PEG-胆固醇双重修饰PBCA纳米粒脑靶向机制

目的中枢神经系统疾病目前存在的主要问题是血脑屏障(BBB)通透性的问题,本实验期望通过制备PEG-胆固醇双重修饰PBCA纳米粒,提高难透过BBB的中枢神经系统疾病的治疗及早期诊断药物的治疗作用,并对其经过BBB进入脑组织的机制进行探讨。方法采用乳化聚合法制备双重修饰PBCA纳米粒并对其理化特性进行评价。(1)双重修饰PBCA纳米粒体内药动学及脑组织分布研究:实验前12小时大鼠进行颈静脉插管手术。实验时于插管处给予原药溶液,胆固醇单修饰及PEG-胆固醇双重修饰PBCA纳米粒。给药后不同时间点取血200μL,化学/发光分析仪测定血液中香豆素-6的含量。大鼠尾静脉分别给予原药溶液、胆固醇单修饰及PEG-胆固醇双重修饰PBCA纳米粒。给药后不同时间点处死大鼠,取脑组织测定香豆素-6的含量。(2)双重修饰PBCA纳米粒体外细胞摄取及转运机制研究:采用b End.3细胞模型(永生化小鼠脑内皮细胞株)评价了载体及纳米粒的体外细胞毒性,同时选用了巨胞饮介导的内吞作用(细胞松弛素D),网格蛋白介导的内吞作用(氯丙嗪),小窝蛋白介导的内吞作用(染料木素),胆固醇耗竭(MβCD和制霉菌素),高尔基体抑制剂(布雷菲德菌素A)和耗能(叠氮钠)等七种细胞摄取抑制剂来研究载药纳米粒的细胞摄取及转运机制。结果 (1)制备的纳米粒粒径为(191.1±1.22)nm、载药量约为1.97%,包封率大于98%。同时双重修饰PBCA纳米粒在体外具有更明显的缓释效果。(2)双重修饰PBCA纳米粒在体内具有更高的血药浓度及缓释效果,能持续释放12 h,而胆固醇单修饰纳米粒仅释放8 h,原药溶液仅4 h内能检测到药物。脑组织分布研究结果表明,双重修饰PBCA纳米粒静脉给药后脑组织中药物含量显著增高且成缓慢释放的过程,说明具有成为脑靶向制剂的研究潜力。(3)载体及载药纳米粒细胞安全性良好,纳米粒在实验范围内没有明显的细胞毒性,具有较好的安全性。选择不同类型的摄取和转运抑制剂研究了载药纳米粒的细胞摄取及转运机制。结果表明,参与细胞转运和摄取的机制可以是不同的,而胆固醇-PEG双修饰PBCA纳米粒在b End.3细胞中的转运机制,是一个包括巨胞饮介导、耗能、同时需要胆固醇参与等多种机制介导的复杂过程。结论本实验制备的PEG20000-胆固醇双重修饰PBCA纳米粒,可解决中枢神经系统疾病的治疗及诊断药物体内BBB通透率低、安全性差、缓释性差等瓶颈问题,具有重要应用前景。

PBCA纳米粒介导的hTERT反义寡核苷酸对A549细胞的抑制作用

目的以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(polybutylcyanoacrylate nanopartic les,PBCA-NPs,NPs)作为端粒酶逆转录酶(hum an telom erase reverse transcriptase,hTERT)反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynuc leotide,ASODN)载体转染A549细胞,研究其对A549细胞的影响。方法采用MTT法检测NPs的细胞毒性和细胞增殖情况;流式细胞仪(flowcytom etry,FCM)检测5-′FITC标记的ASODN(FASODN)转染细胞后胞内荧光强度和ASODN各组(ASODN1-NP,ASODN2-NP和ASODN3-NP)转染细胞后细胞周期的变化;倒置显微镜观察A549细胞生长状态;免疫细胞化学法检测hTERT蛋白表达。结果NPs质量浓度超过2.5 g.L-1时细胞毒性较大。转染24 h后,FASODN-NP组较FASODN组胞内荧光明显增强(P<0.01)。与空白对照组和正义寡核苷酸(sense oligodeoxynuc leotide-nanopartic le,SODN-NP)组相比,ASODN-NP处理后A549细胞形态改变,细胞增殖减慢;各组细胞生长抑制率随时间延长而增高,72 h时ASODN1-NP,ASODN2-NP,ASODN3-NP各组最高抑制率分别可达62.4%,44.6%和36.4%;细胞周期改变,细胞被阻滞于G1期,S期细胞明显减少(P<0.01);且hTERT蛋白表达明显减少。结论NPs介导的hTERT ASODN能有效抑制A549细胞增殖、改变细胞周期及降低hTERT蛋白表达,对该细胞生长有明显抑制作用。

