血浆游离胎儿DNA浓度联合血清妊娠相关血浆蛋白-A、β-人绒毛膜促性腺激素检测对孕妇不良妊娠结局的预测价值

目的探讨血浆游离胎儿DNA(cff-DNA)浓度联合血清妊娠相关血浆蛋白-A(PAPP-A)和β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)检测对孕妇不良妊娠结局的预测价值。方法选取2022年8月至2023年2月佛山复星禅诚医院收治的进行产检、唐氏筛查和无创产前DNA检查(NIPT)的195例孕妇作为研究对象。将发生不良妊娠结局的孕妇设为研究组(n=36),无不良妊娠结局的孕妇设为对照组(n=159)。检测两组血浆cff-DNA浓度、血清PAPP-A和β-hCG水平;采用Spearman分析血浆cff-DNA浓度、血清PAPP-A和β-hCG水平与不良妊娠结局的相关性;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血浆cff-DNA浓度、血清PAPP-A和β-hCG水平对不良妊娠结局的预测价值。结果与对照组比较,研究组血浆cff-DNA浓度和血清PAPP-A水平显著更低,血清β-hCG水平显著更高,差异具有统计学意义(P<0.05);Spearman分析结果显示,血浆cff-DNA浓度、血清PAPP-A和β-hCG水平与妊娠期高血压、子痫前期、早产、死胎、新生儿窒息和胎儿生长受限不良妊娠结局具有显著相关性(P<0.05);ROC曲线结果显示,血浆cff-DNA浓度单独预测孕妇不良妊娠结局的曲线下面积为0.807,截断值为11.82%;血清PAPP-A单独预测孕妇不良妊娠结局的曲线下面积为0.804,截断值为0.41;血清β-hCG单独预测孕妇不良妊娠结局的曲线下面积为0.815,截断值为2.56;预测效能比较结果显示,血浆cff-DNA浓度、血清PAPP-A和β-hCG水平联合预测孕妇不良妊娠结局的特异度(97.48%)和准确度(96.41%)均显著高于三者单独预测(P<0.05),误诊率(2.52%)显著低于三者单独预测(P<0.05)。结论血浆cff-DNA浓度联合血清PAPP-A、β-hCG检测对孕妇不良妊娠结局具有较高的预测价值。

孕妇血样采集后体外存放对血浆中胎儿游离DNA水平的影响

目的:探讨孕妇血样采集后体外存放过程中血浆游离DNA水平的影响因素。方法:采集孕妇血样,体外4℃存放6、36h后,实时定量PCR检测孕妇外周游离DNA水平,Annexin Ⅴ/PI双染色法流式分析血样白细胞死亡情况,速率法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)活性,单相酶扩散法测定血浆DNA酶活性。结果:血样体外存放36h后,血浆中β-globin基因的拷贝数较存放6h的样品显著增加,而SRY基因拷贝数明显减少;4℃存放条件下,妊娠晚期孕妇外周血中胎儿DNA占总DNA百分比从6h的(10.3±5.6)%下降到36h的(3.0±2.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。体外存放6h的血样中基本未检出死亡细胞,而存放36h的血样中分别检出了坏死和凋亡的白细胞;36h样品血浆中LDH活性较6h样品显著升高(P<0.05)。单相酶扩散法结果表明,血浆DNA酶在4℃时虽然活性显著减弱,但仍然保持降解DNA的能力。结论:血样采集后体外存放时间过长会导致血浆总游离DNA增多,而胎儿DNA减少,这种变化可能与血样体外存放过程中白细胞死亡和血浆DNA酶对胎儿DNA的降解作用有关;胎儿DNA抽提应在血样采集后尽早(6h内)进行。

孕妇血浆游离胎儿DNA中地中海贫血突变的基因诊断

本研究旨在建立一种妊娠早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见地中海贫血突变的导流杂交技术,用于地中海贫血的产前诊断。采用PCR技术与低密度基因芯片导流杂交技术相结合,设计6组PCR引物单管多重PCR体系及29种DNA探针,快速检测60例妊娠5-17周贫血孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血及β-地中海贫血。结果表明:60例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中,检出缺失型α-地中海贫血胎儿4例,β-地中海贫血胎儿3例,α及β混合型-地中海贫血胎儿1例。结论:采用本检测方法能快速准确地检测出3种常见的缺失型α-地中海贫血及17种常见β-地中海贫血的突变。

