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狭缝引导配体13′UTR通过miR-34a-5p/SIRT1轴调节内皮细胞表型
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作者 欧涛 胡志琴 +5 位作者 高原 伍华燕 陈凯茵 徐金东 方咸宏 单志新 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期362-372,共11页
在高等生物的进化过程中,mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)序列显著增加,提示3′UTR在生物功能调节中可能发挥重要作用。我们发现狭缝引导配体1(slit guidance ligand 1,SLIT1)3′UTR在肥厚型心肌病(HCM)患者心肌中水... 在高等生物的进化过程中,mRNA的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)序列显著增加,提示3′UTR在生物功能调节中可能发挥重要作用。我们发现狭缝引导配体1(slit guidance ligand 1,SLIT1)3′UTR在肥厚型心肌病(HCM)患者心肌中水平降低,但其对肥厚心肌中血管功能调节的作用机制不清楚。利用腺病毒介导在主动脉内皮细胞(human aortic endothelial cells,HAECs)中过表达SLIT13′UTR,检测HAECs中一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthases,eNOS)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor,VEGFA)表达。分别采用划痕实验和基于Matrigel胶的管腔形成实验检测HAECs的迁移和成管腔能力。结果发现,过表达SLIT13′UTR会升高HAECs中p-eNOS、eNOS和VEGFA水平(P<0.01),并促进HAECs迁移和成管腔能力(P<0.01)。生物信息学预测提示,SLIT13′UTR上有多个微RNA(miRNA)的潜在结合位点,反义RNA纯化技术(RNA antisense purification,RAP)筛选和利用Ago2抗体进行RNA结合蛋白质免疫沉淀(RNA binding protein immunoprecipitation,RIP)结果显示,SLIT13′UTR与miR-34a-5p存在结合作用,而过表达SLIT13′UTR的HAECs中miR-34a-5p水平显著降低(P<0.05)。Western印迹结果证实,miR-34a-5p可逆转过表达SLIT13′UTR对去乙酰化酶SIRT1的上调作用(P<0.05)。在HAECs中转染miR-34a-5p和si-SIRT1,可一致地抑制过表达SLIT13′UTR引起的p-eNOS、eNOS和VEGFA增加(P<0.05,P<0.01),及促进HAECs迁移和成管腔的能力(P<0.01,P<0.001)。因此,SLIT13′UTR可以特异性吸附miR-34a-5p,通过miR-34a-5p/SIRT1轴发挥促进内皮细胞迁移和管腔生成的作用。 展开更多
关键词 狭缝引导配体1 3′非翻译区 血管内皮细胞 微RNA
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ZEB1-3′UTR促进乳腺癌细胞MCF-7迁移机制的研究
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作者 邓英姿 孙煜曦 +4 位作者 李一菲 张美玲 张运峰 许可 胡芬 《唐山师范学院学报》 2024年第3期50-53,72,共5页
对与ZEB1-3′UTR结合的microR-NAs进行生物信息学分析。结果表明,与对照组相比,过表达ZEB1-3′UTR后MCF-7细胞迁移能力显著增强。采用RNA22、Microrna、Targetscan数据库筛选出与ZEB1-3′UTR结合的microRNAs,三个数据库公共预测的microR... 对与ZEB1-3′UTR结合的microR-NAs进行生物信息学分析。结果表明,与对照组相比,过表达ZEB1-3′UTR后MCF-7细胞迁移能力显著增强。采用RNA22、Microrna、Targetscan数据库筛选出与ZEB1-3′UTR结合的microRNAs,三个数据库公共预测的microRNAs有9个,分别是miR-429、miR-200b、miR-200c、miR-494、miR-873、miR-381、miR-300、miR-431和miR-342,其中miR-429、miR-200b、miR-200c、miR-342在乳腺癌中高表达。以上研究表明,ZEB1-3′UTR能够竞争性结合肿瘤细胞表达的内源性microRNAs,促进了MCF-7细胞迁移。 展开更多
关键词 MICRORNA ZEB1-3utr 生物信息学
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猪蛋白编码基因3’UTR中IRPRE1元件的鉴定及其基因特征分析 被引量:1
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作者 赵为民 曹静 +5 位作者 邢菲 王丽 任守文 付言峰 李碧侠 方晓敏 《湖南农业大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期336-342,共7页
