死后不同时间的组织细胞DNA含量分析

本文应用流式细胞仪对大鼠死亡后不同时间的心、肝、肾组织细胞DNA含量进行了分析。结果显示:与死后0点细胞DNA含量值相比,6小时细胞DNA含量下降到99.5％,12小时为91.3％,18小时为87.1％,24小时为81.3％,30小时为76.7％,36小时为74.3％,48小时为72.3％。上述规律性变化,将可能对早期死亡时间的推断提供客观可靠的依据。

禁食处理和宰后时间对鸡肉蛋白磷酸化水平的影响

目的:探讨宰后肌浆蛋白和肌原纤维蛋白的磷酸化水平,并研究宰前禁食和宰后时间对鸡肉蛋白磷酸化水平的影响。方法:将30只三黄鸡随机分为3组:未禁食、禁食12h和禁食24h组。宰杀后立即剥取胸大肌并将其分切成3块。1块肉样作为宰后0h样品,另外2块肉样在0℃条件下存放3h和10h,分别作为宰后3h和10h的样品。将一维电泳和Pro-Q Diamond染色结合起来分析其肌浆蛋白和肌原纤维蛋白的磷酸化水平。结果:禁食12h组的肌浆蛋白磷酸化水平最高,而肌原纤维蛋白的磷酸化水平则随着禁食时间的延长而逐渐增加(P<0.05)。此外,禁食组与未禁食组中的绝大多数蛋白均在宰后3h时达到最大值(P<0.05)。结论:肌浆蛋白和肌原纤维蛋白的磷酸化水平都会受宰前禁食和宰后时间的影响,且禁食可能通过改变肌肉中蛋白质的磷酸化程度而影响宰后肌肉僵直的进程,进而影响肌肉嫩度。

成熟时间和斩拌时间对低盐牛肉丸品质的影响

以牛后腿肉为原料制作牛肉丸,采用均匀设计探讨宰后成熟时间、斩拌时间和食盐添加量对肉丸质构特性、出品率和感官品质的影响。结果表明:3个因素对牛肉丸的质构特性、出品率和感官评分均有显著影响(P<0.05)。牛肉丸的弹性随宰后成熟时间的延长先降低后升高;牛肉丸的回复力随着宰后成熟时间的延长或食盐添加量的增加逐渐变大,随着斩拌时间的增加先上升后下降;牛肉丸的硬度随着宰后成熟时间的延长先下降后上升,随着斩拌时间的增加逐渐下降,随着食盐添加量的增加逐渐增大。牛肉丸的出品率和感官评分均随宰后成熟时间的延长而下降,低盐条件下下降尤为明显。因此,对于低盐牛肉丸的生产,宰后越早加工,牛肉丸的品质越好。

珠江三角洲猪尸体上昆虫群落的演替及其对法医学中死亡时间推断的指示意义

为了解决刑事案件中死者死亡时间推断的难题,不同季节野外环境用18头猪尸体做模拟材料观察和筛选对推断死亡时间高度准确的昆虫指标。结果表明,幼虫开始出现时间、幼虫开始爬离时间、大部分幼虫爬离尸体的时间、开始化蛹的时间、大部分幼虫化蛹的时间、开始羽化的时间、羽化结束的时间等若干昆虫指标比较敏感且稳定可用作死亡时间的精确推断。在珠江三角洲春季、夏季及秋季尸体腐败很快,分别在259±23,202±18,277±20h进入白骨化期,而冬季则时间较长,约经过1297±63h才进入白骨化期。大约有47种嗜尸性昆虫在尸体生态环境出现,大多数种类全年可见,尸体上的昆虫群落的优势种为大头金蝇Chrysomya megacephala、绯颜裸金蝇Achoetandrus rufifacies及厚环黑蝇Hydrotaea(Ophyra)spinigera。蝇类昆虫在尸体上只能大规模繁殖一代尸体即白骨化。根据以上结果可确定一些可用于死亡时间推断的关键时间点。

