质粒pXZ10145DNA转化棒杆菌原生质体的研究

用SDS处理谷氨酸棒杆菌1014(Corynebactertum glutamlcum 1014),获得消除质粒的衍生株1014-6。通过质粒pXZ10145(Cm^r)转化1014-6菌株的原生质体,研究了转化最适条件。0.6u/ml青霉素处理对数期菌体可明显提高转化效率。转化促进剂PEG以分子量6000、浓度30%为最佳。转化在37℃水浴进行3min效果最好。转化效率最高可达2×10~4转化子/μg DNA。质粒pXZ10145也已成功地转入钝齿棒杆菌B9(C.crenatum B9)。并在新宿主中基本保持稳定。

通过接合作用质粒从大肠杆菌到棒状杆菌的转移

构建了可接合转移的穿梭质粒pXZ911,pBZ51和pBZ52。这些质粒中含有具转移功能的Mob片段和在棒状杆菌中复制的复制区。以大肠杆菌S17—1为供体菌,通过接合转移作用,可将这些质粒转移到谷氨酸棒杆菌ATCC13032、谷氨酸棒杆菌ATCC21543、北京棒杆菌B3、北京棒杆菌1.299、裂氏棒杆菌B43、黄色短杆菌ATCC14067等棒状杆菌菌株,接合转移频率分别为:9×10^(-5),1×10^(-4),8.5×10^(-5),2.3×10^(-4),6×10^(-5),2.9×10^(-5)。本文还探索了大肠杆菌和几种革兰氏阳性棒状杆菌间基因转移的方法、转移频率、影响转移频率的因素、宿主范围等问题。