物膜形成等密切相关。鲍曼不动杆菌因缺... 鲍曼不动杆菌是一种多重耐药的机会致病菌,其致病机制复杂多样,对人类健康造成了严重威胁,故研究其致病机制势在必行。细菌运动不仅在细菌的迁移中起作用,还与其毒力、耐药性、黏附性、趋化性及生物膜形成等密切相关。鲍曼不动杆菌因缺乏鞭毛早期被认为不具备运动性,然而随着研究的深入发现其可通过蹭行运动及表面相关运动在潮湿的表面移动,影响其运动性的因素主要包括IV型菌毛、群体感应、外排泵、趋化系统及蓝光感应等。本文主要就鲍曼不动杆菌的运动性、影响因素及运动性的生物学作用展开讨论,并为鲍曼不动杆菌感染的预防及治疗提供参考。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 运动性 IV型菌毛 自然转化能力
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“题书纪事诗”及书文化现象研究
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作者 陈翠翠 《图书馆杂志》 北大核心 2023年第11期117-123,共7页
黄丕烈在藏书题跋中提及的“题书纪事诗”,是指以藏书为吟咏对象并题写其上而成的诗作。本文通过考证分析“题书纪事诗”一词的来源、题诗的体例与机缘,可丰富黄丕烈藏书题跋的研究,区别其与“藏书纪事诗”两个易淆概念内涵。通过查阅... 黄丕烈在藏书题跋中提及的“题书纪事诗”,是指以藏书为吟咏对象并题写其上而成的诗作。本文通过考证分析“题书纪事诗”一词的来源、题诗的体例与机缘,可丰富黄丕烈藏书题跋的研究,区别其与“藏书纪事诗”两个易淆概念内涵。通过查阅整理出版的藏书题跋专集,搜集统计题诗数量并分析诗作形式和内容特点,发现这类诗作可称之为广义上的“题书纪事诗”,有助于拓展中国书文化研究的学术视野。 展开更多
关键词 黄丕烈 题书纪事诗 藏书题跋 书文化现象
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皮肤毛发移行疹2例
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作者 陈映丹 石平荣 +1 位作者 张天怡 刘超 《皮肤科学通报》 2023年第2期243-246,共4页
报告皮肤毛发移行疹2例。例1:患者男,36岁,发现右侧面颊黑色线状皮损1个月。皮肤科检查:右侧面颊部可见一长约10 cm的黑色线状皮损,皮损中央可见一红色炎性丘疹。皮肤镜下可见一均质的黑色线状结构穿行于皮下,皮损的一端及中央可见黄白... 报告皮肤毛发移行疹2例。例1:患者男,36岁,发现右侧面颊黑色线状皮损1个月。皮肤科检查:右侧面颊部可见一长约10 cm的黑色线状皮损,皮损中央可见一红色炎性丘疹。皮肤镜下可见一均质的黑色线状结构穿行于皮下,皮损的一端及中央可见黄白色无结构区,周围多角形血管网。皮肤组织病理:真皮内可见炎性肉芽肿结节,结节内可见组织细胞、多核巨细胞,中央可见裂隙样及不规则腔样结构。诊断:向内生长的毛发。例2:患者男,35岁,右足背黑色线状皮损5 d。皮肤科检查:右足背可见一长约1.5 cm的黑色线状隆起性皮损,皮损上可见数个浅在的小脓疱。皮肤镜下可见一均质的黑色线状结构穿行于皮下,未见毛囊结构。皮肤组织病理:角层下见一大疱形成,疱内见中性粒细胞及纤维素性渗出,真皮浅层毛细血管扩张,管周组织炎症细胞浸润。诊断:皮肤内毛发移行。治疗:2例患者均于皮损近端切除活检,镊子拔出毛发后痊愈,随访1年无复发。 展开更多
关键词 皮肤毛发移行 向内生长的毛发
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薄层扫描法测定龙胆泻肝丸中马兜铃酸的含量 被引量:16
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作者 付桂香 赵世萍 +4 位作者 陈文 谌贻璞 张相林 刘晓 高艳丽 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第3期171-173,共3页
目的:用薄层扫描法对龙胆泻肝丸中马兜铃酸进行定量分析。方法:双波长反射法锯齿扫描,λ_S=395nm,λ_R=500nm;狭缝宽度:0.4 mm×0.4 mm;线性化器:SX=3;展开剂:苯-甲醇-36%醋酸(17:2:0.2)。结果:马兜铃酸标准曲线线性范围0.9~4.5μ... 目的:用薄层扫描法对龙胆泻肝丸中马兜铃酸进行定量分析。方法:双波长反射法锯齿扫描,λ_S=395nm,λ_R=500nm;狭缝宽度:0.4 mm×0.4 mm;线性化器:SX=3;展开剂:苯-甲醇-36%醋酸(17:2:0.2)。结果:马兜铃酸标准曲线线性范围0.9~4.5μg(r=0.9998),平均回收率96.78%(n=6)。结论:方法准确,回收率好。 展开更多
关键词 薄层扫描法 测定 龙胆泻肝丸 马兜铃酸 含量测定
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禽病原性大肠杆菌1型菌毛的分离与鉴定 被引量:9