宰后放置时间和冷冻对中式香肠品质的影响

采用均匀试验设计,以宰后放置时间和是否冷冻为考察因素,以猪肉为原料进行香肠加工,探讨宰后放置时间和是否冷冻对香肠品质的影响规律。结果表明:宰后放置时间和是否冷冻对中式香肠的感官评分没有显著影响;对pH值、原料肉系水力、生香肠的硫代巴比妥酸反应物(TBARS)值和出品率有显著影响,且均呈非线性关系。进行优化计算得到:当所选用的原料为冷冻肉时,暂未找到共同解;当所选用的原料为未经冷冻的肉样时,宰后冷冻时间越早,出品率越大,生香肠的TBARS值越小。因而以鲜肉为原料制作香肠,所选原料越新鲜,香肠品质越好。

纤维联接蛋白的析出与大鼠皮肤早期损伤的时间关系

采用免疫组化(PAP)方法,检测大鼠皮肤损伤区的FN,发现在生前创伤后15min,创壁FN即呈明确阳性;随着伤后经历时间的延长,创壁FN逐渐增多,并滑创壁呈条带状沉积;而在死后5min的创伤,创壁FN则呈阴性。本文为区别生前与死后皮肤创伤提出了一种新的方法。

人体脑组织RNA表达水平与早期PMI的相关性

目的 探讨人体脑组织多种RNA指标的表达水平与早期死亡时间（PMI）的相关性。方法 选取12例已知PMI（4.3~22.5 h）的个体,提取脑组织总RNA。选取8种常用RNA指标（β-actin、GAPDH、RPS29、18S rRNA、5S rRNA、U6 snRNA、miRNA-9、miRNA-125b）,通过实时荧光定量PCR技术检测其在脑组织中的表达水平。运用geNorm软件筛选早期PMI表达稳定的内参指标,并分析其表达水平与相关因素（年龄、性别、死亡原因）的关系。运用R软件将内参标准化的RNA指标代入前期研究建立的数学模型推断PMI,计算推断PMI的误差率以验证模型精确性。结果 5S rRNA、miRNA-9和miRNA-125b表达稳定,其表达水平与年龄、性别、死亡原因无关。利用β-actin推断PMI的误差率为24.6%,GAPDH为41.0%。结论 5S rRNA、miRNA-9和miRNA-125b在死亡早期表达稳定,适合作为人体脑组织的内参指标。β-actin表达水平与PMI相关性良好,有望成为推测早期PMI的辅助指标。

宰后不同时间冷冻和冻结速率对牛肉食用品质的影响

采用均匀实验设计,以宰后时间和冻结速率为考察因素,以牛背最长肌为原料,探讨宰后放置不同时间进行冷冻和不同冻结速率对解冻后牛肉食用品质的影响规律。结果表明,宰后时间和冻结速率对冻结肉样的蒸煮损失、p H、a*值和剪切力值均有显著影响(p<0.05),但对肉样的L*值、b*值影响不显著(p>0.05)。当保持冻结速率一定时,肉样解冻后的蒸煮损失和p H均随着宰后时间的增加而增加,a*值和剪切力随宰后时间的延长而降低,宰后时间对肉样的解冻汁液流失无显著影响(p>0.05);当保持宰后时间一定时,冻结肉样的解冻汁液流失、蒸煮损失、p H、a*值和剪切力值均随着冻结速率的增大而降低。

宰后放置时间对牛肉匀浆物热诱导凝胶特性的影响

通过对宰后1、2、3、4、5d的牛肉匀浆物的可溶性蛋白质浓度、凝胶的保水特性、凝胶强度及质构特性等指标的测定，研究宰后放置不同时间对牛背最长肌匀浆物热诱导凝胶特性的影响。结果表明，匀浆物的蛋白质浓度与凝胶保水性随放置时间呈现相同的先降后升的变化趋势，而凝胶强度、脱水率、硬度、粘性与咀嚼性则呈现相反的先升后降趋势。宰后放置时间较短时（1～3d），凝胶弹性呈现先升后降的显著变化，当放置较长时间（≥4d），弹性值有所回升，但变化并不显著。宰后放置较短时间（1～3d），内聚性随宰后时间的增加显著降低，宰后放置较长时间（≥4d），内聚性增加并趋于稳定。由此可知，宰后放置不同时间对牛肉匀浆物的凝胶特性影响较大，且各指标随宰后时间的变化趋势存在明显的相关性，可为凝胶类肉制品生产的原料选择提供理论依据。

