pl6及Ki-67蛋白在宫颈上皮内瘤变中的临床检测意义

目的：探讨宫颈上皮内瘤变（cIN）中p16及Ki一67蛋白的临床表达及意义。方法：收集本院经活检或手术切除的子宫颈组织标本97例，其中宫颈正常或非特异性炎性病变17例；cINI～Ⅲ55例，宫颈鳞状细胞癌25例。对全部组织标本的p16及Ki一67蛋白阳性表达情况进行检测。结果：cINⅡ、cINⅢ及宫颈癌之间的p16及Ki一67阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）。而cINI、cINⅡ、cINⅢ及宫颈癌患者的阳性表达率显著高于宫颈正常或非特异性炎性病变患者（P〈O．05），且p16及Ki一67阳性表达情况呈逐渐上升趋势。结论：p16蛋白能有效的对宫颈良陛病变、cIN及宫颈癌进行鉴别诊断，并能够通过p16的染色情况对cINI和cINⅡ～Ⅲ进行鉴别，能够有效对cIN的分级情况进行判断。宫颈高度病变可以根据Ki一67蛋白的阳性表达情况与宫颈癌进行鉴别，但在与宫颈低度病变的鉴别中，还需要联合p16蛋白的阳性表达情况进行区分。

PL6-10型高频疲劳试验机及其故障分析

一、前言高频疲劳试验机是我国近廿年来随着航空工业和空间技术迅速发展的需要而发展起来的一种材料试验机。它主要用来研究和发展新型材料,测定材料的力学性能。同时,也为承受高速和各种不同类型的动载荷构件做摸拟试验,以提供切合实际而可靠的数据。因此,高频疲劳试验机现已成为我国在开发材料研究领域中重要的测试设备之一。国产PL6-10型高频疲劳试验机是采用电磁激振器激励机械振动系统而工作的。

肺癌患者血清p16、FHIT、APC基因甲基化检测

目的:检测肺癌患者血清中抑癌基因p16、FHIT、APC的甲基化,探讨它们在肺癌发生和诊断中的临床价值。方法:收集120例原发性肺癌患者(肺癌组)、46例肺良性疾病患者(对照组)的血液标本,采用甲基化PCR方法检测2组患者血清p16、FHIT、APC基因甲基化。采用logistic回归分析肺癌发生的危险因素,计算上述基因甲基化诊断肺癌的准确率。结果:肺癌组血清中p16、FHIT、APC的甲基化率分别为37.5%、34.2%、31.7%,对照组中分别为6.5%、13.0%、10.9%,差异有统计学意义(P均<0.05)。Logistic回归分析提示p16、FHIT基因甲基化均为肺癌发生的独立危险因素,OR(95%CI)分别为7.509(2.160~26.099)、2.927(1.096~7.814)(P均<0.05)。p16、FHIT、APC基因甲基化单项诊断肺癌的准确率分别为53%、49%、47%,3种基因甲基化联合诊断肺癌的准确率为87%,优于单项指标。结论:p16、FHIT基因甲基化均为肺癌发生的独立危险因素;联合检测p16、FHIT、APC甲基化可提高肺癌诊断的准确性。

p16/Ki-67双染在宫颈癌及癌前病变初筛中的应用价值研究

目的:评价采用p16/Ki-67双染检测技术作为宫颈癌及癌前病变初筛方法的效果及应用价值。方法:对重庆市万州区982例年龄35~64岁有性生活的妇女进行宫颈癌筛查。每位妇女均接受了人乳头瘤病毒DNA(HPV DNA)检测、Thin Prep液基细胞学检查、p16/Ki-67双染检测,对结果异常者进行阴道镜检查,阴道镜下在可见病变处直接取活检,无可见病变时,行宫颈管搔刮术(ECC)。比较3种方法分别作为初筛手段识别宫颈癌前病变(高级别鳞状上皮内病变)及浸润癌的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值等指标,以受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)综合分析3种方法作为宫颈癌初筛手段的应用价值。结果:最终966例妇女进入研究,共检出高级别鳞状上皮内病变及浸润癌患者42例。HPV DNA检测、液基细胞学检查和p16/Ki-67检测对宫颈癌及癌前病变患者的灵敏度分别为97.6%、88.1%、92.9%;特异度分别为84.1%、78.8%、82.8%;阳性预测值分别为21.8%、15.9%、19.7%;阴性预测值分别为99.9%、99.3%、99.6%。p16/Ki-67检测的AUC分别与HPV DNA检测、液基细胞学检查相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:p16/Ki-67双染检测初筛宫颈癌及癌前病变的效果与HPV DNA检测及液基细胞学检查相似,因其具有简便、客观、高效、易于重复的特点,p16/Ki-67双染检测为宫颈癌及癌前病变的有效初筛提供了一种新选择。