妊娠期糖尿病孕妇外周血胎儿游离DNA检测及其临床意义

目的通过检测妊娠期糖尿病孕妇外周血胎儿游离DNA浓度变化,分析基因表达水平是否正常,为诊断和阐明妊娠期糖尿病及其遗传效应提供理论依据。方法用血浆基因组DNA磁珠法抽提12~25周孕早中期孕妇外周血中胎儿游离DNA,妊娠期糖尿病组和健康对照组各15例,通过高通量测序检测孕妇胎儿染色体基因拷贝数及评估其风险值。结果与健康对照组比较,妊娠期糖尿病组的孕妇胎儿游离DNA文库浓度差异无统计学意义(P>0.05),染色体基因拷贝数无显著变化,但个别存在18号染色体基因微重复,可能与妊娠期糖尿病基因表达异常相关。结论对妊娠期糖尿病孕妇外周血胎儿游离DNA检测,将有助于进一步研究妊娠期糖尿病形成的分子机制及其临床诊断。

孕妇血浆中胎儿DNA的数量变化的研究

目的探讨孕妇血浆中胎儿游离DNA的数量变化的规律。方法提取68例孕妇血浆中的DNA,用实时荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术检测其胎儿SRY基因,并对其中怀男胎孕妇外周血浆中的胎儿DNA的数量进行动态分析。结果在怀男胎的孕妇外周血中均检测到了SRY基因,而在怀女胎的孕妇中未检测到。胎儿游离DNA最早出现的时间平均为7.7周,SRY基因拷贝数平均为5.53copies/ml。随孕期的增加,母血浆中胎儿DNA的含量在逐渐增加,并得出各孕周的标准参考值。在分娩后母血中胎儿DNA的含量就显著下降,到分娩后第二天就完全不能检测到。结论孕妇外周血浆中游离DNA的含量变化具有一定的规律,可以利用其进行无创伤性产前诊断。

母血浆胎儿游离DNA检测SRY基因

【目的】建立一种比较稳定可靠的无创性获取胎儿遗传物质的方法。【方法】从孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA,以Y染色体上的SRY区域为靶序列进行扩增,扩增产物经DNA测序进行确认,由此来确定我们获得的胎儿DNA。【结果】我们利用获取胎儿游离DNA的方法对16例孕妇进行检测,10例获得了成功,除1例未随访到结果之外,其他9例的随访结果和我们实验判断结果一致。【结论】我们初步建立的这种获得胎儿游离DNA的方法具有可靠性,胎儿游离DNA可以用于性连锁遗传病和单基因疾病的产前诊断。

孕妇外周血中胎儿游离DNA在产科中的应用

检测孕妇外周血中胎儿游离DNA,为无创产前诊断及妊娠相关性疾病的防治找到了新途径,此种技术具有诸多优势。孕妇外周血中胎儿游离DNA测序可用于胎儿非整倍体疾病、胎儿单基因遗传病、胎儿血型的检测、胎儿性连锁疾病的产前诊断筛查;胎儿游离DNA水平的变化可作为一种新的生物指标为妊娠相关性疾病的诊断及治疗提供帮助。随着分子生物学技术的不断发展,对孕妇外周血中胎儿游离DNA的研究将更加深入。