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作者 高崧 姜焱 +2 位作者 刘业兵 张如宽 刘秀梵 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期521-526,共6页
以旋涡混合法使禽病原性大肠杆菌分离株566 、1794 和TK3 菌毛脱落,经硫酸铵沉淀、透析后进行蔗糖密度梯度离心,收集密度为110 至115g/cm3 的蛋白带,经SDSPAGE测定,3 株菌菌毛蛋白的分子量分别... 以旋涡混合法使禽病原性大肠杆菌分离株566 、1794 和TK3 菌毛脱落,经硫酸铵沉淀、透析后进行蔗糖密度梯度离心,收集密度为110 至115g/cm3 的蛋白带,经SDSPAGE测定,3 株菌菌毛蛋白的分子量分别在175 、170 和170kD;提纯菌毛保留了甘露糖敏感性凝集豚鼠红细胞的能力,证明它们为1 型菌毛;从1794 株提取的1 型菌毛免疫BALB/C 小鼠产生的高免血清在Western blot 中与3 个菌株的相应菌毛蛋白均呈阳性反应。上述结果表明,受检的3 株禽病原性大肠杆菌均表达了1 型菌毛,其分子量在175 ~170kD 之间,3 个菌株的1 展开更多
关键词 大肠杆菌 1型菌毛 分离 鉴定 禽源 病原菌
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禽病原性大肠杆菌Ⅰ型菌毛单克隆抗体的研制及其对分离株的检测 被引量:14
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作者 刘业兵 高崧 +2 位作者 彭大新 张如宽 刘秀梵 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期141-151,共11页
从禽病原性大肠杆菌分离株 TK3 ( O1 )提取 型菌毛免疫 BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 ,获得 4株能稳定分泌针对 型菌毛的单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,分别命名为 a B6 、b G5 、c F3和 c G3。单抗阻断甘露糖敏感血凝试验... 从禽病原性大肠杆菌分离株 TK3 ( O1 )提取 型菌毛免疫 BALB/c小鼠 ,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合 ,获得 4株能稳定分泌针对 型菌毛的单克隆抗体杂交瘤细胞株 ,分别命名为 a B6 、b G5 、c F3和 c G3。单抗阻断甘露糖敏感血凝试验、免疫胶体金和 Western blot试验证明 ,单抗是 型菌毛特异的。这些单抗培养上清及腹水的 ELISA效价为分别为 1 0 - 2~ 1 0 - 3和 1 0 - 5~ 1 0 - 6 ;腹水的平板凝集价为 1∶ 1 2 8~ 1∶ 2 56。上述4株单抗对 77株带 型菌毛的禽病原性大肠杆菌优势血清型分离株进行了检测 :O1 8分离株阳性率为72 %,O78分离株阳性率为 1 7%,O2分离株阳性率为 3 3 %,O88分离株阳性率 89%,O1 1分离株阳性率为60 %,O2 6分离株阳性率为 3 3 %。表明研制的 型菌毛单抗能检出大多数 O1 8、O88、O1 1分离株的 型菌毛 ,而对 O78、O2、O2 展开更多
关键词 大肠杆菌 I型菌毛 单克隆抗体 检测
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广西鸡大肠杆菌的分离与鉴定 被引量:23
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作者 韦平 李康然 施万球 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 1989年第2期31-38,共8页
从广西6个代表性鸡场分离出132株大肠杆菌,分离率平均为37.82%,其中81.82%的菌株分离自2~8周龄的鸡;经血清学鉴定,流行的血清型主要有11种,其中O_(50)、O_(133)、O_(15)、O_(90)、O_(146)、O_(92)及O_(84)等7种属首次报道;分离物经1... 从广西6个代表性鸡场分离出132株大肠杆菌,分离率平均为37.82%,其中81.82%的菌株分离自2~8周龄的鸡;经血清学鉴定,流行的血清型主要有11种,其中O_(50)、O_(133)、O_(15)、O_(90)、O_(146)、O_(92)及O_(84)等7种属首次报道;分离物经10项生化指标试验,有99.24%的菌株在醋酸铅琼脂上有轻度的H _2S产生,其余9项反应均符合典型大肠杆菌的特征;经电镜观察,发现O_1、O_(50)、O_(78)、O_(84)、O_(88)、O_(90)和O_(92)等7种血清型有菌毛,在培养72小时后,菌毛的数量及长度均比培养24小时者有所增加;主要血清型分别对鸡进行皮下和气管内两种途径的致病性试验,结果有10种是致病性的,而且还证实菌毛与呼吸道感染的致病性有直接的关系。 展开更多
关键词 鸡大肠杆茵病 致病性大肠杆菌 血清型 菌毛
