HPLC of Amino Acids and Oligopeptides by Pre-Column Fluorescence Derivatization with 9-Acridine Formyl Chloride

A highly sensitive HPLC method for the detection of amino acids and oligopeptides with 9-acridine formyl chloride by pre-column fluorescence derivatization has been developed. Glycine, glycylglycine, histidine, triglycine and glutathione were separated on a reversed-phase C-18 column with methanol-water-triethylamine eluent, derivatization and chromatographic conditions were optimized. The five derivatives were eluted in 28 min with a good reproducibility. Linear range of the calibration graph was 0.08-260 nmol/ml(-1). The relative standard deviations(n=6) are < 5%. Detection limits (signal-to-noise ratio=3) for the five derivatives are 20-40 fmol.

HPLC-柱后衍生荧光法测定水产品中河豚毒素含量结果的不确定度评定

通过建立HPLC-柱后衍生荧光法测定水产品中河豚毒素含量的不确定度评定方法,量化分析测定结果的不确定度分量,并对各分量相对贡献进行比较。结果表明:测定结果的不确定度主要来源于标准品的校准过程、样品称量、实验过程移取及定容、样品重复实验误差、前处理过程中的回收率不同等。其中校准不确定度中标准溶液配制的不确定度贡献最多,称样量不确定度最小;当水产品中河豚毒素的含量为90.6μg/kg时,其扩展不确定度为0.69μg/kg(包含因子k=2)。

HPLC-APCI-MS法分析测定白刺籽油中游离脂肪酸

利用荧光衍生试剂1,2-苯-并3,4-二氢咔唑-9-乙基对甲苯磺酸酯（BDETS）作为脂肪酸柱前衍生化试剂,采用梯度洗脱在Eclipse XDB-C8色谱柱上对游离脂肪酸（FFA）（油酸、亚油酸、软脂酸和硬脂酸）衍生物进行分离。利用柱后在线的串联质谱以大气压化学电离源（APCI）正离子模式实现了各组分的质谱定性。荧光检测的激发和发射波长分别为λex=333 nm,λem=390 nm。脂肪酸的线性回归系数大于0.9990,检出限为3.38～6.59 nmol/L。建立的方法具有良好的重现性。利用此方法对超临界CO2提取的唐古特白刺籽油中几种游离脂肪酸进行了分析。结果表明白刺籽油中含有大量的游离不饱和脂肪酸。

柱前衍生化HPLC荧光法测定脂肪胺化合物

采用新型荧光试剂4-(1-甲基-1H-菲并[9,10-d]咪唑-2-)苯甲酸(MPIBA)进行柱前衍生并经荧光检测对脂肪胺进行了高效液相色谱(HPLC)分离.衍生物的荧光激发和发射波长分别为eλx=260 nm,eλm=446 nm.80℃下在四氢呋喃(THF)溶剂中用N-乙基-N-′[(3-二甲氨基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)作催化剂,衍生反应10min后获得稳定的荧光产物.在Eclipse XDB-C8色谱柱(4.6×150 mm,5 mm)上,采用梯度洗脱对12种游离脂肪胺衍生物进行了优化分离,实现了各种脂肪胺衍生物的快速、准确测定.该方法具有良好的重现性,多数脂肪胺的线性回归系数大于0.9996,检测限在10.5-53.4 fmol范围内,对实际样品臭豆腐中脂肪胺的测定测定结果满意.

化学衍生法应用于生物多胺的HPLC荧光检测

介绍了在高效液相色谱荧光衍生法分析多胺中常用的几类荧光衍生试剂及其应用,对近年多胺分析中的高效液相色谱荧光衍生方法进行了综述。

花椒游离脂肪酸的微波快速提取与衍生化HPLC荧光检测方法研究

建立了花椒中游离脂肪酸的微波快速提取技术,并采用苯并[b]吖啶酮-5-乙基对甲苯磺酸酯(BAETS)作为柱前衍生试剂,建立了19种长链饱和与不饱和游离脂肪酸的衍生化HPLC荧光检测分析方法。微波提取功率700W,溶剂为体积比1∶1的氯仿/甲醇,70℃提取10min,可达近100%提取率。采用色谱柱Eclipse XDB-C8(4.6mm×150mm,5μm),酸性乙腈/水流动相进行梯度洗脱,HPLC荧光激发和发射波长分别为273nm和505nm。同时进行在线质谱辅助鉴定(APCI-MS),更提高了HPLC荧光定量的准确度。结果表明,微波提取快速高效,分析方法线性良好,线性范围14.286～0.0139μmol/L,最低检出限为0.636nmol/L,回收率在87.60%～106.59%之间。本方法快速、准确、高灵敏,可作为花椒相关样品的标准化检测方法。