食管鳞癌组织中p16基因缺失及甲基化检测

目的探讨食管癌组织中p16基因表达缺失的机制。方法采用PCR、DHPLC、MSP及免疫组化的方法,检测45例食管鳞癌组织及其相应的间变组织和正常食管上皮组织中p16基因的缺失、突变、甲基化状态及蛋白表达情况。结果正常食管上皮组织中p16蛋白均为正常表达(45/45,100%),间变和癌组织中异常表达率分别为84.4%(38/45)和91.1%(41/45),3者间异常表达率差异有统计学意义(χ2=20.03,P<0.001)。p16蛋白表达异常的41例癌组织中,纯合型甲基化发生率为80.48%(33/41),杂合缺失发生率58.53%(24/41),不缺失发生率41.46%(17/41),均高于p16蛋白表达正常的癌组织。结论该地区食管癌组织中p16基因主要通过纯合型甲基化失活。

p16基因甲基化及蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达

目的探讨p16基因甲基化及蛋白在人非小细胞肺癌组织中的表达情况。方法应用甲基化特异性PCR法(MS-PCR)及免疫组化SP法检测45例非小细胞肺癌组织、21例肺良性疾病组织中p16基因甲基化及蛋白的表达情况。结果肺良性疾病中p16基因甲基化阳性率低于癌组织,差异有显著性(P=0.001),p16基因甲基化与非小细胞肺癌细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05);肺良性疾病中p16蛋白阳性率高于癌组织,差异有显著性(P=0.007);p16蛋白表达与非小细胞肺癌临床分期、细胞分化程度及淋巴结转移情况有明显的相关性(P<0.05)。p16甲基化和p16蛋白表达缺失存在相关性(P=0.004)。结论p16基因甲基化及蛋白的表达情况与非小细胞肺癌的发生、发展有关。

前列腺癌中E-钙粘素、p16及雌激素受体基因甲基化的检测及其临床意义

目的:研究前列腺病变中E-钙粘素、p16和雌激素受体(ER)基因启动子CpG岛甲基化状况及其与临床资料的关系,探讨基因过甲基化在前列腺癌(PCa)发生发展中的作用及其临床意义。方法:收集石蜡包埋前列腺全切术标本:良性前列腺增生(BPH)13例,高级别前列腺上皮内瘤(HGPIN)10例,有随访记录的PCa 20例。采用甲基化特异性PCR(MSP)技术对E-钙粘素、p16和ER基因CpG岛甲基化进行检测。结果:E-钙粘素、p16和ER基因过甲基化在PCa中的发生率分别为30%、25%和65%。非恶性病变(BPH和HGPIN)很少发生DNA过甲基化。结论:PCa的发生及进展与E-钙粘素、p16和ER基因过甲基化密切相关,检测甲基化状况对HGPIN与PCa的鉴别诊断可能有辅助作用。E-钙粘素和ER基因过甲基化可能提示预后差。

肝癌患者血清p16、Runx3基因甲基化及其与临床病理参数的相关性

目的:探讨血清p16和Runx3基因启动子区CpG岛异常甲基化与原发性肝癌(hepatocellular carcino-ma,HCC)关系。方法:采用甲基化特异性PCR(MSP)法对56例HCC患者、40名健康体检者、40例乙肝患者和40例肝硬化患者血清p16和Runx3基因甲基化状况进行检测。结果:HCC患者血清p16和Runx3基因甲基化检出率分别为69.6%(39/56)和66.1%(37/56),而肝硬化患者、乙肝患者和健康体检者均未检出基因甲基化,与HCC组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果均未发现以α=0.05为显著性水准进入回归模型的变量。结论:HCC患者血清中可检测到p16和Runx3基因的甲基化,有助于肝癌的诊断、治疗和预后评估。

