抗真菌药物echinocandins和pneumocandins类的研究进展

新型抗真菌药物 echinocandins与 pneumocandins类的作用机制是能够非竞争性的抑制真菌细胞壁中 β- 1,3-葡聚糖合成酶的活性 ,进而引起真菌细胞壁的裂解以及细胞内外渗透压的改变从而将真菌细胞彻底杀死。本文综述了这两类药物的研究进展 ,主要包括它们的结构、分类、发现过程以及其中的三种上市或即将上市的药物 caspofungin、micafungin和

Pneumocandin B_0高产菌株选育

目的筛选获得pneumocandin B0高产菌株。方法以pneumocandin B0产生菌PB22-79作为出发菌株,采用微波诱变方法处理,然后利用He-Ne激光复合制霉菌素抗性筛选菌种,以菌种发酵液效价作为筛选指标。结果获得一株高产突变株FH-24-135,其摇瓶生产能力比出发菌株提高了56.3%。且遗传特性稳定。研究确定了微波辐射的最佳时间为80s,而He-Ne激光复合制霉菌素抗性筛选的最佳剂量为90min和25μg/m L(MIC)。结论 微波诱变结合He-Ne激光复合制霉菌素抗性筛选方法是筛选pneumocandin B0产生菌的有效方法 ,有利于提高菌株的发酵水平,为工业化生产奠定基础。

大孔吸附树脂分离纯化Pneumocandin B_0的研究

研究了用大孔吸附树脂从发酵液中提取Pneumocandin B0(PB0)的工艺条件。从8种大孔吸附树脂中筛选出HZ818吸附PB0效果较好,静态吸附量可达10 436μg·g-1。以HZ818树脂吸附饱和后,先用40%乙醇洗脱去除杂质、再用85%乙醇解吸,解吸收率达91.6%,PB0浓度富集20倍以上,色谱纯度由13.3%提高至78.6%。该吸附-洗涤-解吸工艺简单易行、成本低、环保,适合工业化生产。

丝状真菌Zalerion arboricola来源的抗真菌化合物pneumocandin B_0的分离纯化

pneumocandin B_0(PB_0)是新型棘白菌素类抗真菌药物卡泊芬净的前体。通过离心、溶剂抽提和大孔树脂脱色等方法从丝状真菌Zalerion arboricola发酵液中分离PB_0,得到纯度为77.6%的PB_0粗制品,进一步纯化后,得到纯度为97.2%的PB_0精制品。

制备高效液相色谱用于纽莫康定杂质B1和B5的纯化

目的开展低含量成分的富集和纯化研究,从Glarea lozoyensis菌体的发酵产物(即纽莫康定B0粗品)中制备出杂质B1和B5,并对其进行结构鉴定。方法建立了基于制备高效液相色谱(prep-HPLC)技术的两步纯化法,第一步使用亲水(HILIC)模式固定相对目标杂质进行富集,第二步采用反相(RPLC)模式固定相对杂质进行制备。得到的两个杂质采用质谱(MS)、核磁(NMR)进行鉴定,确定化合物结构。结果两个杂质为B1和B5,相对分子质量均为1049 Da,色谱纯度分别为97.83%和98.13%。经核磁鉴定,B1为B0的高酪氨酸类似物,B5为B0的鸟氨酸类似物。结论本研究发展的基于prep-HPLC的两步纯化方法为低含量成分制备提供参考,第一步分离实现目标成分富集,第二步利用正交性的色谱柱提高分离选择性,成功制备出杂质B1与B5,有助于B0杂质谱的建立和进一步的质量控制研究。

棘白菌素类抗真菌药物的结构与微生物合成

棘白菌素类抗真菌药物为一种新型脂肽类化合物,通过非竞争性抑制真菌细胞壁中的β-1,3-葡聚糖合酶活性进而抑制真菌细胞壁的合成。已有caspofungin、micafungin和anidulafungin三种药品成功上市。由于来源微生物的多样性,该类化合物的氨基酸组成、脂肪酸链以及侧链修饰均存在差异。本文从化学结构与生物合成的角度出发,总结了该类化合物的研究进展,主要包括棘白菌素类药物的化学多样性、产生菌的生物特性以及它们在发酵生产中所面临的工程问题等。