SPIO-PBCA-PEG纳米微粒的合成及MR成像

目的:探讨制备长循环SPIO聚氰基丙烯酸正丁酯纳米微粒(SPIO-PBCA-PEG)的方法,在动物实验中分析其肝脏成像效果,分析其潜在的应用价值。方法:采用界面聚合法制备SPIO-PBCA-PEG;透射电镜下观察SPIO-PBCA-PEG的形态,采用Malvern-3000HS激光粒度分析仪测定粒径及其分布,采用邻二氮菲法测定上清液中Fe离子浓度,计算SPIO-PBCA-PEG的包封率,采用红外光谱学仪器检测其结构。选择SPF级Wistar大鼠12只分为2组,分别使用SPIO和SPIO-PBCA-PEG,于MRI平扫后分别于注药后10和30 min以及1、2、4和24 h行增强扫描,计算各时间点肝脏强化率。结果:①透射电镜观察SPIO-PBCA-PEG呈类圆形,具有明显的核-壳结构;②SPIO-PBCA-PEG平均粒径177 nm,粒径分布为0.20;③SPIO-PBCA-PEG溶液中铁含量为2.27mg/ml,SPIO-PBCA-PEG中SPIO包封率(ER)为86.9%;④红外光谱学可测出所得药物中同时含有PBCA及PEG特征峰谱,证明所得药物SPIO-PBCA-PEG中PEG连接到PBCA纳米壳上;SPIO-PBCA-PEG组峰值强化时间晚于SPIO组,但负性峰值强化率高于SPIO组,达到峰值后各时间点负性强化率均高于SPIO组。结论:SPIO-PBCA-PEG纳米粒具有较强的亲水性及长循环的特性,表面基团易进行修饰,为进一步实验提供思路。

适配子PBCA-USPIO纳米微粒的制备研究

目的研究适配子PBCA-USPIO纳米微粒体制备工艺。方法以聚氰基丙烯酸正丁酯作为载体,通过乳化聚合法制备PBCA-USPIO,并通过正交试验和单因素实验设计对制备工艺进行优化。用生物素亲和素法将适配子连接到PBCA-USPIO纳米微粒上。MTT法检测细胞毒性。结果优化后的制备工艺所获得的PBCA-USPIO纳米微粒体大小均匀、形态规则、无黏连,平均粒径为260 nm。适配子PBCA-USPIO的细胞毒性低于USPIO。结论该优化方法切实可行,能有效提升PBCA-USPIO纳米微粒体的制备质量。

PBCA纳米粒介导hTERT反义寡核苷酸对A549细胞的转染

目的:应用聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒介导或者寡核苷酸直接转染技术,研究聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒介导下端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸对A 549细胞的转染,探讨聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒对A 549细胞摄入寡核苷酸的影响。方法:利用5′端F ITC标记的反义寡核苷酸,以聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒介导FA SODN(FA SODN-NP)或FA SODN直接转染A 549细胞,流式细胞仪测定细胞的胞内平均荧光强度,荧光显微镜观察细胞内荧光物质的分布。结果:转染24 h后,与空白对照组和FA SODN组相比,FA SODN-NP组胞内荧光强度明显增加(P<0.01)。结论:聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒介导能有效提高A 549细胞对端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸的摄入。