为鉴定猪全基因组范围内蛋白编码基因3’UTR(3’-untranslated region)中反向重复PRE1(inverted repeated PRE1,IRPRE1)元件,对猪全基因组的22342个蛋白编码基因的3’UTR序列进行重复序列元件的生物信息学分析。结果表明:猪蛋白编码基因... 为鉴定猪全基因组范围内蛋白编码基因3’UTR(3’-untranslated region)中反向重复PRE1(inverted repeated PRE1,IRPRE1)元件,对猪全基因组的22342个蛋白编码基因的3’UTR序列进行重复序列元件的生物信息学分析。结果表明:猪蛋白编码基因的3’UTR序列中短散在重复序列与简单重复序列在重复序列的类别中所占比例较高,分别为27.58%与31.08%;在SINE/t RNA的重复元件中,Pre0_SS和PRE1x元件所占的比例较高,分别为41.83%和37.51%;共有1 094个候选蛋白编码基因的3’UTR中含有IRPRE1元件;GO分析发现这些候选基因主要参与m RNA经由剪接体的剪接、细胞分裂、RNA通过酯交换反应发生的剪接、T细胞激活、RNA剪接、T细胞受体信号通路、对糖苷反应、甘油三酯稳态、外源性凋亡信号通路的正调节及胆固醇合成等生物过程;KEGG pathway分析发现这些候选基因参与了缬草碱、亮氨酸和异亮氨酸降解途径、TNF信号通路、T细胞受体信号通路、RIG-I样受体信号通路、吞噬体、剪接体、胆汁分泌、甲状腺激素合成和凋亡;对3个蛋白编码基因的3’UTR中的IRPRE1元件进行鉴定发现,其在多个组织中广泛表达。 展开更多
关键词 蛋白编码基因 3utr IRPRE1元件 特征分析
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PD-L1基因3’UTR单核苷酸多态性与膀胱尿路上皮癌关系的病例对照研究 被引量:1
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作者 刘静 王永华 +3 位作者 于仑 牛海涛 刘勇 孙立江 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期762-766,共5页
目的:探讨免疫关卡点分子程序性死亡配体1(programmed death ligand 1,PD-L1)基因3’端非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,B... 目的:探讨免疫关卡点分子程序性死亡配体1(programmed death ligand 1,PD-L1)基因3’端非翻译区(3’untranslated region,3’UTR)单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与膀胱尿路上皮癌(bladder urothelial carcinoma,BUC)发病风险及临床病理特征之间的关系。方法:采用病例-对照研究方法,PCR-LDR技术分别检测2013年6月至2015年12月在青岛大学附属医院泌尿外科住院手术治疗的213例BUC患者和251例同期健康体检者PD-L1基因3’UTR的rs4143815位点和rs2297136位点基因型分布频率,采用卡方检验和非条件多因素Logistic回归分析不同基因型与BUC发病风险以及临床病理特征之间的关系。结果:BUC组PD-L1基因3’UTR的rs4143815位点基因型分布频率与对照组相比存在明显差异,GG基因型个体发生BUC的风险是CC基因型的2.83倍(95%CI:1.82~4.64,P<0.01),携带G突变基因(CG/GG基因型)个体BUC发病风险是CC型基因个体的1.53倍(95%CI:1.01~2.24,P<0.01),同时BUC组rs4143815位点携带G突变基因频率与BUC病理分级和临床分期具有相关性(P<0.05或P<0.01);而在rs2297136位点,BUC组和对照组基因型分布频率无显著差异,CC、CT及TT基因型个体之间发生BUC的风险亦无显著差异(均P>0.05)。结论:PD-L1基因3’UTR的rs4143815位点SNP与BUC的发病风险和恶性进展可能具有相关性。 展开更多
关键词 膀胱肿瘤 程序性死亡配体1 3’端非翻译区 单核苷酸多态性
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Bioinformatics Analysis on A223C Polymorphism at the 3'UTR of OLR1 Gene in Cow
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作者 张传生 耿立英 +3 位作者 尹春光 曹顶国 刘铮铸 付志新 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2010年第9期94-96,共3页
[Objective] The aim was to explore the molecular mechanisms of the A223C polymorphism at 3'UTR of oxidized low density lipoprotein receptor 1(OLR1)which was closely related to milk fat percentage in cow.[Method]The... [Objective] The aim was to explore the molecular mechanisms of the A223C polymorphism at 3'UTR of oxidized low density lipoprotein receptor 1(OLR1)which was closely related to milk fat percentage in cow.