Glarea lozoyensis发酵生产棘白菌素类化合物纽莫康定的研究进展

棘白菌素化合物纽莫康定B0(pneumocandin B0)是抗真菌药物卡泊芬净(caspofungin)的前体。棘白菌素类化合物可以通过非竞争性抑制真菌细胞壁中的β-1,3-D-葡聚糖合成酶活性而抑制真菌细胞壁的合成。纽莫康定B0的生产菌是丝状真菌Glarea lozoyensis。本文从化学结构和生物合成的角度出发,总结了纽莫康定B0的研究进展,主要包括综述了纽莫康定化合物的化学多样性、生物合成途径、优良菌株的选育以及在发酵生产中所面临的工程问题等。

丝状真菌SIIA-F1108产生抗真菌物质的分离纯化和结构鉴定

目的研究丝状真菌SIIA-F1108发酵液中抗真菌的活性成分。方法利用大孔吸附树脂吸附、正相硅胶色谱层析和高压液相制备等技术,结合白念珠菌抑菌实验进行跟踪检测,分离丝状真菌SIIA-F1108的发酵液中的活性组分;通过紫外光谱、红外光谱、高分辨质谱、核磁共振进行分析,确定活性组分的结构。结果分离纯化得到SIIA-C1108A和SIIA-C1108B活性组分,分子式均为C_(50)H_(80)N_8O_(17),与文献报道的纽莫康定(pneumocandin)B_0和C_0同质。结论从丝状真菌SIIA-F1108的发酵液中分离得到的两个具有抗真菌活性物质分别为纽莫康定B_0和C_0,其中纽莫康定B_0作为合成醋酸卡泊芬净的前体物质,具备重要的经济价值。

亲水作用色谱法测定纽莫康定B0及其杂质的研究

目的建立同时检测纽莫康定发酵液中纽莫康定A0、Bo和C0的含量的HILIC方法a方法采用Xlon色谱柱（4．6mm×250mm，10μm）进行分离，以乙腈和水（87：13）为流动相；流速为2．0mL／min;检测波长：210rim；柱温：30℃进样量10此。结果纽莫康定A0、B0和c0三者质量浓度与峰面积分别在0．23-150μg／mL、0．12～100μg／mL、0．34～70μg／mL范围内线性关系良好，尺。均大于0．9993，平均加样回收率分别为96．73％（RSD，1．52％）、99．62％（RSD，1．77％）、102．35％（RSD，2．08％）。结论HILIC法同时检测纽莫康定A0、Bo和co含量的方法简单可行、精密度高、重复性好，为工业生产中分离纯化及质量控制提供依据。

HPLC法同时测定发酵液中纽莫康定A_0与B_0的含量

采用HPLC方法同时测定发酵液中纽莫康定A0与B0的含量。色谱柱为SepaxSapphire C18(4.6 mm×250mm,5μm),流动相为甲醇-水(体积比45∶55,内含0.1‰三氟乙酸),流速为1.0 mL.min-1,紫外检测波长为214nm。结果表明,纽莫康定A0与B0的浓度分别在47.5～191.4μg.mL-1和38.4～153.6μg.mL-1的范围内,与峰面积呈良好的线性关系(R分别为0.9997和0.9998);检测灵敏度分别为6.86 ng、5.95 ng;平均回收率分别为99.15%(RSD=0.96%,n=9)和99.31%(RSD=0.98%,n=9)。该方法简便、准确、重现性好,可用于发酵液中纽莫康定A0与B0含量的测定。

加权TOPSIS法用于某院棘白菌素类药物管理效果分析

目的促进卡泊芬净和米卡芬净的临床合理应用。方法参考卡泊芬净和米卡芬净药品说明书及相关指南,建立合理利用评价标准。采用加权TOPSIS法评价医院2013年至2021年使用此两药病例的用药合理性,分析其临床用药存在的问题。结果219个病例中,相对接近度小于60%的有59个(26.94%),其中米卡芬净50个(84.75%),卡泊芬净9个(15.25%)。卡泊芬净临床使用主要存在用药指征不足、医师权限管理及病程记录不完善等问题;米卡芬净临床使用的主要问题为病程记录不完整。结论卡泊芬净的用药指征不足、医师权限管理是临床关注的重点问题,卡泊芬净和米卡芬净的病程记录书写及病原学的筛查也是需要加强管理的重点环节。