冻干rIFNα2a-PBCA-NS对小鼠抗流感病毒的作用

目的 考察冻干基因重组人干扰素α2a聚氰基丙烯酸丁酯纳米球 (rIFNα2a -PBCA -NS)ig、sc给药对小鼠抗流感病毒的作用。方法 采用流感病毒FM1M12 E11鼠肺适应株攻击用可致小鼠死亡的肺炎建立的强毒模型 ,研究抗小鼠流感病毒的作用。结果 ig、sc相同剂量后 ,小鼠延长生存率为 :冻干rIFNα2a -PBCA -NS优于原药rIFNα2a ,前者所含白蛋白不影响其体内作用。结论 冻干rIFNα2a -PBCA

DOX-PBCA-NP的制备及其对脑胶质瘤SHG44细胞的抑制作用观察

目的制备阿霉素(DOX)-聚氢基丙烯酸丁酯(PBCA)-纳米粒(NP),观察其在体外对脑胶质瘤SHG44细胞的抑制作用。方法采用乳化聚合法制备DOX-PBCA-NP,透射电镜观察其形态,紫外分光光度法测定其载药量和包封率。将SHG44细胞加入不同浓度的DOX-PBCA-NP进行培养,流式细胞仪(FCM)测定细胞凋亡和细胞周期,倒置显微镜观察细胞生长情况。结果DOX-PBCA-NP呈圆形,载药量与包封率分别为10.58%与87.43%。在同一DOX浓度的DOX组、DOX-PBCA-NP组与对照组相比,G1/G0期SHG44细胞增多、S期细胞减少(P<0.01),DOX-PBCA-NP组的变化较DOX组更明显(P<0.05)。结论用乳化聚合法制备的DOX-PBCA-NP形态一致,具有较高的载药量和包封率,体外对脑胶质瘤SHG44细胞的抑制作用较DOX增强。

ADM-PBCA载药纳米微球的制备及其界面Tf靶向载体的修饰

为了提高临床抗肿瘤药物的疗效,降低其毒副作用,本研究探讨以阿霉素(ADM)为模型药物,以聚氰基丙烯酸正丁酯(PBCA)为载体,通过乳化聚合法制备PBCA载药纳米微球并对其表征;利用红外光谱探讨载药纳米微球的结合机理,检测了PBCA载药纳米微球的体外释药性能;最后将PBCA载药纳米微球经十六烷基三甲基溴化铵对其表面改性后,利用化学键合方法在其表面修饰上转铁蛋白(Tf),旨在实现药物的主动靶向性。通过L9(33)正交设计实验发现,优化后的载药纳米微球平均粒径为276.7 nm,平均包封率为(54.74±1.52)%,平均载药量为(26.07±1.63)%,分散性及成球性良好。另外体外释药实验表明,PBCA载药纳米微球具有良好的缓释性能和双相释药特性,符合双相动力学方程:Q=0.516 1+36.02e(-t/6.151 2)+5.87e(-t/1.61)(r=0.989 5)。

