真核表达载体P^(EGFP-N1)-IL-2的构建

目的构建真核表达载体PEGFP-N1-IL-2,为其导入真核或原核细胞打下基础。方法颈脱位处死C57BL/6小鼠,无菌摘除脾脏提取总RNA,经过RT-PCR获取IL-2DNA,与质粒PEGFP-N1连接,构建真核表达载体PEGFP-N1-IL-2。结果成功提取了C57BL/6小鼠脾组织总RNA,,经过RT-PCR后获取IL-2DNA并成功构建了真核表达载体PEGFP-N1-IL-2,测序结果与Genebank中小鼠IL-2cDNA(K02292)序列完全一致。结论真核表达载体PEGFP-N1-IL-2的成功构建,为进一步研究其在原核或真核细胞中表达做好准备。

线粒体转录复合物各因子质粒标准品的构建

目的:构建大鼠线粒体转录因子TFAM(A)、线粒体转录因子TFB1M(B1)、线粒体转录TFB2M(B2)及线粒体RNA聚合酶(POLRMT)的质粒标准品,为检测内耳细胞线粒体TFAM、TFB1M、TFB2M、POLRMT的mRNA表达水平做基础。方法:设计特异性引物和探针,提取大鼠内耳组织总mRNA逆转录成c DNA,PCR扩增、纯化目的片段,将纯化产物与p Zero Back/blunt载体重组,提取重组质粒,经测序鉴定后,用实时荧光绝对定量PCR建立标准曲线。结果:测序结果与各目的序列一致,获得良好的标准曲线(R2>0.99)。结论:成功构建了各目的基因的质粒标准品。