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禽病原性大肠杆菌1型菌毛主要亚单位结构基因的克隆、测序与表达 被引量:5
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作者 高崧 彭大新 +2 位作者 吴晓东 张如宽 刘秀梵 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期292-298,共7页
从禽源大肠杆菌037(O78)、166(O78)、120(O18)分离株和猪源大肠杆菌107/86分离株分别提取基因组DNA,并以此为聚合酶链反应(Polymerasechainreaction,PCR)的模板,扩增上述分离株的1型菌毛主要亚单位结构基因pilA,通过其编码的主要菌毛亚... 从禽源大肠杆菌037(O78)、166(O78)、120(O18)分离株和猪源大肠杆菌107/86分离株分别提取基因组DNA,并以此为聚合酶链反应(Polymerasechainreaction,PCR)的模板,扩增上述分离株的1型菌毛主要亚单位结构基因pilA,通过其编码的主要菌毛亚单位FimA蛋白氨基酸的序列比较发现:3个禽源株间FimA的同源性为94 3%至99 0%;禽源株和猪源株间FimA的同源性为89 6%至91 1%。通过对重组大肠杆菌的菌体裂解物的SDS PAGE电泳分析及Westernblot分析,禽源大肠杆菌O78037株、O18120株出现了一致的强反应,O78166株反应较弱,而猪源大肠杆菌107/86株反应最弱。这些结果表明:禽源大肠杆菌与猪源大肠杆菌1型菌毛间存在抗原多样性,这种多样性甚至出现在禽病原性大肠杆菌同一血清型的2个不同分离株之间,如O78037株O78166株之间,尽管其FimA氨基酸的同源性很高,为99 0%。 展开更多
关键词 病原性大肠杆菌 1型菌毛 亚单位 结构基因 基因克隆 基因测序 基因表达
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腐蹄病节瘤拟杆菌纤毛蛋白的基因克隆与表达 被引量:7
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作者 王克坚 Dhungyel Om +5 位作者 冯书章 吴广谋 杨海滨 Egerton JR 朱平 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期362-366,共5页
用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Kle... 用 PCR技术从腐蹄病 E型节瘤拟杆菌克隆出具免疫保护性抗原 0 .93 kb纤毛蛋白基因 ( Pili基因 ) ,利用该基因构建了纤毛蛋白基因表达载体。先将 PCR产物 Pili基因克隆于 TA Cloning System,扩增后 ,用Eco R 酶切 ,低熔点胶回收 ,经 Klenow补平后 ,用 T4DNA连接酶与中间载体 p PLλ连接 ,将 Pili基因克隆于 p PLλ载体 ;经 Bam H 、Bgl 、Pvu 和 Smal +Bgl 酶切鉴定和 p PLλ-Pili重组质粒 Pili基因序列测定正确后 ,扩增 p PLλ-Pili重组质粒 ,用 Bam H 酶切出 2 .1 kb大小的片段 ,回收后 ,与 p ME2 90表达质粒连接 ,转染宿主细胞 PAK/2 pfs,在营养肉汤中进行 Pili基因的表达。培养 1 8~ 2 4 h后 ,离心 ,向上清液中加入 0 .1mol/L Mg Cl2 提取重组纤毛蛋白。用羊抗兔 E型节瘤拟杆菌抗血清与提取的重组纤毛蛋白进行对流免疫电泳 ,证明重组纤毛蛋白具有特异性 ;染料结合法测定 1 0 0 0 m L上清液中表达纤毛蛋白粗含量约为 1 1 4mg。SDS-PAGE测定重组纤毛蛋白的表达量占总菌量的 1 1 .8%,Western 展开更多
关键词 腐蹄病 节瘤拟杆菌 纤毛蛋白 基因克隆
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牛乳腺炎无乳链球菌PI-2a菌毛岛屿辅助蛋白AP1、BP、AP2三基因的串联表达及其免疫原性研究 被引量:4
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作者 布日额 王金良 +5 位作者 吴金花 锡林高娃 陈金龙 孙立杰 王华 朝洛蒙 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期138-141,共4页
为探究无乳链球菌菌毛岛屿3个亚基AP1、AP2、BP融合蛋白的抗原性,本研究根据该3个亚基基因的主要抗原结构域序列设计并合成引物,通过重叠延伸PCR技术获得上述3个亚基的串联核苷酸片段,并插入pET-30a(+)载体,转化至BL21(DE3)感受态细胞... 为探究无乳链球菌菌毛岛屿3个亚基AP1、AP2、BP融合蛋白的抗原性,本研究根据该3个亚基基因的主要抗原结构域序列设计并合成引物,通过重叠延伸PCR技术获得上述3个亚基的串联核苷酸片段,并插入pET-30a(+)载体,转化至BL21(DE3)感受态细胞后诱导表达,表达蛋白经亲和层析纯化后进行western blot鉴定和小鼠免疫实验。结果表明,AP1-AP2-BP融合抗原具有良好的反应原性和免疫原性。本研究为进一步研究无乳链球菌基于AP1-BP-AP2融合蛋白的致病机制、检测制剂及亚单位疫苗研制提供了实验依据。 展开更多