[Method]The putative microRNA targets located in the 3'UTR of OLR1 were predicted with the software miRanda(1.0)which could carry the microRNA database of cow.[Result]Total 16 microRNA targets were found.The A223C SNP was located in complementary region of bta-miR-370 target sequence.[Conclusion]OLR1 3'UTR A→C mutation had led to the disappearing of bta-miR-370 target,which had provided basis for the further research on the molecular mechanisms of the A223C polymorphism at 3'UTR of OLR1 gene which was closely related to milk fat percentage in cow. 展开更多
关键词 OLR1 3'utr miR-370 BIOINFORMATICS MICRORNA
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心脏圆锥动脉干畸形患儿TBX1C基因3'UTR区域突变分析 被引量:2
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作者 方绍海 徐月娟 +2 位作者 曹瑞雪 陈笋 徐让 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期767-771,共5页
目的筛查心脏圆锥动脉干畸形(CTHD)患者中TBX1C基因3'UTR区域存在的基因突变,探讨该区域突变影响TBX1C基因表达的可能机制。方法选取无22q11.2区微缺失的52例CTHD患儿(CTHD组)和89名健康儿童(对照组)作为研究对象,PCR扩增TBX1C基因... 目的筛查心脏圆锥动脉干畸形(CTHD)患者中TBX1C基因3'UTR区域存在的基因突变,探讨该区域突变影响TBX1C基因表达的可能机制。方法选取无22q11.2区微缺失的52例CTHD患儿(CTHD组)和89名健康儿童(对照组)作为研究对象,PCR扩增TBX1C基因完整3'UTR区序列,所有扩增片段均进行双向测序;将测序结果与GenBank中TBX1C 3'UTR序列(NM 080647.1)进行比对,筛查出可能存在的基因突变;PicTar和TargetScan在线预测软件预测可能与TBX1C基因3'UTR区结合的微RNA(miRNA),分析TBX1C基因3'UTR区突变对miRNA调控TBX1C基因表达的影响。结果在CTHD组中发现1例突变c.*164_*165insC,即在距离终止密码子164位与165位核苷酸之间插入1个胞嘧啶;该突变在对照组中不存在,其他研究中未见报道,为新发突变;预测结果显示10种miRNA能与TBX1C基因3'UTR区结合,该突变并不位于10种miRNA与TBX1C3'UTR的结合区域。结论 TBX1C基因3'UTR区域存在新发突变c.*164_*165insC,该突变可能改变TBX1C3'UTR区域与miRNA结合的空间构象,进而影响miRNA对TBX1C基因表达的调控作用。 展开更多
关键词 圆锥动脉干畸形 TBX1基因 基因突变 3utr 微RNA
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hper1基因3′端UTR区双荧光素酶报告系统构建
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作者 赵溪岩 成姝婷 +4 位作者 勾洵 王正荣 肖静 郭慧玲 汪宇辉 《四川生理科学杂志》 2013年第1期4-6,共3页
目的:构建hper1基因3′端UTR区双荧光素酶报告系统pmiR-RB-REPORTTM-hper1-3′UTR(PMIR-3′UTR),检测其表达,为研究hper1基因的表达调控及microRNA调控靶基因的结合位点提供基础平台。方法:用PCR扩增的方法提取hper1基因3′UTR序列,并... 目的:构建hper1基因3′端UTR区双荧光素酶报告系统pmiR-RB-REPORTTM-hper1-3′UTR(PMIR-3′UTR),检测其表达,为研究hper1基因的表达调控及microRNA调控靶基因的结合位点提供基础平台。方法:用PCR扩增的方法提取hper1基因3′UTR序列,并连接至pmiR-RB-REPORTTM(PMIR)双荧光素酶报告载体的多克隆位点,测序验证插入序列并转染入A549细胞检测其荧光素酶活性。结果:测序结果表明PMIR-3′UTR的插入序列正确,在转染入A549细胞后其荧光素酶能正常表达。结论:PMIR-3′UTR双荧光素酶报告系统构建成功。 展开更多
关键词 hper1基因 3utr区域 PMIR-3utr
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UTR3与YG201强力机强力测量值差异初探
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作者 杜立信 任富科 《陕西纺织》 1994年第2期42-44,共3页
关键词 utr3强力仪 TYG021-1 单纱强力机 强力 测量值