前体物质对Glarea lozoyensis发酵产生纽莫康定B_0的影响（英文）

纽莫康定B_0是棘白菌素类化合物,其半合成衍生物卡泊芬净已被美国食品药品监督管理局(FDA)批准用于治疗无效或无法耐受其他抗真菌药的患者的侵袭性曲霉病。然而,通过发酵产生的纽莫康定B_0的效价较低,限制了卡泊芬净的工业生产。本研究将优化好的的培养基进行了改良,添加了4种前体物质。研究结果表明,大豆油、亮氨酸、异丁醇和甲硫氨酸显著影响发酵单位;进一步的正交试验结果表明,大豆油(A)对纽莫康定B_0效价的影响极显著(P<0.05),亮氨酸(B)、异丁醇(C)和甲硫氨酸(D)影响次之,最优发酵条件为A2B2C3D2即大豆油6.0g/L,亮氨酸1.0g/L,异丁醇4.0ml/L,甲硫氨酸0.3g/L时,纽莫康定B_0发酵单位达到1295mg/L左右。此外,还应用正交试验验证各因素的显着性。当将kLa作为指导参数,使用A315型叶轮的100L发酵罐进行放大和工业规模生产时,与原始效价相比,纽莫康定B_0产量增加了361%,并达到了2250mg/m L的水平。

不同冷冻保藏条件对Glarea lozoyensis生长及产纽莫康定B_0能力的影响

棘白菌素类化合物纽莫康定B_0生产菌株Glarea lozoyensis,在其连续传代和发酵过程中都观察到菌株的变异,给科研、生产带来极大困扰。因此,采用低温冷冻保藏对G.lozoyensis Q1进行长期保存。采用单因素实验法研究了低温保护剂类型、保藏温度以及低温保护剂浓度对G.lozoyensis Q1菌体形态和发酵性能的影响。以作用于全细胞的80 g/L甘油和作用于细胞壁外的200 g/L PEG-6000作为低温保护剂,在-80℃保藏3个月后,纽莫康定B_0产量达到1.6 g/L,与保藏前基本一致。并且,当菌体保藏过后菌丝形态能维持一定褶皱的实验组产量均能保持在1 g/L以上,当表面趋于光滑时产量急剧下降,仅为初始的25%左右。结果表明,以甘油及PEG-6000作为冷冻保护剂,在-80℃条件下可实现G.lozoyensis Q1长期保藏。

一种纽莫康定B_(0)丝氨酸类似物的分离和结构鉴定

目的从Zalerion arboricola菌体发酵液制备的纽莫康定B_(0)粗品中,分离纯化纽莫康定B_(0)丝氨酸类似物,并鉴定其化学结构。方法首先用PSN色谱填料进行富集;随后用X_(3)和C_(18)色谱填料进行分离、纯化,得到样品后用质谱、核磁进行检测,并对检测数据进行汇总、分析,鉴定该目标化合物的化学结构。结果经过分离、纯化得到目标化合物样品,进行结构鉴定后确定该化合物为纽莫康定B_(0)丝氨酸类似物,与文献报道的结构一致。结论分离、纯化得到的纽莫康定B_(0)丝氨酸类似物,为进行发酵及纯化工艺优化、质量研究,以及进行结构修饰,筛选活性物质奠定了基础。

基于渗透压调控的纽莫康定B_0发酵动力学

以海洋丝状真菌Glarea lozoyensis Q45为研究对象,研究不同渗透压条件下Glarea lozoyensis Q45的生长、底物甘露醇消耗以及纽莫康定B_0的生产特性。基于Logistics方程、Luedeking-Piret方程和Luedeking-Piret-Like方程,得到了描述纽莫康定B_0发酵模型的动力学参数。基于发酵动力学模型,提出了在菌体生长稳定期添加1.61 g/L Na Cl的调控策略。在该策略下,纽莫康定B_0的产量达到1.75 g/L,比初始条件的结果提高24.6%。