大足黑山羊宰后成熟过程中感官与理化性质的变化

本实验以大足黑山羊后腿肉股四头肌为实验材料,测定其在成熟过程中的感官及理化指标（滴水损失、色泽、剪切值、蒸煮损失、pH值、糖原含量、肌原纤维小片化指数（myofibrillar fragmentation index,MFI）、挥发性盐基氮（total volatile basic nitrogen,TVB-N）含量和硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid reactive substances,TBARS）值）的变化。结果表明：滴水损失、pH值、糖原含量、TBARS值等发生明显变化,并且主要变化在宰后前72 h内基本完成,而滴水损失、pH值在24 h后变化不显著（P〉0.05）;MFI值在成熟24 h后变化差异显著（P〈0.05）;TVB-N含量在0~72 h时,符合一级鲜肉的标准。羊肉的成熟时间依感官、色泽、pH值、TBARS值等指标的变化判断,以72 h为宜;从TVB-N含量的变化看,成熟时间应小于72 h。综合考虑,确定大足黑山羊的最佳成熟时间为72 h。

判断溺水豚鼠在水中死亡时间的研究

乙醇和正丁醇大量存在于溺水尸体中。其浓度与尸体在水中的浸泡时间有一定的相关关系。温度能影响上述的相关关系。在自然平均温度１５—１８℃的条件下，运用气相色谱法测定其溺死后不同浸泡时间在血、肺、肝中存在的乙醇和正丁醇含量。其合并后回归方程式依次为ｙ１＝１１５．７２＋１８．２４ｘ；ｙ２＝－４１９．７１＋６４．７０ｘ；Ｙ３＝－３０３．０７＋５４．８７ｘ。研究中发现，溺死后７—１３天内，运用本方法来判断溺死时间的准确性较好。

宰后冷却时间对鹅肌肉僵直过程中理化特性的影响

为比较冰水冷却时间对东北白鹅宰后僵直过程中理化特性的影响,随机捕获同一批草原放牧饲养100日龄的东北白鹅80只,随机分为两组。宰后胴体,一组冰水中冷却0.5 h后移入4℃冷库中继续冷却至宰后24 h,另一组在冰水中冷却1.5 h后移入4℃冷库中继续冷却至宰后24 h。在宰后0、3、6、9、24 h分别测定胸脯肌肉和腿肌肉的pH、僵直值、糖原含量、肌节长度和MFI结果显示,宰后6 h,胸脯肌肉和腿肌肉0.5 h处理组的糖原含量和pH降低速度比1.5 h处理组快,0.5 h处理组的胸脯肌肉僵直值升高速度比1.5 h处理组快,胸脯肌肉和腿肌肉0.5 h处理组的MFI值显著大于1.5 h处理组。胸脯肌肉在僵直过程中0.5 h处理组的肌节长度比1.5 h处理组大;与此相反,腿肌肉在僵直过程中冰水冷却0.5 h处理组的肌节长度比1.5 h处理组小。这一结果提示,鹅宰后对胸脯肌肉和腿肌肉分别进行冰水冷却处理为宜。即胸脯肌肉冰水冷却0.5 h,腿肌肉冰水冷却1.5 h处理,对提高嫩度等肉品质更有利。