术后化疗联合榄香烯与单纯手术治疗对食管癌的干预效果及其与患者外周血淋巴细胞cyclinD1、p16的表达水平变化的关联分析

目的探讨化疗联合榄香烯与单纯手术治疗对食管癌的干预效果及其与患者外周血淋巴细胞cyclinD1、p16表达水平变化的关联。方法本研究选取食管癌患者59例,包含单纯手术治疗患者30例(对照组)和术后化疗并且联合使用榄香烯进行治疗的观察组患者29例。比较分析化疗联合榄香烯与单纯手术治疗对食管癌的干预效果,并分析其与患者外周血淋巴细胞cyclinD1、p16的表达水平变化的关联。采用SPSS 17.0统计学软件进行分析。结果随访比较2组患者治疗后2年的疗效情况,观察组无病生存时间为(12.58±7.12)月,中位无病生存时间为13.5个月,均略高于对照组。2组患者治疗前的cyclinD1水平及p16水平均未见差别;治疗后2组的cyclinD1水平分别为(2.43±1.42)、(4.03±1.54),p16水平分别为(6.95±2.75)、(5.02±2.55),组间均存在统计学差异(P<0.01)。结论手术干预对于集体细胞周期蛋白组的调控会产生一定影响,cyclinD1与p16的双向下调有可能提示术后肿瘤的复发与转移。同时榄香烯干预会影响cyclinD1加速下调,p16下调则会受到相对抑制,可能对于控制术后复发转移有一定的功效。

高危HPV病毒阳性宫颈上皮细胞P16、Ki-67的表达

目的研究人乳头瘤病毒(HPV)高危型HPV-DNA阳性宫颈上皮细胞不典型增生和低级别宫颈上皮内瘤变(Lowgrade Squamous Intraepithelial Lesion,LSIL)患者pl6、Ki-67表达情况。方法用Hybrid CaptureⅡ(HC2)或FQ-PCR体外扩增技术检测宫颈上皮细胞高危型HPV﹣DNA,同时行液基细胞学检查。对97例高危型HPV-DNA阳性且液基细胞学诊断为不典型增生(ASCUS)或CINⅠ或CINⅡ的患者,行阴道镜检查取可疑宫颈组织标本多点活检并En Vision两步法进行免疫组化标记pl6、Ki-67。结果 97例宫颈上皮细胞高危HPV-DNA阳性患者中,宫颈组织CINⅡ级38例,CINⅠ级35例,炎症和(或)ASCUS 24例。P16标记结果 :3例+++,30例++,39例+,P16阳性表达率为74.2%;Ki-67标记结果 :3例+++,30例++,30例+,Ki-67阳性表达率为64.9%。炎症和(或)ASCUS、CINⅠ、CINⅡ三者比较,P16和Ki-67的阳性率和阳性程度具有极显著性差异(P<0.01)。结论高危HPV病毒阳性宫颈上皮细胞随着病情严重程度增加pl6、Ki-67的阳性率和阳性程度均升高,pl6、Ki-67的检测对CIN的准确分级有利。

多发性骨髓瘤中p16、p15基因甲基化及其mRNA表达的研究

目的探讨p16、p15基因的高甲基化及其mRNA转录阻抑与多发性骨髓瘤的发病和进展之间的关系。方法采用甲基化敏感的限制性内切酶联合聚合酶链反应方法(REP法),检测了28例多发性骨髓瘤患者骨髓细胞p16、p15基因5'端启动子区的甲基化状态,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测多发性骨髓瘤患者p16、p15基因mRNA表达情况。结果p16、p15基因启动子区过度甲基化率分别为57.14%(16/28)、64.28%(18/28),53.57%(15/28)患者同时存在p16、p15基因启动子区过度甲基化。大多数存在甲基化的患者不表达p16、p15基因mRNA。结论p16、p15基因的高甲基化与多发性骨髓瘤的发病有关,p16、p15基因甲基化与其转录阻抑高度相关。