MiniSTR技术应用于孕妇血浆中胎儿游离DNA检测的研究

目的研究利用母血中胎儿游离DNA检测STR的方法。方法采集9名11—27孕周的孕妇抗凝血样并分离出血桨,提取血浆总DNA,利用ABI MiniFilerTM系统复合扩增D13S317、D7S820、D2S1338、D21S11、D16S539、D18S51、CSFIPO、FGA等8个常染色体miniSTR基因座和性别Amelogenin基因座,扩增产物经ABI 3100型基因测序仪作基因扫描检测,用GeneMapper ID 3.2软件分析结果。结果9例孕妇血浆样本中,均检出了父源性胎儿STR等位基因,D13S317等8个常染色体STR基因座中,平均检出胎儿特异等位基因3.1个/例。在性别Amelogenin基因座,Y等位基因检出的案例有5例,并且按ABI MiniFilerTM试剂盒的扩增条件,Amelogenin Y等位基因的荧光信号峰高均>50 RFU,平均占Amelogenin X等位基因峰高的8.45%;未检出Amelogenin Y等位基因的有4例,性别Amelogenin基因座的结果与出生后证实的胎儿性别相一致。结论MiniSTR技术适合于孕妇血浆中胎儿游离DNA的检测,在产前分子基因诊断中具有广泛的应用前景。

孕妇血浆中胎儿游离DNA测序在无创性产前检测中的应用

目的:探讨孕妇血浆胎儿游离DNA高通量测序(DNA测序)在无创产前检测中的应用价值。方法:对7561例唐氏筛查高风险孕妇行DNA测序,并行羊水细胞染色体核型分析确诊。结果:在7561例孕妇中,DNA测序异常40例,羊水细胞核型结果异常37例,DNA测序误诊3例。其中DNA测序检测到21-三体高风险25例,羊水细胞核型确诊24例;18-三体均为12例。DNA测序对于21-三体检测的敏感性和特异性分别为100.00%和99.98%,18-三体检测的敏感性和特异性均为100.00%。DNA测序的假阳性率为0.04%,假阴性率为0。结论:孕妇血浆胎儿游离DNA高通量测序是检测21和18-三体一种敏感性高和特异性强的新方法,在无创产前检测中有重要的实用价值。

孕妇血浆中的游离胎儿DNA及其意义

孕妇血浆中已证实存在着胎儿来源的游离DNA。作为一种胎儿新的检测材料,游离胎儿DNA的发现为非侵入性产前基因诊断提供了可能。有关游离胎儿DNA的临床应用以及其生物学包括来源、动力学和性质等,近年来引起人们很大关注。实时定量PCR技术是目前检测孕妇血浆中游离胎儿DNA的主要方法。实验室的一些技术因素会影响游离胎儿DNA的检测。尽管有些问题还不很清楚,但母体血浆中游离胎儿DNA的检测对于胎儿遗传病和妊娠相关性疾病的非侵入性产前诊断仍具有重要临床意义。讨论孕妇血浆中游离胎儿DNA的最新研究状况。

孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血的检测

本研究旨在建立一种孕早期、简便、快速且无创伤性的检测胎儿常见缺失型α-地中海贫血突变的单管多重PCR技术,用于α-地中海贫血的产前诊断。选择50例妊娠14-20周的贫血孕妇,采用gap-PCR方案设计4组PCR引物单管多重PCR体系,快速地检测孕妇血浆游离胎儿DNA中缺失型α-地中海贫血。结果表明:在50例贫血孕妇血浆的游离胎儿DNA中检出5例α-地中海贫血,其中3例为东南亚型缺失--SEA,2例为右侧缺失-α3.7。结论:采用单管多重PCR检测技术能快速准确地检测出3种最常见缺失型α-地中海贫血,对于防止α-地中海贫血患儿出生、提高人口素质、减轻社会负担有重要意义。

母血浆及血清中胎儿游离DNA的研究进展

1997年胎儿游离DNA的发现为无创性产前诊断开辟了新的途径。母血循环中的胎儿游离DNA含量相对较高，获取方法比较简单，在早孕阶段就可以检测到，这些优点成为极具潜力的无创伤性产前诊断方法。目前，胎儿游离DNA已经应用于某些性连锁疾病、妊娠相关疾病、染色体病、胎儿RhD血型检测等很多疾病的产前诊断中。我们希望此技术的进一步发展和完善可以使这种无创性的产前诊断方法在临床得到更广泛的应用。