MUC1-GEM-PBCA-NP、CA199-GEM-PBCA-NP静注对裸鼠胰腺癌种植瘤的抑制作用对比观察

目的比较黏性蛋白1(MUC1)与糖类抗原199(CA199)单克隆抗体偶联吉西他滨聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(MUC1-GEM-PBCA-NP、CA199-GEM-PBCA-NP)对裸鼠胰腺癌种植瘤的抑制作用。方法采用皮下种植法建立胰腺癌种植瘤荷瘤动物模型,将制模成功的裸鼠随机分为6组各7只;A组静注2.5 mg/kg的MUC1-GEM-PBCA-NP,B组静注等量CA199-GEM-PBCA-NP,C组静注等量吉西他滨聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(GEM-PBCANP),D组静注等量吉西他滨,E组静注等量聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(PBCA-NP),F组静注等量生理盐水,各组均经尾静脉注射,每5 d重复治疗1次。35 d后比较各组移植瘤肿瘤体积、抑瘤率。另取9只荷瘤裸鼠并分为3组各3只,a组静注10 mg/kg MUC1-Cy3-PBCA-NP,b组静注10 mg/kg CA199-Cy3-PBCA-NP,c组静注等量Cy3-PBCANP,比较各组Cy3荧光信号强度。结果与其余各组比较,A组肿瘤体积小,抑瘤率高(P均<0.05);与C、D组比较,B组肿瘤体积小,抑瘤率高(P均<0.05);与F组比较,C、D组肿瘤体积小,抑瘤率高(P均<0.05)。a组荧光信号强度显著强于其余两组,主要定为于细胞胞膜及胞质中;b组荧光信号强度弱于a组,且主要定为于细胞胞膜,胞质中荧光信号较弱;c组荧光信号微弱,仅部分细胞胞膜可见。结论MUC1-GEM-PBCA-NP、CA199-GEM-PBCANP均可抑制裸鼠胰腺癌种植瘤,但抗MUC1作为载药纳米粒的修饰分子时抑瘤效果更佳。

HPLC法测定丝裂霉素C聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒中丝裂霉素C的含量

目的:建立高效液相色谱法测定丝裂霉素 C 聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(MMC-PBCA-NP)中药物含量。方法:采用C_(18)柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以混合磷酸盐缓冲液-乙腈(85:15)为流动相,流速为1 mL·min^(-1),紫外检测器,检测波长为365 nm。结果:丝裂霉素 C(MMC)浓度在5～250 μg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9998;平均回收率(n=6)为98.15%。结论:本法专属性强,操作简便,结果准确。适用于 MMC-PBCA-NP 的质量控制。

金红石高温高压相变的Raman光谱特征

以Ar作压力介质,在准静水压力条件下,利用激光加热DAC技术和显微Raman光谱原位测试技术,在0~35 GPa压力范围开展金红石的高温高压相变研究。在室温条件下,金红石结构TiO2于13.4 GPa开始转变成斜锆石相,于21 GPa时转变完全,并直到35 GPa时斜锆石相稳定存在。在压力分别为29.4和35.0 GPa时,用YAG激光器发出的波长为1.064μm的红外激光束扫描加热样品,TiO2斜锆石高压相转变成另一Pbca结构高压相。卸压时,Pbca相于26.3 GPa时转变成斜锆石相。斜锆石相转变成Pbca相需要加热才能发生,而卸压时却在较小的压力区间即迅速转变完全,两相转变压力边界在28 GPa左右。进一步卸压,斜锆石相直到11 GPa仍稳定,在7.6 GPa时斜锆石相与-αPbO2相两相共存,5 GPa时完全转变成-αPbO2相,并直到常压该相以亚稳定态存在。

界面聚合法制备聚α-氰基丙烯酸正丁酯毫微囊

采用界面聚合法制备了粒径约 2 0 0nm的聚α 氰基丙烯酸正丁酯毫微囊 ,运用动态激光光散射和透射电镜测定了毫微囊的粒径及其分布 ,系统研究了高分子稳定剂类型、表面活性剂的用量、辅助添加剂的用量、以及后处理条件等因素对毫微囊粒径及其分布的影响 .结果说明 ,在高分子稳定剂中 ,葡聚糖的稳定作用优于Poloxamer 188,而葡聚糖的用量越大 ,毫微囊的粒径越小 ,采用葡聚糖 70比葡聚糖 40更能得到窄分布的毫微囊 .增加表面活性剂吐温 2 0的用量 ,同样减小毫微囊的粒径 .与三油酸甘油酯相比 ,在有机相中加入苯甲醇能够增大毫微囊粒径 ,并改善毫微囊的规整性 .乙醇和丙酮均可作为溶剂添加在有机相中 ,但含乙醇的体系分散较好 ,界面聚合得到聚α 氰基丙烯酸正丁酯毫微囊粒径分布较窄 .此外 ,通过考察浓缩温度发现 ,在2 0℃下真空浓缩时毫微囊粒径基本保持不变 ,而在

聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒基因载体的制备及相关性质的体外研究(英文)

目的 优选制备可载带质粒DNA的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒 (PBCA -NPs)的工艺条件 ,并研究其体外生物学特性。方法 选用乳化聚合法制备PBCA -NPs,采用正交实验法 ,以激光粒度分析仪及原子力显微镜 (AFM )综合分析实验结果来确定最优化的制备条件。用阳离子表面活性剂十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)对纳米粒进行表面修饰后连接质粒DNA ,并分析PBCA -NPs及CTAB修饰的PBCA -NPs的细胞毒性效应、DNA装载效率、PBCA -NPs -DNA抗超声破坏和抗DNaseI的降解作用及其在体外的基因转染能力。结果 激光粒度分析仪及原子力显微镜结果表明 ,PBCA -NPs粒形圆整 ,大小均匀 ,平均粒径 10 6nm。琼脂糖凝胶电泳及紫外分光光度计测定DNA装载量达 93%。该纳米粒能显著提高质粒DNA抵抗核酸酶降解和超声波剪切的能力。细胞转染实验表明 ,该纳米粒传递质粒DNA进入HepG2和 3T3细胞的效率较高。结论 利用该制备工艺生产出的具备良好生物学特性的PBCA -NPs是基因转运和基因治疗中极具应用潜力的非病毒载体。

姜黄素聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒的制备及理化性质研究

目的:制备姜黄素的聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒(Cur-PBCN),并对其进行理化性质评价。方法:采用乳化聚合法制备Cur-PBCN,以包封率和载药量为指标,采用正交设计法L16(43)对处方进行优化并考察其理化性质。结果:制得的纳米粒在电镜下呈球形,平均粒径93.8mm,平均包封率为(50.4±2.2)%,平均载药量为(33.5±0.9)%,Zeta电位为-6.81mV;2h体外释药34.74%,随后是缓慢释药过程,其体外释药符合双相动力学方程:100-Q=4.5235e-0.1724t+4.1641e-0.0114t。结论:制得的纳米粒具有好的理化性质,缓释效果明显。

反义寡核苷酸聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒的制备及载药研究

目的制备载反义寡核苷酸(ASODNs)聚氰基丙烯酸丁酯阳离子纳米粒。方法以二乙氨乙基-葡聚糖(DEAE-Dextran)为修饰剂,采用乳化聚合法制备阳离子聚氰基丙烯酸丁酯纳米粒,采用吸附法制备载ASODNs纳米粒。用原子力显微镜观察其形态,用激光粒度仪测定Zeta电位及粒径,高效液相法测定药物的载药量和包封率,琼脂糖电泳分析抗核酸酶的能力。结果制得的纳米粒(NP),形态规整、大小均匀,平均粒径为90.2nm,Zeta电位值为+40.1mV,载药量达到84.3μm·mg-1时,几乎所有的药物被负载,DEAE-Dextran-(NP)所吸附的ODNs有较好的对抗核酶降解的能力。结论DEAE-Dextran-NP是一种稳定、高效的反义寡核苷酸传递系统。

聚氰基丙烯酸丁酯包覆玫瑰香精纳米胶囊的制备

在乳液体系下采用离子聚合法制备了聚氰基丙烯酸丁酯包覆玫瑰香精纳米胶囊,采用红外光谱(FT-IR)、扫描电镜(SEM)、动态激光光散射(DLS)、热失重(TGA)和电子鼻对该纳米香精胶囊进行性能表征。结果表明,纳米香精胶囊中聚氰基丙烯酸丁酯与香精有一定氢键作用。纳米香精胶囊的粒径约50～60nm,分布均匀且为圆球状。纳米香精胶囊和聚氰基丙烯酸丁酯均有两段热失重,在第一段热失重中纳米香精胶囊的质量损失率较聚氰基丙烯酸丁酯增加了17.45%。上述结果证明香精已被引入纳米胶囊内部。在对纳米香精胶囊和普通香精热处理后发现,纳米香精胶囊的香气强度无明显变化,高于普通玫瑰香精,证明纳米香精胶囊具有良好的稳定性和缓释性。

阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒粒径对肝靶向性的影响

目的：观察不同粒径的阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒（adriamycin polybutylcyanoacrylate nanoparticles，ADM-PBCA-NP）及阿霉素（adriamycin，ADM）经小鼠尾静脉给药后在小鼠体内的生物分布差异，研究不同粒径的ADM-PBCA-NP对正常肝脏的靶向性，旨在筛选出肝靶向性最好的ADM-PBCA-NP。方法：昆明种小鼠180只，随机分为游离ADM组、（22．3±6．2）nmADM—PBCA-NP组、（48．6±9．2）nmADM-PBCA-NP组、（101．9±20．3）nmADM—PBCA-NP组、（143．5±23．5）nmADM—PBCA-NP组和（194．2±28．4）nmADM-PBCA-NP组。每组30只，经小鼠尾静脉按2mg／kg的剂量分别注射上述ADM-PBCA-NP或游离ADM。每组于给药后5，15，30min，1，5，12h各处死5只小鼠，分别提取肝、肾、脾、心、肺、血浆样品，以高效液相色谱法测定ADM的浓度。结果：12h以内除（22．3±6．2）nm组外，其他纳米粒组小鼠肝脏中的ADM浓度显著高于游离ADM组（P〈0．05），而在心肌组织中未测到或ADM浓度显著低于游离ADM组（P〈0．05），肾脏组织中高浓度ADM维持时间不长；（101．9±20．3）nm组小鼠肝脏中的ADM浓度显著高于其他各组（P〈0．05）；其次为（143．5±23．5）nm组。（22．3±6．2）nm组的ADM浓度在肝、肾、心、脾、肺组织中均未测到。各纳米组小鼠肝脏中ADM浓度在各时间段缓慢释放。结论：（1）一定粒径范围的ADM-PBCA-NP具有良好的肝靶向性，并具有缓慢释药的特点，降低了心脏等脏器的药物分布，是治疗肝癌较理想的给药系统。（2）100～150nm粒径的ADM-PBCA-NP肝靶向性最强，这为临床应用阿霉素聚氰基丙烯酸正丁酯纳米药物治疗肝癌提供了实验依据。

吉西他滨聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒的制备工艺

目的优化吉西他滨聚氰基丙烯酸正丁酯(GCTB-PBCA-NP)纳米粒的制备工艺。方法以GCTB-PBCA-NP的粒径、包封率和载药量为指标,在单因素考察的基础上,通过正交设计优化处方和制备工艺。结果制备的GCTB-PBCA-NP平均粒径为(112±9)nm,包封率为(54.12±2.43)%,载药量为(11.08±0.89)%。结论制备的纳米给药系统为拓展吉西他滨的临床给药新剂型提供了参考。

苦参碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒冻干粉针剂的制备及体外释放

采用乳化聚合法制备苦参碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒,以包封率为考察指标,均匀设计优化处方与工艺。所得纳米粒平均粒径为(157.4±22.4)nm,包封率为83.8%,载药量为9.4%,体外释药具有双相动力学特征。

柔红霉素聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒体外逆转白血病细胞多药耐药性

目的：研究柔红霉素聚氰基丙烯酸正丁酯毫微粒（ＤＮＲＰＢＣＡＮＰ）能否逆转白血病细胞的多药耐药性。方法：以噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法评价ＤＮＲ，ＤＮＲＰＢＣＡＮＰ，ＰＢＣＡＮＰ对白血病细胞敏感株、耐药株的细胞毒性。结果：ＤＮＲ对耐药株的细胞毒作用降低８倍，而ＤＮＲＰＢＣＡＮＰ对敏感株、耐药株的细胞毒作用保持不变。结论：ＤＮＲＰＢＣＡＮＰ可逆转白血病细胞的多药耐药性。