HPLC法测定兔血清中海洋硫酸多糖聚甘古酯的浓度

建立了测定兔血清中硫酸多糖药物聚甘古酯的高效液相-柱后衍生荧光色谱方法。以盐酸胍为衍生试剂，采用离子排阻柱Aminex HPX-87H（300mm×7．8mm），0．005mol·L^-1H2SO4为流动相，流速为0．5mL·min^-1，荧光检测，外标峰高法定量。方法线性范围为10～100μg·mL^-11。高、中、低3种浓度的日内及日间精密度的RSD分别为4．28％，4．05％，5．97％。6．78％，5．32％，7．68％。高、中、低3种浓度的相对及绝对回收率平均值分别为92．32％，94．76％，94．44％，72．07％。73．42％，70．77％。本方法可准确、快速测定兔血清中聚甘古酯的浓度，为其药物动力学研究提供了1个灵敏、可靠的分析方法。

脂肪胺化合物的HPLC荧光法测定及质谱鉴定

采用合成的荧光试剂4-(1-甲基-1H-菲并[9,10-d]咪唑-2-)苯甲酸(MPIBA)对脂肪胺进行柱前衍生后,采用高效液相色谱(HPLC)分离和荧光检测。衍生物的荧光激发和发射波长分别为λex=260nm、λem=446nm。80℃条件下在四氢呋喃(THF)溶剂中用N-乙基-N'-[(3-二甲氨基)丙基]碳二亚胺盐酸盐(EDC)作催化剂,衍生反应10min后获得稳定的荧光产物。在EclipseXDB-C8色谱柱(4.6×150mm,5μm)上,采用梯度洗脱对12种游离脂肪胺衍生物进行优化分离。采用大气压化学电离源(APCI)正离子模式进行在线柱后质谱定性,实现了各种脂肪胺衍生物的快速、准确测定。该方法具有良好的重现性,多数脂肪胺的线性回归系数大于0.9996,检测限在10.5～53.4fmol范围内,对实际样品臭豆腐中脂肪胺的测定结果满意。

新型荧光衍生试剂TMDEPAB-Ⅰ的设计合成及其在HPLC分离荧光检测巯基化合物中的应用

本研究以二氟化硼二吡咯甲烷（BODIPY）为荧光团,碘乙酰胺为衍生基团,设计并合成了新型巯基化合物荧光衍生试剂1,3,5,7-四甲基-2,6-二乙基-8-苯基-（4-碘乙酰胺）-二氟化硼二吡咯甲烷（TMDEPAB-I）。以TMDEPAB-I作为柱前衍生试剂,建立了高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FD）测定谷胱甘肽、L-半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、高半胱氨酸、谷氨酰半胱氨酸、半胱氨酰甘氨酸和6-巯基嘌呤7种巯基化合物的新方法。TMDEPAB-I和巯基化合物在pH=11.0的NaOH-H3BO3缓冲溶液中,温度40℃下25min即可衍生完全。利用反相C18色谱柱,以pH=6.0的柠檬酸-NaOH缓冲溶液为流动相,梯度洗脱,各巯基化合物的衍生产物在22min内可实现基线分离,检测限（S/N=3）为1.0∽3.0nmol/L,回收率在94%∽102%之间。