早孕妇女血浆中胎儿游离DNA的检测

目的:建立一种检测早孕妇女血浆中胎儿游离DNA的新方法。方法:从50例妊娠7、8、9周的孕妇外周血血浆中提取胎儿游离DNA,用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术检测其中的Y性别决定区(SRY)基因。结果:38例早孕孕男胎妇女中32例血浆中出现SRY基因,灵敏度84.21%;12例早孕孕女胎的妇女血浆中均未出现SRY基因,特异度100%。结论:用实时荧光定量PCR技术可用来检测早孕妇女血浆中的胎儿游离DNA,这对无创性早期产前基因诊断方法的建立具有重大意义。

孕妇血浆游离胎儿DNA检测在无创产前诊断中的应用价值研究

目的探讨孕妇血浆游离胎儿DNA检测在无创产前诊断中的价值。方法 2011年1月至2013年12月该院46例孕妇作为研究对象,通过柱分离法获得孕妇的血浆DNA,并通过聚合酶链反应(PCR)技术对孕妇外周血浆中游离胎儿DNA的性别决定基因(SRY)进行检测,并通过ATL1基因鉴别胎儿的性别。结果 46例孕妇中28例产男性婴儿,18例产女性婴儿,其中男性胎儿中的26例能通过PCR技术扩增出SRY基因,而女性胎儿中有17例经过PCR技术扩增出ATL1基因,其特异度为94.4%(17/18),而灵敏度为92.9%(26/28),检测的总符合率为93.5%(43/46)。结论将孕妇血浆游离胎儿DNA检测应用到产前检查检测中,其灵敏度和特异度都较高,且检查过程中无创伤,能减少不良事件的发生概率,值得临床推广和应用。

孕期血浆游离DNA相关指标对不良妊娠结局预测价值的研究进展

不良妊娠结局会影响胎儿的生长发育,并威胁母婴生命安全。因此,不良妊娠结局的早筛查、早发现、早预防对母婴健康尤为重要。孕期血浆游离DNA(cfDNA)主要来自母体髓系/淋巴系细胞和胎盘滋养细胞,其中cfDNA浓度、游离胎儿DNA分数、线粒体DNA、核小体启动子等cfDNA相关指标对不良妊娠结局的预测价值各不相同,本文就近年来各cfDNA相关指标预测常见不良妊娠结局的研究进展进行综述。

孕妇血浆中胎源性RASSF1A基因在无损性产前诊断中的应用研究

本研究旨在探讨运用非性别依赖的甲基化表观遗传学标记RASSF1A基因作为孕妇血浆中循环游离胎儿DNA存在的通用性标志的可行性。采用2种方法提取孕妇血浆游离DNA,选用其中效果较好的用磁珠法提取20例标本的游离DNA;采用RT-PCR方法扩增SRY基因以及甲基化酶处理后的RASSF1A基因,且对酶处理后RASSF1A基因的扩增体系进行条件优化。结果表明,在20例标本中11例检测有SRY基因,且与胎儿出生后性别相符;选用优化后的PCR体系扩增甲基化酶处理后的RASSF1A基因,在18例标本中检测有RASSF1A基因,在2例标本中未检测到此基因。结论:甲基化RASSF1A基因与SRY基因相比,不受胎儿性别限制,可作为广泛性胎儿特异性表观遗传学标记物,用于临床无损性产前诊断。

ERG甲基化作为无创产前诊断唐氏综合征标记的可行性研究

目的探讨ERG基因是否可以作为孕早期血浆中检测胎儿DNA的通用标志物。方法随机选择早期妊娠孕妇70例,并以经体检确定为未孕健康妇女70例、分娩过21-三体胎儿的妇女11例和顺产后3 d妇女20例作为对照组。利用甲基化敏感限制性内切酶HpaⅡ、MspⅠ酶切后进行常规PCR的方法,检测血细胞、绒毛和血浆DNA目的基因ERG21-128序列的甲基化模式,并对妊娠组和对照组样本进行统计学分析。结果位于21号染色体上的ERG基因21-128序列在70例孕8、9、10周孕妇绒毛组织中甲基化而在母体血细胞中未甲基化,绒毛甲基化检出率为100%;在血浆中游离胎儿DNA ERG基因21-128序列的甲基化检出率为77.1%,敏感度为77.1%。其中8、9、10周甲基化差异无统计学意义(P>0.05)。在70例未孕健康妇女、11例生产过21三体胎儿的健康妇女和20例产后3 d妇女的对照组的血浆中ERG 21-128序列均未甲基化。结论在母体和胎儿DNA中,ERG基因21-128区的甲基化有显著性差异,实验方法也比较简单,提示了ERG是无创性产前诊断DS的一个潜在标记物。