口咽鳞癌p16蛋白以及EGFR表达在放疗中的临床意义

目的探索口咽鳞癌患者中p16蛋白状态以及EGFR表达对放疗近期和远期疗效的影响。方法回顾性分析首程治疗为本中心放疗且留存有放疗前肿瘤病理标本的39例口咽鳞癌患者,将患者按照p16蛋白状态和EGFR表达进行分组,比较放疗近期疗效以及总生存情况。结果 39例口咽鳞癌患者以Ⅳ期为主(84.6%),其中23例患者(59.0%)p16蛋白表达阳性。p16(+)者放疗后可以获得更好的肿瘤退缩,而EGFR的表达不同未发现与肿瘤退缩情况相关,多因素分析显示p16蛋白是影响总生存的独立预后因素。结论 p16蛋白阳性的口咽癌患者较阴性者放疗敏感性更高、预后更好,但需要扩大样本量进行验证。

宫颈液基细胞中p16INK4a和cyclin E蛋白表达及其对CIN Ⅰ患者预后的评估价值

目的:探讨宫颈液基细胞中p16INK4a和cyclin E蛋白表达及其对CINI患者预后的评估价值。方法:收集我院病理科2005-10/2008-10液基细胞学诊断CIN Ⅰ级患者86例,均经病理组织学证实为CIN Ⅰ级。采用免疫细胞化学染色检测p16INK4a及cyclin E蛋白,同时随访1年,观察其表达与患者病情转归的相关性。结果:86例CIN Ⅰ级患者宫颈液基细胞中p16INK4a阳性表达59例(68.6%),cyclin E阳性表达70例(81.4%)。随访1年,54例CINI病变治愈,21例CIN Ⅰ病变未愈,11例进展为CIN Ⅱ及CIN Ⅲ(恶化)。59例pl6INK4A阳性表达病例中28例治愈,20例未愈,11例恶化;而27例pl6INK4A表达阴性者中26例治愈,1例仍未愈,均无恶化。两者比较有统计学差异(P<0.01)。70例cyclin E阳性表达病例中29例治愈,26例未愈,15例恶化;而16例cyclin E表达阴性者均治愈。两者比较有统计学差异(P<0.01)。结论:p16INK4a及cyclin E蛋白联合检测对判断宫颈CIN Ⅰ患者预后可能具有重要的临床价值。

胃肠道间质细胞瘤p16基因表达与增殖、凋亡的关系

目的 研究胃肠道间质细胞瘤 (GIST)中 p16基因表达与增殖、凋亡的关系[1] 。方法 我们研究了 86例GIST ,采用免疫组织化学法检测p16基因表达 ,采用胶银及免疫组织化学法检测核仁组成区嗜银蛋白 (AgNORs)、增殖细胞核抗原 (PCNA)、抗人增殖细胞抗体Ki 6 7(Ki 6 7)来反映细胞的增殖 ,采用原位末端标记法检测细胞凋亡指数(APl)来反映细胞的凋亡。结果 p16阳性、阴性表达组的AgNORs、PCNA、Ki 6 7表达分别为 3.6 8± 1.78、6 .5 6± 1.82 (P <0 .0 1)、11.37± 6 .2 6、2 2 .13± 8.73(P <0 .0 1)、3.2 5± 2 .4 7、7.74± 3.0 5 (P <0 .0 1) ;p16阳性、阴性表达组的APl分别为 14 .92± 6 .84、7.78± 3.91(P <0 .0 1)。结论 p16基因具有明显的抑制增殖、促进凋亡的作用 ,进而影响GIST的发生、发展。

急性白血病p16基因微卫星不稳定性及杂和性缺失的研究

目的分析急性白血病(AL)患者p16基因连锁的微卫星不稳定性(MSI)和杂和性缺失(LOH),了解p16基因改变与AL发生的关系。方法采用多重PCR方法检测53例AL患者骨髓及口腔黏膜细胞标本的p16基因连锁的3个微卫星位点(D9Sl62、D9S1748、D9S171),观察其MSI及LOH情况。结果53例AL患者中,MSI检出率为43.4%(23/53);位于9p21的p16基因连锁的微卫星D9Sl62、D9S1748、D9S171的LOH发生率分别为0(0/53)、5.7%(3/53)和9.4%(5/53),MSI发生率分别为13.2%(7/53)、7.6%(4/53)和7.6%(4/53)。结论AL患者p16基因连锁微卫星均可检测到高频率的MSI和LOH,说明p16基因突变与AL发生、发展有关。

