孔石莼质体蓝素的柱色谱纯化及其N-端氨基酸序列的分析测定

通过DEAE—Sepharose Fast Flow阴离子交换柱和Sephadex G-75凝胶过滤柱分离纯化得到了孔石莼（Ulva pertusa）的质体蓝素。其步骤为：将孔石莼样品以0．02mol/L磷酸盐缓冲液（pH7．2）进行匀浆，然后离心去除沉淀，将上清液用硫酸铵分级盐析获得饱和度为40％～80％的盐析蛋白；通过DEAE-Sepharose柱色谱，在含有0～1．0mol/L NaCl的0．0lmoVL磷酸盐缓冲液线性梯度洗脱下，盐析蛋白有3个主要的洗脱峰，然后在Sephadex G-75凝胶过滤色谱柱中进一步纯化。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）显示，该蛋白质被纯化为单一条带。根据蛋白质电泳迁移率，纯化蛋白质的相对分子质量约为10000。该蛋白质不含糖。纯化的蛋白质经电转移至聚偏二氟乙烯（PVDF）膜后，以Edman降解法进行N-端氨基酸序列测定，前20个氨基酸残基序列为AAIVKLGPDDGSLAFVPSKI。通过对相关蛋白质数据库的检索，发现该序列与3种已报道的海藻的质体蓝素具有较高的序列同源性，其同源性分别为85％，85％和90％。据此，认为孔石莼的质体蓝素已获得纯化，其N-端20个氨基酸残基与已报道的海藻质体蓝素的氨基酸残基有较大的同源性，也存在着一定的变异。