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中甸犏牛SLC11A1基因3'非翻译区多态位点研究及其与抗病性关联的评估 被引量:1
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作者 王利平 席冬梅 +3 位作者 熊和丽 李国治 李鹏 邓卫东 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第9期131-137,共7页
为研究中甸犏牛溶质载体转运蛋白基因(SLC11A1)的结构变异情况,并评估结构变异与抗病性的关联,采集了114个样品,扩增了SLC11A1基因3'非翻译区(3'UTR)部分序列,测序共检测到3个微卫星多态位点(MS1、MS2、MS3)和3个核苷酸变异(1 ... 为研究中甸犏牛溶质载体转运蛋白基因(SLC11A1)的结构变异情况,并评估结构变异与抗病性的关联,采集了114个样品,扩增了SLC11A1基因3'非翻译区(3'UTR)部分序列,测序共检测到3个微卫星多态位点(MS1、MS2、MS3)和3个核苷酸变异(1 782位点T→G、1 805位点G→A、1 907位点G→T),其中MS1有6个等位基因(GT10、GT12、GT14—17)、MS2有3个等位基因(GT5—7)、MS3有5个等位基因(GT12—16)。GT12/15、GT5/5、GT13/13基因型频率最高,分别为0. 204、0. 05、0. 324; GT15、GT5、GT13等位基因频率最高分别为0. 284、0. 685、0. 433。对MS1、MS2、MS3这3个多态位点进行单倍型分析,发现了44种单倍型,其中GT12/5/13为优势单倍型,频率为0. 13。χ2比较分析表明,中甸犏牛与婆罗门瘤牛×布兰科牛、荷斯坦牛×布兰科牛、布兰科牛、非洲牛MS1位点的GT12/12基因型频率差异显著(P <0. 01),与西班牙黄牛、荷兰黄牛MS3的GT13/13基因型频率差异显著(P <0. 01),与非洲黄牛差异不显著(P> 0. 05)。综上,中甸犏牛SLC11A1基因3'UTR具有丰富的多态性,推断其GT12/12和GT13/13纯合子基因型与抗病性相关。 展开更多
关键词 SLC11A1基因 中甸犏牛 3utr 微卫星多态性(GT)n
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水稻5.3 kb Gt1启动子克隆以及Gt1启动子引导优质大豆球蛋白Gy7基因表达载体构建
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作者 徐申中 顾婷玉 +1 位作者 于洋 李建粤 《现代农业科学》 2008年第11期14-17,共4页
以越光水稻基因组为模板,在成功克隆5.3 kb谷蛋白Gt1基因5’上游和信号肽序列基础上,将其定向插入到pCAMBIA1300质粒中,构建了中间载体p1300-5.3 kb Gt1;再将富含赖氨酸的优质大豆球蛋白Gy7全基因序列及cDNA编码序列分别定向插入p1300-5... 以越光水稻基因组为模板,在成功克隆5.3 kb谷蛋白Gt1基因5’上游和信号肽序列基础上,将其定向插入到pCAMBIA1300质粒中,构建了中间载体p1300-5.3 kb Gt1;再将富含赖氨酸的优质大豆球蛋白Gy7全基因序列及cDNA编码序列分别定向插入p1300-5.3 kb Gt1质粒上Gt1基因信号肽下游,再在2个载体Gy7全基因序列及cDNA编码序列下游都正向插入Gt1 3’UTR,完成由5.3 kb谷蛋白Gt1基因启动子及信号肽引导的大豆球蛋白Gy7基因2种表达载体的构建。此试验为利用转基因技术改良水稻稻米营养品质以及将水稻种子作为生物反应器等方面研究奠定了基础。 展开更多
关键词 5.3kb Gt1基因启动子克隆 大豆球蛋白Gy7基因 大豆球蛋白Gy7cDNA Gt1基因3utr 表达载体构建
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大鼠细胞外信号调节激酶1基因3'非编码区双荧光素酶报告载体的构建及rno-miR-15b-5p对其活性的影响
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作者 罗汉将 徐云峰 +2 位作者 李晓晓 杨予涛 徐志卿 《中国康复理论与实践》 CSCD 北大核心 2017年第2期166-172,共7页
目的以大鼠细胞外信号调节激酶1(ERK1)基因3'非编码区(UTR)为研究对象,构建含有ERK1基因3'UTR区的野生型以及突变型重组双荧光素酶报告载体,通过分析双荧光素酶报告载体的活性,明确rno-miR-15b-5p对报告载体的调节作用。方法采... 目的以大鼠细胞外信号调节激酶1(ERK1)基因3'非编码区(UTR)为研究对象,构建含有ERK1基因3'UTR区的野生型以及突变型重组双荧光素酶报告载体,通过分析双荧光素酶报告载体的活性,明确rno-miR-15b-5p对报告载体的调节作用。方法采用miRNeasy Mini Kit提取大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞的总RNA,以PC12细胞的c DNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)将ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-Report^(TM) vector中。利用重叠延伸PCR,将ERK1基因3'UTR中的rno-miR-15b-5p潜在的靶序列TGCTGCT分别突变成CGAACGT和GTACACG,并将突变的ERK1基因3'UTR克隆到pmiR-RB-Report^(TM) vector中。结果成功构建了包含ERK1基因3'UTR区的野生型报告载体pmiR-ERK1 3'UTR和突变型报告载体pmiR-ERK1-mut 3'UTR。利用荧光素酶活性检测系统,发现rno-miR-15b-5p mimic可以降低野生型报告载体的活性(P<0.001),但不影响突变型报告载体的活性。结论成功构建ERK1基因3'UTR区野生型和突变型双荧光素酶报告载体,初步证明ERK1基因3'UTR区是rno-miR-15b-5p的结合靶点。 展开更多