彗星试验检测大鼠牙髓细胞DNA降解推断死亡时间的研究

目的在特定条件下,用彗星试验技术,动态观察SD大鼠死后6～36h牙髓细胞DNA降解规律,探讨推断死亡时间的一种方法。方法模拟广州地区近5年秋季10月份的平均气温25.1℃,建立SD大鼠死亡模型。分别于死后6、12、24、36、48h提取大鼠牙髓组织进行彗星试验,荧光显微成像系统采集图像,同时获取多个分析参数(Comet4.0),并进行统计学处理。结果在死后6～36h,SD大鼠牙髓细胞DNA的碎片随着死后间隔时间的延长而增加;尾长在死后各时间点依次呈明显的上升趋势;Oliver尾矩和尾DNA随着死亡时间的延长,也均有一定的上升趋势。结论本研究提示细胞DNA的降解随着死后间隔时间的延长而增加;尾长随着死后间隔时间的延长在各时间点呈明显的上升趋势,用于推断死亡时间优于Oliver尾矩和尾DNA。

大鼠死后脑组织GAPDH mRNA多位点降解与晚期死亡时间的关系研究

目的探讨看家基因甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)mRNA上不同位点降解速率的规律性及其用于晚期死亡时间推断的可行性。方法选取在死后较长时间内仍能检测出扩增产物的大鼠脑顶叶皮质,对GAPDH mRNA的6个不同位点进行不同时间点(死后即刻、1d、5d、9d、12d)的实时荧光定量RT-PCR监测,这些位点依次分布于GAPDH mRNA的5′～3′端。结果用Ct值表示,并将所得数据及其比值(GAPDH mRNA1～GAPDH mRNA5与GAPDH mRNA6的比值)与死亡时间(PMI)进行线性回归分析。结果各位点GAPDH mRNA均与死后经过时间有相关性,但不同位点的mRNA降解速率不同。GAPDH mRNA1～GAPDH mRNA3的斜率为1.577、1.596、1.553,这3个位点的降解速率基本相同。GAPDH mRNA4～GAPDH mRNA6的斜率为0.936、0.892、0.829,这3个位点的降解速率基本相同。但后3个位点mRNA的降解速率要慢于前3个位点(P<0.05)。以GAPDH mRNA6作为外标,GAPDH mRNA1～GAPDH mRNA3与其的比值同PMI之间有相关性(R2=0.898,0.871,0.879),而GAPDH mRNA4和GAPDH mRNA5与其的比值同PMI之间无相关性。结论同一组织中看家基因GAPDH的不同位点存在降解速率的差异性。选取降解速率慢的靠近3′端的位点作为引物,可能更适于研究晚期死亡时间的推断。

兔肉宰后成熟过程中理化性质的变化

本实验以兔后腿和背最长肌为材料,研究兔肉宰后成熟过程中理化品质的变化,为兔肉成熟工艺的制定提供理论依据。结果表明:依pH值和色泽指标变化判断,兔肉成熟时间以72 h为宜;依肌原纤维小片化指数(myofibrillar fragmentation index,MFI)和剪切力指标判断,兔肉成熟时间以96 h为宜;依挥发性盐基氮(TVB-N)的变化判断,兔肉成熟时间应≤72 h。从多种因素综合考虑,兔肉的最佳成熟时间为72 h。

宰后放置时间对牛肉食用品质的影响

以牛后腿肉为原料,测定pH值、剪切力、蒸煮损失等指标随贮藏时间的变化状况,以确定宰后放置不同时间对牛肉品质指标的影响规律.结果表明:宰后放置时间对牛肉各品质指标均有显著影响.牛肉的pH值随着宰后放置时间的延长呈先降低后上升的趋势,于宰后4 d达到极限pH;而蒸煮损失的变化趋势则相反.肌肉的剪切力在宰后1 d内显著增加,24 h时达到最大值,当放置较长时间时,剪切力随着宰后时间整体呈现降低趋势.

