聚合酶链反应(PCR)方法检测远缘链球菌

目的 :建立一种快速、特异、敏感的远缘链球菌PCR检测方法。方法 :根据已发表的远缘链球菌葡聚糖酶基因 (dexA)的特异片断设计一对寡核苷酸引物 ,对 12种变形链球菌群中包含a～h 8种血清型的细菌及 2 3种常见的口腔菌中进行PCR扩增 ,扩增产物电泳鉴定 ,并对特异片断进行回收 ,测序。结果 :变形链球菌群标准菌株中 ,只有远缘链球菌 (血清d、g型 )产生特异的扩增片断 ,测序结果与已发表的文献结果完全一致 ,且显示了极高的灵敏性 ,≥ 2× 10 2 个细胞均可以用该方法检出。结论 :PCR方法可以用于快速灵敏的检测远缘链球菌 。

RT-PCR法检测肾癌组织中MN/CAⅨ基因表达

目的评价RT-PCR法检测MN/CAⅨ基因在肾癌组织表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带。结论RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。

鼻咽癌相关新基因NPCEDRG真核诱导表达载体的构建及鉴定

目的构建受Tet系统调控人鼻咽癌相关新抑瘤基因NPCEDRG表达的真核诱导表达载体。方法以pcDNA3.1-NPCEDRG重组质粒为模板,采用聚合酶链反应(PCR)技术扩增NPCEDRG基因编码区,亚克隆到pRevTRE载体,PCR及双酶切鉴定,测序验证。结果以pRevTRE-NPCEDRG重组载体为模板PCR扩增以及双酶切重组载体,分别产生530 bp和520 bp长度的片断,测序结果证实插入片段方向正确,序列与Genebank已知序列一致,NPCEDRG基因编码区成功插入pRevTRE载体。结论成功构建了受Tet系统调控NPCEDRG基因表达的pRevTRE-NPCEDRG真核诱导表达载体,为深入研究NPCEDRG基因功能和揭示鼻咽癌发病分子机制提供实验手段。

RT-PCR法检测肾癌组织中MN/CAⅨ基因表达

目的评价RT-PCR法检测碳酸酐酶Ⅸ(MN/CAⅨ)基因在肾癌组织的表达的可靠性。方法以5例肾癌和5例正常肾组织为研究对象,提取总RNA,两步法进行RT-PCR反应,用MN/CAⅨ的特异性引物扩增,2%琼脂糖凝胶电泳后观察并测序。结果经过测序证实5例肾癌组织的RT-PCR产物中有4例可见特异的MN/CAⅨ条带,而正常肾组织的RT-PCR产物均无相应的MN/CAⅨ条带。结论RT-PCR法检测MN/CAⅨ在肾癌组织中的表达是准确、可靠的。

乳腺癌组织中IGF-1R表达及其临床意义

目的探讨胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)在乳腺癌发病机制中的作用及临床意义。方法应用RT-PCR方法,检测70例乳腺癌患者的癌、癌旁及乳腺正常区组织中的IGF-1R mRNA的表达,并分析IGF-1R mRNA表达与乳腺癌临床病理特点之间的关系。结果IGF-1R mRNA的表达量按正常、癌旁、癌组织顺序逐渐增高,IGF-1R/β-actin比值分别为0.584±0.058、0.382±0.086、0.203±0.042,3组间两两比较,差异有统计学意义(P<0.05);IGF-1R表达与乳腺癌的淋巴结转移、病理分期及ER状态显著相关(P<0.05),与肿瘤病理分型无显著相关(P>0.05)。结论IGF-1R在乳腺癌组织中高表达与乳腺癌的发生发展及转移有关,是有价值的肿瘤生物学行为标记物。

云南省德宏和昆明地区高效抗逆转录病毒治疗后HIV-1流行毒株pol区基因变异分析

目的 调查云南省德宏和昆明两个地区HIV-1流行毒株pol区基因在接受HAART后的变异情况.方法 选择接受HAART 1年以上血浆HIV-1病毒载量＞1 000拷贝/ml的139例HIV/AIDS患者,提取血浆中HIV-1 RNA,采用RT-nested-PCR扩增HIV-1的pol区基因蛋白酶（PR）和逆转录酶（RT）基因片段,测定DNA序列.经拼接整理后与美国斯坦福大学网站提供的HIV耐药数据库（Stanford HIV Drug Resistance Database）进行比对,分析耐药突变位点,采用MEGA 4.1构建系统进化树以确定HIV的亚型,结合HIV/AIDS患者流行病学资料进行综合分析.结果 昆明地区患者HIV以T215F/NY/I、M41L/M和T69G/N/I/S/A/D突变较多,突变率分别为39%（24/62）、27%（17/62）和27%（17/62）,高于德宏地区患者HIV的相应突变率[分别为16%（11/69）、13%（9/69）和9%（6/69）],差异有统计学意义（x2值分别为8.646、4.242和7.909,P均＜0.05）.德宏地区HIV-1流行毒株pol区基因亚型主要为CRF01_AE亚型为32%（22/69）、C亚型为25%（17/69）、B亚型19%（13/69）.而昆明地区主要是08_BC亚型60%（37/62）、CRF01_AE亚型21%（13/62）和07_BC亚型15%（9/62）.结论 云南省德宏、昆明两地区HIV-1流行毒株pol区基因PR、RT基因突变频率存在部分差异,昆明地区T215F/N/Y/I、M41L/M和T69G/N/I/S/A/D突变率高于德宏地区.两地共检出HIV-1流行毒株pol区基因CRF01_AE、B、C、BC、08_BC和07_BC共6种基因亚型.

汉族人群RANTES基因多态性与艾滋病病毒-1感染关系的初步研究

目的 分析RANTES启动子和内含子等位基因在中国汉族健康人群和艾滋病病毒 1(HIV 1)感染者人群的分布特点。方法 用聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)法和DNA测序法对中国汉族HIV 1感染者以及健康人群的 53 8份血液样品的RANTES启动子 -40 3、-2 8和 3 0 0份样品的内含子In1.1等位基因进行检测。结果 汉族的健康人群 -40 3、-2 8等位基因具有 6个基因表型 ,AC AC、AC AG、AC GC、AG GC、GC GC、AG AG ,比例分别是 12 .4%、3 .5%、2 9 .2 %、10 .9%、42 .1%、1.5%。从单倍型看 ,以GC最高为 62 .7% ,AC为 2 8.7% ,AG为 8.6%。与AC AC比较 ,AC AG、AC GC、AG GC、GC GC的OR值显示有轻度的保护作用。汉族HIV 1感染者和汉族健康人群间RANTES等位基因频率无统计学差异 ;RANTES内含子In1.1等位基因T T、C T和C C分别为 71.0 %、19.9%和 9.1% ;其中RANTESIn1.1T为 81% ,RANTESIn1.1C为 19%。男性感染者和健康人等位基因分布差异有显著性 ,RANTESIn1.1C比例与健康人比显著增高 ,显示RANTESIn1.1C是HIV 1感染的危险因素 ;但是女性人群比较差异不显著。三个单核苷酸多态性(SNP)位点之间存在严重的连锁不均衡。结论 本项研究证实了在中国汉族人群中存在RANTES启动子 -40 3、-2 8和内含子In1.1突变?