关键词 rno-miR-15b-5p 细胞外信号调节激酶1 重叠延伸聚合酶链式反应 pmir-erk1 3'utr pmir-erk1-mut 3'utr 荧光素酶活性检测
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上海市崇明县热性惊厥与SCN1A基因热点多态性变异的相关性分析 被引量:1
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作者 叶桂云 陈柳 +1 位作者 戴红 刘晓青 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期1643-1647,共5页
目的·了解上海市崇明县儿童热性惊厥(FS)与电压门控钠离子通道α1亚型(SCNIA)基因外显子25、26及3'UTR区域之间的相关性。方法·提取96例FS患儿[包括32例全面性癫痫伴热性惊厥附加症(GEFS+)患儿]和53例健康对照组儿童的外... 目的·了解上海市崇明县儿童热性惊厥(FS)与电压门控钠离子通道α1亚型(SCNIA)基因外显子25、26及3'UTR区域之间的相关性。方法·提取96例FS患儿[包括32例全面性癫痫伴热性惊厥附加症(GEFS+)患儿]和53例健康对照组儿童的外周静脉血基因组DNA,进行SCNIA基因E25、E26及3'UTR区域PCR扩增及测序分析。结果·病例组和对照组SCNIA基因E25、E26均未见突变。3'UTR区域1例GEFS+患儿存在c.310-311delGT变异,2例FS患儿存在c.589T>G变异,6例存在c.593T>G变异;对照组均未发现变异。病例组和对照组已报道的单核苷酸多态性(SNP)c.1025T>C发生频率分别为18.2%和24.5%,2组间差异无统计学意义。预测结果显示114种miRNA能与SCNIA基因3'UTR区结合。c.310-311delGT不位于miRNA与SCN1A基因3'UTR区的结合序列内,c.589T>G变异、c.589T>G变异均位于此序列中。结论·经检测SCNIA基因E25、E26均未见突变;3'UTR区域发现c.310-311de1GT、c.589T>G和c.593T>G变异;SNPc.1025T>C与FS无明显关联。 展开更多
关键词 热性惊厥 SCN1A 全面性癫痫伴热性惊厥附加症 单核苷酸多态性 3'utr
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靶向人Beclin1非编码区小分子干扰方法的建立及效果评价
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作者 黄桢钧 刘少军 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第24期3776-3779,共4页
目的建立靶向人Beclin1非编码区小分子干扰(siRNA)的方法并对其效果进行评价。方法设计分别靶向人Beclin1 mRNA不同区域的siRNA:靶向5'-UTR的siRNA-#1、靶向3'-UTR的siRNA-3#和siRNA-4#,及靶向编码区的阳性对照siRNA-2#。各siRN... 目的建立靶向人Beclin1非编码区小分子干扰(siRNA)的方法并对其效果进行评价。方法设计分别靶向人Beclin1 mRNA不同区域的siRNA:靶向5'-UTR的siRNA-#1、靶向3'-UTR的siRNA-3#和siRNA-4#,及靶向编码区的阳性对照siRNA-2#。各siRNA转染HEK293细胞48 h后,蛋白印迹法检测Beclin1及自噬标记蛋白LC3的变化;或者采用双荧光mRFP-GFP-LC3(tf LC3)质粒再转染24 h,荧光显微镜观察并统计细胞内红色及黄色LC3亮点的变化。结果转染siRNA后,特异靶向3'-UTR的siRNA-3#和siRNA-4#及靶向编码区的siRNA-2#(阳性对照)能显著抑制HEK293细胞的Beclin1和LC3的蛋白表达;并导致自噬体(黄色亮点)及自噬溶酶体(红色亮点)明显减少。结论采用靶向3'-UTR的特异siRNA可成功敲低(knock-down)人Beclin1的表达,并减少细胞自噬活性。成功建立的3'-UTR特异siRNA方法,为以后干扰和突变体共表达研究提供基础。 展开更多
关键词 BECLIN 1 5’-utr 3’-utr SIRNA 自噬
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草鱼SREBP-1-3'-UTR双荧光素酶报告载体构建及miR-33对其表达的影响 被引量:2
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作者 王俊丽 卢荣华 +4 位作者 秦超彬 常志光 孙君君 杨峰 聂国兴 《上海海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期17-22,共6页
