不吸水链霉菌辽宁变种基因转移系统的建立

以嘧肽霉素生物合成阻断突变株UV2136为研究对象,建立了不吸水链霉菌辽宁变种的基因转移系统。UV2136对硫链丝菌素高度敏感,选择含有该抗生素标记的质粒pIJ702和pWHM3,探索其转化UV2136的可能性。结果表明:UV2136含有较强的限制修饰系统,采取热衰减法获得原生质体、原生质体热处理、冷处理、EDTA处理、质粒DNA变性等,均不能实现质粒pIJ702向UV2136的转化。来自非甲基化宿主E.coli ET12567的pWHM3也无法实现转化,而源于E.coli DH5α的甲基化pWHM3,可以低频转化菌株UV2136,转化效率分别为4转化子.μg-1 pWHM3,经自身修饰的pWHM3可实现高效转化,达到104转化子.μg-1pWHM3。