Analysis of heavy-ion-induced DNA strand breaks in plasmid pUC18

Plasmid DNA was irradiated or implanted by mixed particle field(CR) or lithium-ion-beam to detect strand breaks.The primary results showed that mixed particle field could induce single and double strand breaks with positive linear-dose-effects;most of sequence changes induced by CR were point mutant.Lithium-ion-beam could induce strand breaks also,but it was only at dose of 20Gy.

含绿色荧光蛋白报告基因pUC18筛选载体的构建

目的 :以绿色荧光蛋白 (GFP)基因为报告基因 ,将GFP基因克隆入pUC1 8建立大通量的筛选载体。方法 :用PCR方法扩增目的DNA片段 ,碱裂解法小量制备质粒DNA ,用限制性内切酶消化质粒DNA ,用低熔点琼脂糖凝胶分离和纯化大片段DNA ,GFP基因与 pUC1 8连接 ,用氯化钙法转化感受态细胞 ,DNA序列测定 ,琼脂糖凝胶电泳 ,变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。结果 :pUC1 8 atg GFP载体意外表达GFP蛋白 ,新合成的上游引物与原下游引物扩增GFP基因 ,克隆入 pUC1 8构建 pUC1 8 GFP载体 ,通过PCR、酶切鉴定和DNA序列分析 ,GFP基因的读码框架与原设计方案完全一致 ,该载体自身无GFP表达。结论 :筛选载体内的GFP基因与克隆基因的融合基因可表达一种融合蛋白 ,在琼脂平板上含有该融合基因的克隆在紫外线激发下可发绿色荧光 ,因此 ,可表达基因能被挑选出来。

La(Ⅲ)对质粒pUC18复制拷贝数的影响

稀土应用的日益增长将会对生物的遗传产生深远的影响。生物的遗传离不开DNA的复制,由于染色体DNA非常巨大和复杂,难以直接研究稀土离子对其复制的影响。本研究以细菌染色体之外的遗传因子——质粒为对象,研究L a3+对质粒DNA复制拷贝数的影响。结果表明:在不同浓度L a3+存在下,质粒在宿主细胞中复制的拷贝数不同;因培养时间相同,因此质粒在宿主细胞中复制的平均速率不同。由于质粒复制与染色体DNA复制使用相同的酶系,因而可初步推断不同浓度的L a3+对染色体DNA复制的平均速率有同样的影响。

稀土元素La(Ⅲ)对质粒pUC18复制速度的影响

稀土应用的日益增长将会对生物的遗传产生深远的影响 .生物的遗传离不开DNA的复制 ,由于染色体DNA非常巨大和复杂 ,难以直接研究稀土离子对其复制的影响 .以细菌染色体之外的遗传因子———质粒为对象 ,研究La3+对质粒DNA复制速度的影响 .结果表明 :在不同浓度La3+存在下 ,质粒在宿主细胞中复制的速度不同 ;由于质粒复制与染色体DNA复制使用相同的酶系 。

微绿球藻DNA质粒文库的构建

微绿球藻（Nannochloropsis oculata）DNA被提取纯化并经超声波处理后，将所得大小在1．6～3kb之间的DNA片段用T4DNA聚合酶补平，再与Sma I酶切消化并经去磷酸化处理的质粒栽体pUCl8连接。转化至DH10B大肠杆菌（Escherichiacoli）的感受态细胞中。建立的DNA质粒文库容量含2×10^4个克隆，其中重组子占90％。随机挑选白色菌落并培养，抽提的质粒经XbaI和SacI双酶切鉴定，显示重组的质粒中均含有大小不等的DNA插入片段。

高渗漏型AspAT基因工程菌诱导表达的研究

利用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导有高渗漏表达现象的天冬氨酸转氨酶(AspAT)工程菌,研究是否可以在这一类基因工程菌中提高酶的产量及活性。在观察IPTG诱导后菌体生长的同时,观察不同的时间及条件下酶活性的变化,发现插入含有天冬氨酸转氨酶基因(AspC,1.2kb)的pUC18质粒的BL21(DE3)在较高渗漏表达的情况下,用IPTG 37℃诱导培养8 h后酶表达开始升高,12 h后趋于稳定表达;同时发现用0.1 mmol/L IPTG诱导后酶的活性提高最多,比未诱导前提高一倍以上。研究认为如果培养条件恰当这类菌应该可以用IPTG诱导高效表达目的酶蛋白。