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一株大黄鱼虹彩病毒的分离鉴定及多克隆抗体的制备 被引量:1
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作者 刘笑茹 郑义华 +5 位作者 赵路品 高娃 祁婧婷 吕利群 胡鲲 姜有声 《水产学杂志》 CAS 2024年第2期39-45,共7页
2021年7月,浙江省象山某养殖场养殖的大黄鱼(Larimichthys crocea)出现类似大黄鱼虹彩病毒引起的疾病。采用鲤上皮瘤细胞培养和病毒主要衣壳蛋白测序分析的方法,从患病的大黄鱼中分离到一株病毒。该病毒接种到鲤上皮瘤细胞(EPC)后出现... 2021年7月,浙江省象山某养殖场养殖的大黄鱼(Larimichthys crocea)出现类似大黄鱼虹彩病毒引起的疾病。采用鲤上皮瘤细胞培养和病毒主要衣壳蛋白测序分析的方法,从患病的大黄鱼中分离到一株病毒。该病毒接种到鲤上皮瘤细胞(EPC)后出现空斑、脱落的细胞病变症状。根据虹彩病毒MCP和ATPase基因保守序列设计特异性引物对病毒组织样本进行PCR扩增,得到分别为1 367 bp和740 bp的目的基因片段。将MCP基因扩增片段测序,经BLAST对比及系统发育树聚类分析,确定该分离的病毒属虹彩病毒科细胞肿大病毒属。通过蔗糖密度梯度离心纯化,用透射电镜观察该病毒粒子呈正六边形,直径为120~150 nm。用纯化病毒作为抗原免疫小鼠获得抗大黄鱼虹彩病毒的多克隆抗体,效价为1∶7 000;通过SDS-PAGE和Western blotting初步确定3个免疫蛋白。本研究为大黄鱼虹彩病毒纯化提供一种新方法,并初步分离出免疫蛋白,为该病毒相关分子生物学研究、蛋白研究以及疫苗制备等提供理论依据。 展开更多
关键词 大黄鱼 虹彩病毒 细胞肿大病毒 分离鉴定 病毒纯化 多克隆抗体
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肾上腺素能β1受体亚型特异性抗体的制备及鉴定 被引量:3
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作者 任京力 赵树进 +2 位作者 杨太成 陈汝筑 孙桂玲 《中山医科大学学报》 CSCD 北大核心 2002年第1期37-39,43,共4页
【目的】制备和鉴定 β1受体亚型特异性抗体。【方法】人工合成 β1受体细胞膜外第二环 197 2 2 2位氨基酸序列作为抗原。连接钥孔冒贝血蓝蛋白 (KLH)增加抗原性后免疫兔获得抗血清。通过凝胶双扩散实验和ELISA法鉴定其效价 ;通过免疫... 【目的】制备和鉴定 β1受体亚型特异性抗体。【方法】人工合成 β1受体细胞膜外第二环 197 2 2 2位氨基酸序列作为抗原。连接钥孔冒贝血蓝蛋白 (KLH)增加抗原性后免疫兔获得抗血清。通过凝胶双扩散实验和ELISA法鉴定其效价 ;通过免疫荧光法及ELISA法鉴定其特异性 ;通过离体蛙心灌流实验鉴定其药理活性。【结果】该抗血清效价高 (分别为 1∶6 4和 1∶10 6)、特异性强 ,能和心肌 β1受体发生特异性结合 (1∶10 4 ~ 1∶10 5) ,为异丙肾上腺素的非竞争性拮抗剂。 (pD2 ′ =1 6 2 )。【结论】成功制备的 β1受体亚型特异性抗体可能成为进一步研究 β1受体分布、功能和定量的有力工具。 展开更多
关键词 肾上腺素能受体 多克隆抗体 分离 提纯 特异性抗体 制备 鉴定
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双峰驼血清IgG亚型的分离纯化及多克隆抗体的制备 被引量:6
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作者 李东海 张旺东 +7 位作者 程翠翠 贾帅 李建飞 令小东 何晚红 高欣 刘磊 王雯慧 《兽类学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期486-490,共5页
双峰驼IgG亚型包含IgG1、IgG2和IgG3,其中IgG2和IgG3为重链抗体,在结构上与IgG1存在显著差异。为获取双峰驼血清中的IgG1、IgG2和IgG3,并分析其抗原特异性和抗体特异性,本文交替使用Protein A和Protein G亲和层析柱,对其分离纯化,并通... 双峰驼IgG亚型包含IgG1、IgG2和IgG3,其中IgG2和IgG3为重链抗体,在结构上与IgG1存在显著差异。为获取双峰驼血清中的IgG1、IgG2和IgG3,并分析其抗原特异性和抗体特异性,本文交替使用Protein A和Protein G亲和层析柱,对其分离纯化,并通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行鉴定;之后分别制备兔抗双峰驼IgG1、IgG2和IgG3的多克隆抗体,通过ELISA对制备的多克隆抗体的效价进行测定;最后应用Western blot评估这3个亚型多克隆抗体的特异性,进而对双峰驼血清中IgG1、IgG2和IgG3的抗原特异性进行分析。结果表明,应用Protein A和Protein G亲和层析柱成功分离纯化出双峰驼血清中的IgG1、IgG2和IgG3;并制备兔抗双峰驼IgG1、IgG2和IgG3的多克隆抗体效价均在1∶10 000以上,且所获得的多克隆抗体分别与IgG1、IgG2和IgG3之间均存在交叉反应,但兔抗双峰驼IgG1多克隆抗体较其它两个亚型多克隆抗体特异性低。结果证明,双峰驼IgG1、IgG2和IgG3均具有良好的免疫原性,三者结构虽存在显著差异,但其抗原特性类似。 展开更多
关键词 双峰驼 IGG亚型 分离纯化 多克隆抗体
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野猪甘露聚糖结合凝集素的分离纯化及其多克隆抗体的制备
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作者 刘玉芬 赵文阁 《野生动物》 2009年第5期242-244,共3页
对野猪血清样品用溴化氰活化的甘露聚糖结合凝集素-Sepharose4B亲和柱亲和层析,获得纯化的野猪MBL样品,再进行SDS-PAGE电泳,显示有1条32kDa主带,2条36kDa和56kDa副带。选取32kDa的蛋白带制备免疫原,免疫家兔制备抗血清,Western blot方... 对野猪血清样品用溴化氰活化的甘露聚糖结合凝集素-Sepharose4B亲和柱亲和层析,获得纯化的野猪MBL样品,再进行SDS-PAGE电泳,显示有1条32kDa主带,2条36kDa和56kDa副带。选取32kDa的蛋白带制备免疫原,免疫家兔制备抗血清,Western blot方法鉴定该抗体可以特异性识别野猪血清中的MBL分子。本研究表明采用亲和层析法可以获得野猪血清中MBL-A分子,制备的多克隆抗体可以用于检测天然MBL分子,将为野猪MBL的生物学特性及与抗病力相关性的研究提供基础。 展开更多
关键词 甘露聚糖结合凝集素 分离纯化 多克隆抗体 野猪
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