为研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)miR-33在固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)调节脂代谢中的作用,构建了草鱼SREBP-1基因3'端非翻译区(Untranslated region,UTR)含miR-33靶序列的... 为研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)miR-33在固醇调节元件结合蛋白-1(Sterol regulatory element binding protein 1,SREBP-1)调节脂代谢中的作用,构建了草鱼SREBP-1基因3'端非翻译区(Untranslated region,UTR)含miR-33靶序列的双荧光素酶报告基因载体。首先用PCR法获得SREBP-1 mRNA含miR-33结合位点的3'UTR序列(379 bp),与双荧光素酶报告载体pmir GLO重组后转染DH5α感受态细胞。然后经筛选和双酶切鉴定,获得含有SREBP-1基因3'-UTR的双荧光素酶报告载体:pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR。最后在草鱼肝细胞L8824共转染miR-33mimics和pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR,明确miR-33与SREBP-1基因3'UTR区的靶向关系。结果表明,含有SREBP-1基因3'-UTR序列的双荧光素酶报告基因载体构建成功,PCR、双酶切和基因测序证明序列与目标一致;转染pmir GLO-SREBP-1-3'-UTR的L8824细胞可表达荧光素酶,单独转染载体组的荧光素酶活性显著高于共转染载体和miR-33 mimics组(P<0.05)。本研究证实草鱼SREBP-1是miR-33的直接靶基因,miR-33通过和SREBP-1 mRNA 3'UTR结合,调控SREBP-1基因的转录后表达。 展开更多
关键词 草鱼 SREBP-1 miR-33 3'非翻译区 pmirGLO报告基因载体 荧光素酶活性
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鸡gga-miR-7b靶基因VDAC1-3’UTR双荧光素酶报告基因质粒的构建 被引量:1
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作者 肖春婷 廉传江 +1 位作者 易诚 陈洪岩 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期533-538,共6页
本研究以鸡gga-miR-7b作为研究对象,为了明确与肿瘤形成相关的关键基因VDAC1(Voltage-dependent anion channel 1)是否为gga-miR-7b的靶基因,深入研究gga-miR-7b对VDAC1基因的调控作用,本研究运用TargetScan和miRBD生物学软件预测了gga-... 本研究以鸡gga-miR-7b作为研究对象,为了明确与肿瘤形成相关的关键基因VDAC1(Voltage-dependent anion channel 1)是否为gga-miR-7b的靶基因,深入研究gga-miR-7b对VDAC1基因的调控作用,本研究运用TargetScan和miRBD生物学软件预测了gga-miR-7b与VDAC1 m RNA的3’端非编码区(3’UTR)存在种子结合位点(GTCTTCC),并使用PCR克隆以及同源重组突变的方法构建VDAC1-3’UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因重组质粒,经SacⅠ和XbaⅠ双酶切鉴定及测序结果显示,片段大小符合且序列正确;成功构建了VDAC1-3’UTR野生型和突变型双荧光素酶报告基因重组质粒并命名为pmirGLOVDAC1-wt3’UTR和pmirGLO-VDAC1-mut3’UTR。本研究结果进一步为gga-miR-7b候选靶基因VDAC1的鉴定以及功能研究提供理论依据。 展开更多
关键词 马立克氏病 gga-miR-7b VDAC1基因 pmirGLO-VDAC1-wt-3utr pmirGLO-VDAC1-mut-3utr
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m^(6)A去甲基化酶ALKBH5对大鼠S1PR3基因3′-非编码区双荧光素酶活性的影响
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作者 郭励劼 王泌林 +3 位作者 李琛琛 许婧怡 徐志卿 杨予涛 《生物技术》 CAS 2023年第1期1-8,共8页
[目的]明确m^(6)A去甲基化酶ALKBH5对含S1PR3基因3′-非编码区(3′-UTR)双荧光素酶报告基因的调控作用。[方法]以大鼠前额叶皮层脑区cDNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增S1PR3基因3′-UTR中含有m^(6)A修饰位点的目的片段。利用重叠... [目的]明确m^(6)A去甲基化酶ALKBH5对含S1PR3基因3′-非编码区(3′-UTR)双荧光素酶报告基因的调控作用。[方法]以大鼠前额叶皮层脑区cDNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增S1PR3基因3′-UTR中含有m^(6)A修饰位点的目的片段。利用重叠延伸PCR方法将三个靶序列GGACT、GGACT、AGACT中的第三位A突变为C,并将野生型S1PR3-3′-UTR片段和突变型S1PR3-mut-3′-UTR片段分别正向插入到pmiR-RB-ReportTMvector载体中。将pcDNA3.1-ALKBH5或空载体pcDNA3.1与野生型和突变型双荧光素酶报告载体分别共转染PC12细胞,并检测荧光素酶活性。[结果]成功构建了包含S1PR3基因3′-UTR野生型双荧光素酶报告载体pmiR-S1PR3-3′-UTR和突变型双荧光素酶报告载体pmiR-S1PR3-mut-3′-UTR。荧光素酶活性分析表明与空载体pcDNA3.1组相比,ALKBH5可显著降低野生型及突变型C1和C2报告载体荧光素酶的活性(P<0.05),而对突变型C3没有影响(P>0.05)。[结论]初步证明S1PR3基因3′-UTR区是去甲基化酶ALKBH5的作用靶点,ALKBH5通过识别S1PR3基因3′-UTR区C3处的m^(6)A修饰位点而降低pmiR-S1PR3-3′-UTR荧光素酶的活性。 展开更多