子痫前期孕妇外周血浆中高甲基化SIM2基因的含量变化

目的:通过检测高甲基化SIM2基因来分析游离胎儿DNA在正常妊娠孕妇及子痫前期孕妇外周血浆中含量的变化。方法:共收集114例外周血浆样本(包括健康未妊娠女性志愿者10例,产后48小时健康女性10例,正常妊娠孕妇57例,子痫前期孕妇37例),利用HpaⅡ、MspⅠ分别对提取的血浆DNA进行甲基化酶切反应后再进行实时荧光定量PCR反应,相对定量法检测高甲基化SIM2基因的含量。结果:①10例健康未妊娠女性志愿者及产后48小时健康女性外周血浆中均未检测出高甲基化SIM2基因;②57例正常妊娠孕妇中有43例检测出高甲基化SIM2基因,在不同妊娠阶段高甲基化SIM2基因含量的差异有统计学意义,高甲基化SIM2基因的含量在中期妊娠是早期妊娠的2.33倍,晚期妊娠是早期妊娠的5.28倍;③37例子痫前期孕妇中有36例检出高甲基化SIM2基因,高甲基化SIM2基因的含量在轻度子痫前期孕妇血浆中是正常晚期妊娠的3.05倍,在重度子痫前期孕妇中是正常晚期妊娠的6.32倍。结论:高甲基化SIM2基因是可靠的胎儿特异性标记,在孕妇外周血浆中高甲基化SIM2基因的含量随妊娠进展而增加,与孕周有关。高甲基化SIM2基因在子痫前期孕妇血浆中含量明显增加,能够反应子痫前期疾病的严重程度。

子痫前期孕妇外周血中游离胎儿DNA含量变化

目的探讨正常妊娠不同孕周及子痫前期孕妇外周血中游离胎儿DNA含量的变化。方法对2009年8月至2010年9月西安交通大学第二附属医院外周血样本90例(包括健康未孕10例,正常妊娠40例,子痫前期40例),应用甲基特异性PCR的原理及荧光定量PCR的方法,相对定量法检测u-maspin基因的含量。结果 (1)10例健康未孕样本未检出u-maspin基因;(2)40例正常妊娠样本有34例检出u-maspin基因,各孕期u-maspin基因检出量差异具有统计学意义(P<0.05),u-maspin基因的含量中孕是早孕的4.43倍,晚孕是早孕的5.13倍;(3)40例子痫前期样本均检出u-maspin基因,u-maspin基因的含量子痫前期轻度是正常晚孕的2.39倍,子痫前期重度是正常晚孕的5.78倍。结论孕妇外周血中游离胎儿DNA的含量随着妊娠进展而增加,能够反映子痫前期患病的严重程度。

超声联合血浆游离DNA大规模平行测序无创产前筛查胎儿染色体异常的研究

目的利用超声及孕妇血浆游离DNA大规模平行测序(MPS)对高龄孕妇进行产前筛查,评价联合两种方法进行无创产前筛查胎儿染色体数目异常的灵敏度、特异度。方法选择≥35岁的高龄孕妇,进行产前超声筛查,并利用MPS方法检测孕妇血浆游离DNA。检测结果通过核型分析和产后随访得到验证。结果本研究共收集有效样本550例,超声联合孕妇血浆游离DNA MPS检测,共发现24例超声异常者,17例MPS异常者,经核型分析确诊14例胎儿染色体数目异常,包括6例T21,5例T18,1例47,XXY,2例Chr X-。联合筛查总检出率达5.8%,较单项筛查检出率增高,灵敏度100%,特异度96.64%,假阳性率3.36%。结论对于高龄孕妇联合超声筛查及孕妇血浆游离DNA MPS检测,可以提高产前筛查检出率,具有较高的灵敏度和特异性,同时还具有较低的假阳性率,联合利用可以提高诊断率。