利用家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac表达系统在BmN细胞中可溶性表达PRG-1蛋白(英文)

杆状病毒Bac-to-Bac表达系统由于操作简便等优点,被广泛应用于外源蛋白的表达。利用新构建的家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac系统可溶性表达一个大分子质量的融合蛋白———piwi相关基因编码蛋白PRG-1。为了提高目的蛋白的表达量,对重组病毒感染剂量及产物收获时间进行优化,并利用GST亲和层析纯化融合蛋白。结果表明在家蚕卵巢培养细胞BmN中表达的重组GST-PRG-1是可溶性蛋白;最佳的感染条件是病毒粒子对BmN细胞的感染复数(MOI)=1,并在感染后96 h收获细胞。试验结果表明,新构建的家蚕核型多角体病毒Bac-to-Bac表达系统可用于大分子蛋白的可溶性表达。

MRP8过表达促进重组酿酒酵母外切纤维素酶生产

增强酿酒酵母纤维素酶分泌能力,为提高利用联合生物加工生产纤维素乙醇的效率提供基础。采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术,在分泌表达外切纤维素酶CBH1的酿酒酵母Y294中过表达线粒体核糖体蛋白基因MRP8。与对照菌株相比,过表达MRP8重组酵母的胞外CBH1酶活提高了约80%。实时定量PCR结果分析表明,在MRP8过表达突变体中,CBH1转录水平高于对照菌株,但是与蛋白折叠和分泌相关的关键基因转录水平没有明显变化。在刚果红平板和含有衣霉素或二硫苏糖醇的平板上生长没有受到影响。胞内ATP含量和活性氧积累未发现显著差别。本研究表明MRP8过表达促进外切纤维素酶的生产。

HSV-1 UL41基因编码蛋白的RNase活性及其调控

单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type-1,HSV-1)UL41基因编码一种皮层蛋白,该蛋白质具有核糖核酸酶(ribonuclease,RNase)活性,能特异性地降解一些宿主和病毒信使RNA(messenger RNA,m RNA),参与宿主免疫逃逸,与其他蛋白质相互作用调控其RNase活性。该文概述了HSV-1UL41基因编码蛋白的RNase活性及其调控机制,以期为该基因的深入研究提供参考。

告达庭通过调控menin/β-catenin表达抑制卵巢癌生长

目的研究告达庭对卵巢癌生长的影响及其机制。方法细胞实验分为4组:对照组、低剂量组(15μmol/L)、中剂量组(30μmol/L)、高剂量组(60μmol/L)告达庭作用卵巢癌细胞CAOV324 h。CCK-8检测细胞增殖;流式细胞术检测凋亡;Western blot检测相关蛋白表达。采用RNA干扰技术,抑制多发性内分泌腺瘤1型基因编码蛋白(menin)表达,观察告达庭对凋亡相关蛋白的表达作用。建立卵巢癌皮下移植瘤模型,观察瘤的生长,实时荧光定量PCR(realtime PCR)检测凋亡相关基因的表达。结果告达庭可抑制卵巢癌细胞生长,并促进其凋亡;告达庭干预后,Nuclearβ-catenin、DNA甲基转移酶1(DNMT1)、survivin及c-myc表达均减少,而menin表达增加。抑制menin表达,逆转告达庭对相关蛋白的表达作用。在体内实验中,告达庭可抑制移植瘤的生长;抑制menin表达,逆转告达庭对卵巢癌组织内相关基因表达。结论告达庭可抑制卵巢癌增殖,并促进其凋亡,机制可能与调控menin/β-catenin信号通路有关。