关键词 m^(6)A 1-磷酸鞘氨醇受体3 抑郁症 pmiR-S1PR3-3′-utr 双荧光素酶活性检测
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应用于pol-miR-26a,26b靶基因检测的psiCHECK-dmrt1-3'UTR报告质粒的建立
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作者 徐明琴 王前龙 +3 位作者 王新艳 张俊玲 孙文慧 向玉婷 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期568-573,共6页
为明确牙鲆雄性性别相关关键基因dmrt1 (doublesex and mab-3-related transcription factor 1)是否为pol-miR-26a、pol-miR-26b作用的靶基因,本研究利用PCR技术克隆了dmrt13'UTR区,并成功引入了特殊限制性内切酶PemⅠ和NotⅠ的识... 为明确牙鲆雄性性别相关关键基因dmrt1 (doublesex and mab-3-related transcription factor 1)是否为pol-miR-26a、pol-miR-26b作用的靶基因,本研究利用PCR技术克隆了dmrt13'UTR区,并成功引入了特殊限制性内切酶PemⅠ和NotⅠ的识别位点;将得到的dmrt1 3'UTR区片段和psiCHECK-2载体进行双酶切、连接后得到野生型重组质粒;并且利用定点诱变法对dmrt1 3'UTR区进行体外定点诱变,将pol-miR-26a、pol-miR-26b识别的靶序列ACTGAA突变为TGACTT,形成突变型重组质粒。经琼脂糖凝胶电泳鉴定、双酶切及测序分析,成功获得了可用于pol-miR-26a、pol-miR-26b的靶基因dmrt1验证的野生型psiCHECK-dmrt1-3'UTR和突变型psiCHECK-mutated dmrt1-3'UTR的报告质粒,为进一步研究pol-miR-26a、pol-miR-26b的靶基因dmrt1鉴定和功能奠定了基础。 展开更多
关键词 牙鲆 pol-miR-26a pol-miR-26b DMRT1 psiCHECK-dmrt1-3utr psiCHECK-mutated dmrt1-3utr
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IBV H52疫苗株主要结构蛋白基因信息解析 被引量:2
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作者 曹伟胜 廖明 +4 位作者 任涛 罗开健 张桂红 袁少华 辛朝安 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期635-637,共3页
In this study, the genes encoding main structural proteins and 3′ untranslated region (UTR) of a commercial domestic vaccine strain H52 and a commercial foreign vaccine strain H52 of infectious bronchitis virus (IBV)... In this study, the genes encoding main structural proteins and 3′ untranslated region (UTR) of a commercial domestic vaccine strain H52 and a commercial foreign vaccine strain H52 of infectious bronchitis virus (IBV) were obtained by RT-PCR, then were cloned and sequenced respectively. The sequence analyses showed the genetic information of S1 gene, M gene, N gene and 3′UTR of domestic vaccine strain H52 was remarkably different from that of foreign H52 strain and that of published sequences of H52 strain. Compared with foreign H52 strain, this domestic H52 strain was genetically closer with M41 strain and was located in the same branch of phylogenetic tree based on the sequences of main structural protein genes. The results strongly suggested that it was necessary to build genetic information archives of seed stock of IBV vaccine strains. 展开更多