关键词 无乳链球菌 菌毛岛屿 AP1 BP AP2 串联表达
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病原性铜绿假单胞菌超微结构 被引量:4
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作者 高庆伟 范昕建 +2 位作者 汪冰 冯萍 黄安华 《华西医学》 CAS 北大核心 1996年第4期395-396,共2页
本文用扫描电镜和透射电镜对70株患者痰中分离的铜绿假单胞菌临界点干燥、超薄切片和负染标本进行了超微结构观察。发现菌细胞一端只有单一鞭毛,长约530nm,呈中空管状;有47/70的菌细胞壁外层可见一厚度为23nm的粘多... 本文用扫描电镜和透射电镜对70株患者痰中分离的铜绿假单胞菌临界点干燥、超薄切片和负染标本进行了超微结构观察。发现菌细胞一端只有单一鞭毛,长约530nm,呈中空管状;有47/70的菌细胞壁外层可见一厚度为23nm的粘多糖包绕;58/70的菌细胞壁上有菌毛;此外,尚可见到菌细胞表面带有直径为7nm左右的外分泌颗粒。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 菌毛 鞭毛 粘多糖 超微结构
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运用SELEX技术筛选特异性高亲和IVB型纤毛结构蛋白RNA适配子 被引量:4
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作者 潘勤 章晓联 +4 位作者 汪付兵 何攀文 吴红艳 屈雪菊 戚中田 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期280-283,共4页
目的 获得特异性高亲和IVB型纤毛结构蛋白prepilS的RNA适配子 (aptamers) ,为开发预防、治疗伤寒杆菌肠热症的新型药物试剂奠定基础。方法 采用SELEX技术 (SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEn richment)筛选IVB型纤毛结构蛋... 目的 获得特异性高亲和IVB型纤毛结构蛋白prepilS的RNA适配子 (aptamers) ,为开发预防、治疗伤寒杆菌肠热症的新型药物试剂奠定基础。方法 采用SELEX技术 (SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEn richment)筛选IVB型纤毛结构蛋白prepilS的特异性适配子 ,通过体外构建一个长度为 88nt含有 30个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库 ,PCR扩增为双链DNA随机文库后 ,体外转录构建RNA随机文库 ,以Sepharose 4B为筛选介质 ,筛选具有特异性高亲和力prepilS蛋白的RNA适配子。结果 经 8轮筛选获得具有特异性高亲和prepilS蛋白的RNA适配子库。结论 成功地筛选出具有特异性高亲和力的RNA适配子库 ,该RNA适配子库可显著抑制伤寒杆菌侵入THP 展开更多
关键词 伤寒杆菌 m型纤毛结构蛋白 RNA适配子 人体细胞
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一株鸡大肠杆菌1型及P型菌毛蛋白结构基因的克隆 被引量:4
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作者 戴鼎震 汤厚宽 +2 位作者 郑明球 蔡宝祥 陈溥言 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 2000年第4期281-284,共4页
据国外发表的人致病性大肠杆菌 1型及P型菌毛蛋白结构基因 (pilA及papA)序列 ,设计并合成了分别位于PilA及papA保守区的 2对引物。经PCR从 1株带有甘露糖敏感血凝特性 (MSHA)及甘露糖抵抗血凝特性 (MRHA)的鸡致病性大肠杆菌 (HJ2 0e)染... 据国外发表的人致病性大肠杆菌 1型及P型菌毛蛋白结构基因 (pilA及papA)序列 ,设计并合成了分别位于PilA及papA保守区的 2对引物。经PCR从 1株带有甘露糖敏感血凝特性 (MSHA)及甘露糖抵抗血凝特性 (MRHA)的鸡致病性大肠杆菌 (HJ2 0e)染色体中扩增到大小分别在 6 5 7bp及 5 41bp的 2种阳性产物。通过核酸序列测定分别确证所扩增的DNA片段分别为pilA及papA基因。经酶切、连接、转化和筛选 。 展开更多
关键词 鸡大肠杆菌 P型菌毛 结构基因 1型菌毛 基因克隆
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