5氮杂脱氧胞苷对乳腺癌MCF-7细胞中抑癌基因p16 mRNA表达的影响

目的探讨5氮杂脱氧胞苷(5-aza-cdr)对乳腺癌细胞中p16基因mRNA表达的影响。方法分别用5-aza-cdr 5、10和20μmol/L处理乳腺癌细胞MCF-7,未处理的MCF-7细胞作为对照。采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)对药物处理前后的细胞进行p16基因甲基化检测;绿色荧光染料实时反转录聚合酶链反应(SYBR GreenqRT-PCR)检测p16mRNA表达。结果在未处理的MCF-7细胞中(对照)p16基因呈完全甲基化状态,随着5-aza-cdr浓度增加,甲基化水平逐渐减弱,至5-aza-cdr 20μmol/L时p16基因甲基化状态完全被逆转;p16mRNA表达水平也随着药物剂量的递增逐渐增加,5-aza-cdr 20μmol/L处理组与5、10μmol/L处理组以及未处理组比较差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论乳腺癌细胞MCF-7中p16基因的甲基化能被5-aza-cdr逆转,去甲基化后可以促进p16mRNA表达。

p53及p16基因在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的:探讨p53及p16基因在甲状腺乳头状癌(papilliary thyroid carcinoma,PTC)中的表达及临床意义。方法:采用免疫组化方法检测157例PTC和30例甲状腺瘤组织中p53及p16基因的表达,并进行统计学分析。结果:PTC中p53的阳性表达率明显高于良性肿瘤(P<0.005),并随着PTC病理分级增高而显著增加(P<0.01),而且颈部淋巴结有转移者高于无转移者(P<0.05);而PTC中p16的阳性表达率明显低于良性肿瘤(P<0.005),且阳性表达率随着PTC病理分级增高而显著降低(P<0.01),p16在发生颈部淋巴结转移的乳头状癌中阳性表达率与未发生转移的乳头状癌中阳性表达率差异有统计学意义(P<0.01)。结论:p53基因的突变及p16基因的失表达都可能促进PTC的发生、发展及其转移,且p16基因可能在PTC的中晚期发挥重要作用,可作为判断PTC恶性程度的参考指标,具有重要临床参考价值。

EBV与癌基因P53、P21、P16在食道癌中表达与意义

目的 探讨EBV感染与癌基因P5 3、P2 1、P16在食道癌中的表达与意义。方法 对 6 0例食道癌病例 ,用原位杂交法检测EBV的表达 ,用免疫组化法检测P5 3、P2 1、P16的表达。结果 EBV阳性表达率为 72 % ,P5 3阳性表达率为 83% ,P2 1阳性表达率为 6 5 % ,P16阳性表达率为 30 %。在EBV阳性病例中P5 3、P2 1、P16的阳性病例分别为 2 7、2 8、5例。结论 EBV感染对食道癌的发生有一定的作用 ;P2 1、P16的表达与EBV感染有关 ;P5 3、P2 1。

p16基因研究现状与妇科肿瘤

p16基因是抑癌基因 ,在妇科肿瘤及多种肿瘤和细胞系中频繁杂合缺失、纯合缺失、突变及甲基化等 ,导致恶性肿瘤的发生。本文概括了 p16基因自发现以来的研究进展及其在妇科肿瘤中的表达 ,特别对 DNA甲基化研究及对人类恶性肿瘤的早期诊断 .

p16^(INK4a)与妇科恶性肿瘤关系的研究进展

p16INK4a基因是一种抑癌基因,在CyclinD-CDK4/6-pRb-E2F通路中发挥重要负反馈调节作用,大部分恶性肿瘤中均发现该基因表达缺失。p16INK4a低表达是卵巢癌不利的预后指数,可作为卵巢癌独立的预后因子;p16INK4a在宫颈癌中呈过表达,有助于宫颈癌的筛查;p16INK4a在子宫内膜癌发生发展中起着重要作用,与子宫内膜癌转移灶发生率的增加密切相关;而在外阴癌HPV感染型中,常有p16INK4a过表达,是可靠的HPV阳性外阴癌的标记物。