氟虫腈亚砜荧光衍生化、HPLC-FLD检测方法的建立及应用

建立了氟虫腈代谢物-氟虫腈亚砜的柱前荧光衍生化方法,并将其应用于鸡蛋中的残留检测。优化后的柱前荧光衍生化反应主要条件如下:催化缩合剂为EDC/DMAP;反应溶剂为二氯甲烷;氟虫腈亚砜与荧光衍生试剂的用量比为1:8;45℃水浴中反应75 min。衍生产物为N-(3-氰基-1-(2,6-二氯-4-(三氟甲基)苯基)-4-((三氟甲基)硫代)-1H-吡唑-5-基)-4-(2-(9-乙基-9H-咔唑-3-基)-1H-菲并[9,10-d]咪唑-1-基)丁酰胺(DX1),具有很高的荧光强度。衍生化产物DX1的高效液相色谱-荧光检测(HPLC-FLD)的主要条件如下:C_(18)色谱柱;等度洗脱;流动相:乙腈/水(80/20,v/v);流速:1.0 mL/min;λex=310 nm,λem=404 nm;进样量20μL;柱温40℃。在上述检测条件下,氟虫腈亚砜HPLC-FLD检测方法的检测限为0.033μg/L,定量限为0.092μg/L。在此基础上,建立了鸡蛋残留氟虫腈亚砜提取和检测的HPLC-FLD方法,检测限和定量限分别达到了0.052和0.132μg/kg,精密度、稳定性和重现性在保留时间和峰面积上的RSD分别小于0.04%和2.7%,上机检测可在20 min内完成。该方法具有较好的灵敏度、精确性和可靠性,可应用于鸡蛋中残留氟虫腈亚砜的检测。

LPS体外诱导PRP产生PGE_2模型的构建及HPLC-FD的优化

为了研究花生四烯酸(AA)代谢拮抗剂筛选的新方法,通过模拟体内AA代谢产生前列腺素E2(PGE_2)的过程,建立一种新的体外脂多糖(LPS)诱导高浓度血小板血浆(PRP)悬液中AA代谢产生PGE_2的炎症模型,并对高效液相色谱-荧光衍生法(HPLC-FD)测定PGE_2方法进行了优化。结果表明,经50℃水浴反应,衍生化程度最高,HPLC-FD检测最佳条件为柱温40℃、流动相为添加0.1%三氟乙酸(TFA)的水∶乙腈(40∶60),流速1mL/min,Brmmc-PGE_2的保留时间为6.562min。体外模型试验中LPS+AA诱导试验组(157.476±36.104)ng/mL,LPS诱导空白对照组(11.416±2.034)ng/mL,而AA底物空白对照组中未检测到PGE_2。表明AA作为体外PGE_2代谢模型的关键底物,在加入诱导物质LPS后,AA可大量代谢生成为PGE_2。

N-羟基琥珀酰亚胺-3-吲哚乙酸酯柱前衍生HPLC分离荧光检测氨基酸

Ｎ－羟基琥珀酰亚胺－３－吲哚乙酸酯（ＳＩＩＡ）是一种含有新型反应活性基团的荧光衍生试剂，可在温和的条件下与氨基化合物进行衍生反应．以ＳＩＡ为柱前衍生试剂，研究了其氨基酸衍生物的高效液相色谱行为和分离条件，在含适宜ｐＨ值柠檬酸（Ｈ３ｃｉｔ）－Ｎａ２ＨＰＯ４缓冲溶液的甲醇－水流动相中，获得了常见氨基酸的有效分离，检出限达亚ｐｍｏｌ级．

HPLC-荧光衍生化法在药物分析中的应用

综述了HPLC-荧光衍生化法中衍生化试剂的研究现状,简述了HPLC-荧光衍生化技术及其在药物分析中的应用情况,展望了HPLC-荧光衍生化技术的发展前景。

油菜蜂花粉超临界提取物HPLC-FLD分析及体外清除自由基活性研究

本实验通过柱前荧光衍生HPLC-FLD对油菜蜂花粉超临界提取物(Rape bee pollen supercritical fluid extract,PSFE)中的主要成分进行了定性及定量分析,并采用超氧阴离子自由基(O-·2)体系、二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)体系和羟基自由基(·OH)体系考察了PSFE提取物的体外清除自由基活性。结果表明,PSFE中含有丰富的游离脂肪酸,其中饱和脂肪酸占总游离脂肪酸的58%,不饱和脂肪酸占42%,尤其是不饱和脂肪酸C18∶3的含量最高,达到了10933.69μg/g。同时,PSFE对O-·2、DPPH·和·OH这三种典型的自由基均具有不同程度的清除作用,其中对DPPH·的清除能力高于阳性对照物L-抗坏血酸,并且随浓度的增大清除效果更显著,最高可达60.29%;而对O-·2和·OH的清除效果在实验浓度范围内最高可分别为11.99%和7.59%,比阳性对照物低。

柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定白酒中的甜蜜素

白酒中甜蜜素(化学名为环己基氨基磺酸钠)是我国食品安全监督抽检计划中的重点关注项目,生产企业亟需简单、经济、灵敏度高而且可靠的检测方法。本研究建立了柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定白酒中甜蜜素的方法。在酸性条件下,通过脱磺酸基反应将样品中的环己基氨基磺酸钠转化为氨基化合物,然后加入400 g/L的氢氧化钠溶液中和样品处理液,再加入邻苯二甲醛衍生试剂与样品溶液中的氨基化合物进行反应,产生具有荧光信号的吲哚取代衍生物。以反相C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相进行等度洗脱,荧光检测器检测,外标法定量。结果表明,甜蜜素在0.1~2.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,其相关系数(r^(2))大于0.999。基于白酒样品,在0.1~1.0 mg/kg含量范围内进行3个浓度水平的加标回收试验(n=6),平均回收率为90.7%~100.9%,相对标准偏差为3.5%~5.6%,方法的检出限为0.03 mg/kg,定量限为0.10 mg/kg。应用本方法对市售9种白酒样品进行检测,结果与GB 5009.97-2016(第三法)液相色谱-串联质谱法所得结果一致。本方法具有成本低、灵敏度高、专属性强、定量结果准确的特点,适用于大批量白酒中甜蜜素的定量检测,可为生产企业或相关机构进行白酒中甜蜜素的日常监测提供有力的技术支持。

高效液相色谱法测定蜂产品中链霉素残留量

采用双试剂柱后衍生法,在C18柱上以0.01mol/L 1-庚烷磺酸钠+乙腈为流动相及荧光检测器(Ex=263nm,Em=447nm)检测蜂蜜中链霉素的残留量,优化了蜂蜜样品的前处理方法和高效液相色谱条件,包括流动相组成和流速及衍生化试剂的处理,同时改善样品前处理过程中淋洗液和提取液的用量,并选用50%三氯乙酸作为沉淀剂,建立了一种更简便、快速、准确性和重现性好的链霉素检测方法。

糖类物质的色谱分析

综述了糖类化合物的色谱分离和检测的方法,包括气相色谱、高效液相色谱和毛细管电泳,主要对糖类化合物衍生方法进行了较为详细的介绍。

高效液相色谱法测定蜂产品中链霉素残留量

采用双试剂柱后衍生法,在C18柱上以0.01mol L1 庚烷磺酸钠+乙腈(65+35)为流动相,以荧光检测器(λex=263nm,λem=447nm)检测蜂蜜中链霉素的残留量,优化了蜂蜜样品的前处理方法和高效液相色谱条件,包括流动相组成和流速、衍生化试剂的处理、样品前处理过程中淋洗液和提取液的用量等,并选用三氯乙酸溶液(1+1)作为沉淀剂,建立了一种较好的链霉素检测方法。

六味地黄多糖在小鼠体内的吸收

目的 了解六味地黄多糖 (CA4 3)在小鼠体内的吸收及吸收部位。方法 给小鼠灌胃及静注CA4 3,用高效液相色谱 /柱后荧光衍生化法测定其在血浆中的浓度 ;采用在体肠灌流技术研究CA4 3在小鼠肠道各部位的吸收。结果 口服灌胃后CA4 3的Tmax为 1 0 0h ;Cmax为 6 7 1mg·L-1;MRT为 3 30h ;F为 35 9%。在十二指肠和空肠上段 ,空肠下段及回肠的吸收率分别为 16 5 %、6 32 %和3 0 9% ,在大肠中不吸收。结论 CA4 3可通过口服以大分子形式吸收 。

高效液相色谱-柱后衍生和质谱联用测定大米中氨基甲酸酯类农药残留量

研究了高效液相色谱-柱后衍生荧光检测和液质联用分别测定大米中14种和16种氨基甲酸酯类农药残留量的方法。二氯甲烷和丙酮的混和溶剂提取后，用柱后衍生荧光检测法和离子阱多级质谱联用法进行测定。柱后衍生荧光检测法检出限为20～50μg／kg，离子阱多级质谱联用法检出限为10～20μg／kg，添加平均回收率在70％～92％之间，RSD％在6．7％～12％。