关键词 结构蛋白 基因信息 鸡传染性支气管炎病毒 IBV 疫苗株 解析 病毒基因组 核衣壳蛋白 纤突蛋白 养禽业 RNA 膜蛋白 病原
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MiR-4324通过作用于RacGAP1抑制人RCC细胞的增殖 被引量:1
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作者 张庆松 李文贤 +3 位作者 郭磊 刘勇 牛海涛 毛昕 《临床泌尿外科杂志》 CAS 2021年第12期954-960,共7页
目的:观察miR-4324对人RCC细胞生长的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测RCC组织和癌旁组织中RacGAP1 mRNA和miR-4324的表达;通过细胞瞬时转染的方式在人RCC细胞中转染miR-4324模拟物和过表达RacGAP1质粒;qPCR检... 目的:观察miR-4324对人RCC细胞生长的影响及作用机制。方法:实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测RCC组织和癌旁组织中RacGAP1 mRNA和miR-4324的表达;通过细胞瞬时转染的方式在人RCC细胞中转染miR-4324模拟物和过表达RacGAP1质粒;qPCR检测细胞miR-4324潜在靶基因RacGAP1 mRNA的表达,Western印迹法检测RacGAP1蛋白的表达;采用细胞增殖实验检测细胞增殖能力;采用EdU实验检测细胞增殖活力。结果:qPCR结果显示,与肾小管上皮细胞和正常肾组织相比,RCC细胞和RCC组织中miR-4324表达明显降低,RacGAP1 mRNA表达明显增高;与对照组相比,转染miR-4324分别抑制786-O和CAKI-1细胞中RacGAP1 mRNA的表达,Western蛋白印迹检测结果验证了miR-4324对RacGAP1基因表达的调控;而RCC细胞786-O和CAKI-1细胞中共转染miR-4324模拟物和过表达RacGAP1质粒后,细胞中RacGAP1表达恢复。MTT结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-4324模拟物后,细胞增殖能力明显下降;共转染miR-4324模拟物和过表达RacGAP1质粒后,细胞增殖能力逐渐增强。EdU结果显示,与阴性对照组相比,转染miR-4324模拟物的细胞EdU阳性细胞百分比明显减低,表明细胞增殖能力明显下降。双荧光素酶报告基因实验结果显示,在RCC细胞786-O和CAKI-1细胞中miR-4324能够与RacGAP1基因3’UTR特定序列结合从而靶向调控RacGAP1基因的表达。结论:miR-4324能通过靶向结合RacGAP1的3’UTR特定序列抑制其表达,从而显著抑制RCC细胞的增殖。 展开更多
关键词 miR-4324 RacGAP1基因 3utr 肾细胞癌
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rno-miR-129-5p对大鼠大麻素Ⅰ型受体基因3′-非编码区双荧光素酶活性的影响
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作者 许婧怡 徐君美 +5 位作者 李琛琛 郭励劼 郭梓钰 张浩辰 徐志卿 杨予涛 《生物技术》 CAS 2022年第1期21-28,共8页
[目的]探究rno-miR-129-5p对含有大鼠大麻素Ⅰ型受体(CB1R)基因3′-非编码区(UTR)双荧光素酶报告载体的调控作用。[方法]以大鼠前额叶皮层脑区和海马脑区cDNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增出含有rno-miR-129-5p与CB1R基因3′-UTR... [目的]探究rno-miR-129-5p对含有大鼠大麻素Ⅰ型受体(CB1R)基因3′-非编码区(UTR)双荧光素酶报告载体的调控作用。[方法]以大鼠前额叶皮层脑区和海马脑区cDNA为模板,利用聚合酶链式反应(PCR)扩增出含有rno-miR-129-5p与CB1R基因3′-UTR结合位点的目的片段。利用重叠延伸的方法将两个靶序列CAAAAA分别突变为CAGGCC,并将CB1R 3′-UTR和CB1R-mut 3′-UTR插入到pmiR-RB-Report^(TM) vector载体中。将rno-miR-129-5p mimic或其Negative control(NC)与野生型和突变型双荧光素酶报告载体共转染至PC12细胞后,检测其荧光素酶活性。[结果]成功构建了包含CB1R基因3′-UTR野生型双荧光素酶报告载体pmiR-CB1R 3′-UTR和突变型双荧光素酶报告载体pmiR-CB1R-mut 3′-UTR。荧光素酶活性检测发现rno-miR-129-5p mimic可以下调野生型报告载体的活性(P<0.05),而对突变型没有影响。[结论]初步证明CB1R基因3′-UTR是rno-miR-129-5p的作用靶点。 展开更多
关键词 rno-miR-129-5p 大麻素Ⅰ型受体 抑郁症 pmiR-CB1 R3′-utr pmiR-CB1R-mut3′-utr 双荧光素酶活性检测
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