不同环境条件下大鼠死后皮肤大体和组织学改变

目的研究观察大鼠在不同环境条件下死后不同时间其皮肤大体、组织学的改变,为推测较长的死后间隔时间建立实验动物依据。方法观察雌性SD大鼠在不同环境条件下的死后变化,并间隔一定死后时间取皮、染色和镜下观察。结果死后发生骨、软组织分离,A组约需35d,B组需13d。皮肤有形细胞成分和附属器完全分解破坏,A组约20d,B组7d。胶原纤维在A组死后40d(B组12d)仍有部分保留完整。结论环境温度差异是造成A、B两组发生死后改变时程不同的主要因素,利用皮肤大体、组织学改变可望较系统和准确的推测晚期死亡时间。

彗星试验检测大鼠死后肾脏细胞DNA含量与死亡时间的关系

【目的】探讨特定条件下,利用彗星试验测定SD大鼠死后6～48h肾脏细胞DNA含量与死亡时间的关系。【方法】健康成年雌性SD大鼠,按取材时间随机分为6组,每组3只。颈椎脱臼法处死动物,置于25.1℃(广州地区近5年10月份平均气温)培养箱中,分别于0、6、12、24、36、48、60h取大鼠肾脏组织,制备单细胞悬液,进行彗星试验,荧光显微成像系统采集图像,采集相关参数(Comet4.0)并进行Kruskal-Wallis检验。【结果】死后6～48h,SD大鼠肾脏细胞DNA碎片随死亡时间延长而增加,尾长在死后各时间点依次呈明显的增长趋势,Oliver尾矩和尾DNA随死亡时间的延长,亦有一定的增长趋势,60h未能测出。Kruskal-Wallis检验显示:各时间点彗星尾长均数的差异有高度显著性(P<0.01);彗星尾矩均数在死后6h和12h差异无统计学意义(P>0.05),24h和36h彗星尾矩均数差异有显著性(P<0.05);尾DNA均数在6h,12h,24h三个时间点差异无显著性(P>0.05),但与36h,48h尾DNA均数的差异均有显著性(P<0.05)。【结论】SD大鼠肾脏细胞DNA降解随死亡时间延长而增加,彗星试验技术为死亡时间推断提供了重要的实验依据。

大鼠脑、骨髓细胞核DNA降解推断死后间隔时间的研究

目的检测大鼠死后不同温度下脑、骨髓细胞核DNA降解规律，寻找推断早期死亡间隔时间（PMI）的新参数。方法10℃和20℃下，大鼠死后0～40h内，每隔4h取材脑组织和骨髓，单细胞凝胶电泳（SCGE）检测DNA降解程度，线性回归分析比较彗星参数HeadDNA％、尾长（TL）、Olive尾矩（TM）与PMI的关系。结果大鼠死后早期脑细胞、骨髓细胞核Head DNA％随着PMI逐渐下降的程度不同，20℃脑细胞核Head DNA％降解速率较快。与骨髓细胞相比，脑细胞核Head DNA％与PMI线性关系较好。与TL、TM相比，Head DNA％与PMI的线性关系较好。结论脑组织是利用SCGE检测DNA降解推断PMI的合适检材。Head DNA％较TL、TM推断PMI的价值更高。

大鼠死后肌肉组织电阻抗幅值和相位角变化推断死后间隔时间的研究

目的研究大鼠死后皮下肌肉组织电阻抗幅值和相位角的变化规律,探讨生物电阻抗技术推断中晚期PM I的价值。方法利用四电极阻抗测量系统测量20只大鼠死后4种不同环境温度皮下肌肉组织电阻抗幅值和相位角,并用Excel及MATLAB对所得的离散阻抗数据进行处理。结果(1)所有死亡大鼠皮下肌肉组织的电阻抗幅值都呈现出相似的先升后降的变化趋势,且中、长期的下降部分有一定的线性变化趋势。电阻抗下降段斜率与温度的变化呈正相关关系,且在不同环境温度时,下降段斜率与PM I的相关性都较高,均大于0.97。因此,有可能利用这一线性关系推断中、晚期PM I。(2)所有死亡大鼠皮下肌肉组织的电阻抗相位角没有相似的变化规律,其变化杂乱无章。结论如果找出电阻抗幅值下降段起点、峰值、斜率这3者之间的确定关系,就可利用下降段的线性关系为推断中晚期PM I提供一定的判断依据。