一种 Zalerion arboricola 发酵产物的分离、纯化和结构鉴定

抗真菌药物卡泊芬净是以丝状真菌Zalerion arboricola的菌体代谢产物纽莫康定B 0为中间体经化学合成得到。该菌在代谢产纽莫康定B 0的同时还会产生多种具有相似结构的代谢物。为了从这些结构类似物中寻找潜在的抗真菌药物中间体,对Zalerion arboricola菌株HCCB30111的代谢产物进行了分离纯化和结构鉴定。本实验成功的从该菌株的发酵液中分离到一个化合物,经结构鉴定证明其为纽莫康定B 0的结构类似物。该发现为进一步质量研究,结构修饰和抗真菌活性物质的筛选工作奠定了基础。

一种检测纽莫康定B_(0)和C_(0)质量浓度的HPLC方法研究

建立了一种高效液相色谱(HPLC)方法同时测定纽莫康定B_(0)和纽莫康定C_(0)的质量浓度,采用Waters XBridge Amide色谱柱,检测波长220 nm,以V(纯水)∶V(乙腈)为流动相,梯度洗脱。检测结果表明:纽莫康定B_(0)和C_(0)的质量浓度在定量限至400 mg/L范围内线性关系良好,定量限在0.1 mg/L左右,检测限在0.03 mg/L左右,纽莫康定B_(0)和C_(0)的平均回收率分别为99.2%和98.9%,重复性试验纽莫康定B_(0)和C_(0)质量浓度的RSD分别为0.39%和0.42%,纽莫康定B_(0)对照品溶液、纽莫康定C_(0)对照品溶液和供试品溶液在室温条件下24 h内稳定。

高压制备纽莫康定B_(0)的中试研究

为制得高纯度的纽莫康定B_(0),以给下游合成卡泊芬净提供物料,用单因素实验的方法,对流动相比例、上样量和洗脱流速等高压制备条件进行了优化,并对产品质量和制备液稳定性进行了分析,最终确定了V(二氯甲烷(工业))∶V(甲醇)∶V(水)=42∶9∶1,上样量为11.4 g粗品,洗脱流速为480 mL/min。制备液保存温度为4℃,需7 d内处理完毕。通过该方法,可以得到质量分数95%以上的B_(0),并能有效将B_(0)异构体C_(0)降至0.05%以下,为卡泊芬净的合成研究提供了质量保证。

肺囊康定B_0发酵培养基的优化研究

目的通过优化发酵培养基,提高肺囊康定的B0组分(PB0)产量。方法采用响应面分析法,根据中心组合设计原理及Design Expert 7.0软件分析,基于正交试验结果,对PB0发酵培养基中影响产量的四个主要因子进行配方优化,利用Numerical Optimization功能预测最大响应值并进行验证试验及发酵罐放大试验。结果获得最优发酵配方,摇瓶PB0产量较对照提高了35%,20M3发酵罐PB0产量较对照提高了38%。结论通过响应面分析法优化出发酵培养基,可使PB0的产量大幅提高,并成功地用于工业化生产。

纽莫康定杂质C_(0)的制备研究

目的 为控制纽莫康定B_(0)的质量及为卡泊芬净的杂质传递研究提供物料,本研究对关键杂质纽莫康定C_(0)进行了制备。方法 通过发酵液提取工艺富集、高压液相制备色谱、减压浓缩、冷冻干燥,制备得到纽莫康定C_(0)干粉,并对其进行紫外吸收光谱、红外吸收光谱、核磁共振、质谱等分析和结构鉴定。结果 得到了色谱纯度99.19%、峰纯度999.4(DAD检测器)、热重3.05%的纽莫康定C_(0)干粉1.7395 g,其结构经过确证为纽莫康定C_(0)。结论 制备得到的纽莫康定C_(0),可作为质量研究对照品和杂质传递研究用物料,并对纽莫康定其他杂质的制备具有重要参考价值。