苏云金芽胞杆菌质粒pBMB2062的克隆及遗传稳定载体的构建

从苏云金芽胞杆菌ＹＢＴ－１５２０菌株中克隆到１个小质粒ｐＢＭＢ２０６２，序列分析表明该质粒由２０６２个核苷酸组成。该质粒含２个编码框（ｏｒｆ１和ｏｒｆ２），可分别编码由２８９个氨基酸和８０个氨基酸组成的蛋白质。这２个潜在的蛋白质分别与质粒的复制启始蛋白和复制蛋白同源。ＰＢＭＢ２０６２与２个已知同源质粒之间有２３个核苷酸的差异；这些差异引起了ｏｒｆ１编码框的变化。ｃＤＮＡ合成和ＰＣＲ检测显示与ｐＢＭＢ２０６２的ｏｒｆ１编码框对应的ｍＲＮＡ是存在的。利用该质粒构建了穿梭载体并表达了杀虫晶体蛋白基因，重组质粒在无选择压力下可稳定遗传４０多代，说明该质粒可用于构建稳定遗传的质粒载体。