HBV PreS2+S/IFN-α融合基因真核表达载体的构建及其表达

构建含HBVPrdS2 +S和IFN α融合基因的真核表达载体pcDNA3.1.S2S/IFN α并在真核细胞中进行表达。应用重叠延伸剪切技术 (splicingbyoverlappingextension ,简称SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段S2S/IFN α ,回收后直接克隆到 pcDNA3.1V5 /HisTOPOTA克隆载体 ,得到真核重组载体pcDNA3.1.S2S/IFN α。然后用脂质体法转染VeroE6细胞。对重组载体进行了限制性酶切及PCR鉴定 ,证明连接正确 ;经间接免疫荧光检测证实该重组载体能在真核细胞中表达插入的外源性基因编码的融合蛋白。真核表达载体pcDNA3.1.S2S/IFN α的成功构建及在VeroE6细胞中的有效表达 。

Preβ-1高密度脂蛋白与心血管疾病关系的研究进展

动脉粥样硬化是心血管疾病重要的病理生理基础,延缓和防治动脉粥样硬化对于减少和降低心血管疾病的发病率及病死率具有重要意义。高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL)通过参与介导胆固醇逆向转运(reverse cholesterol transport,RCT)在抗动脉粥样硬化的形成和进展中发挥了重要作用。Preβ-1高密度脂蛋白(prebeta-1 high density lipoprotein,Preβ-1HDL)作为HDL的一种亚类,是外周细胞移出胆固醇的最初接受体,直接参与了RCT的起始步骤,并在随后的胆固醇酯化及转运中起着重要作用。本文就Preβ-1HDL的结构、代谢及其与心血管疾病的关系作一简要综述。

全国名中医尤昭玲基于“以胞宫为中心的五脏一体观”诊治绝经前后诸证

绝经前后诸证对应西医学围绝经期综合征,或多种因素致卵巢功能衰竭而出现围绝经期综合征临床表现的患者。全国名中医尤昭玲基于《黄帝内经》“五脏一体观”,提出“以胞宫为中心的五脏一体观”,认为“五脏失调”为绝经前后诸证的主要病机,以“调和五脏”为治则,创制经验方更年方。以胞宫为中心,顺应胞宫藏泻有序的特点,绝经前分经期、排卵前、排卵后辨证施以耳穴辅助治疗,绝经后顺应胞宫藏而不泻的生理特性,辅以耳穴静养阴阳。分年龄配合药膳养巢煲或养生安神煲,临证中收获佳效。

ASGPR与HBV preS1蛋白之间相互作用的验证

目的验证去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)与乙肝病毒前S1蛋白(HBV preS1蛋白)之间的相互作用,确认ASGPR作为乙肝病毒肝细胞膜受体在介导乙肝病毒感染的分子机制中的作用。方法分别用哺乳动物双杂交及体外免疫共沉淀技术验证ASGPR与HBV preS1蛋白之间的相互作用,操作方法参照试剂盒说明书进行。结果哺乳动物双杂交实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在细胞环境中具有相互作用;免疫共沉淀实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在非细胞环境中具有相互作用。结论 ASGPR可能是介导HBV入侵的肝细胞膜受体之一。

HBcAg基因和PreS1(1～65)肽基因真核重组载体的构建和鉴定

目的：构建并鉴定包含人乙型肝炎病毒（HBV）HBcAg基因和PreS1（1～65）肽基因的真核重组载体。方法：采用PCR法扩增HBcAg基因，并通过基因突变在79～80位氨基酸处生成一个NheⅠ酶切位点，然后将这段基因连接到真核表达载体pIRES2-EGFP启动子下游的EcoRⅠ和BamHⅠ之间。同时PCR扩增PreS1第1～65氨基酸基因，并在其两端分别引入NheⅠ酶切位点，通过酶切、连接，将这段基因插入到HBcAg基因的NheⅠ酶切位点上。将构建的重组载体pIREScS1转化大肠杆菌DH5α，分别用上述内切酶双酶切及DNA测序鉴定重组质粒。结果：酶切鉴定示，插入片段大小均与预计相符。测序结果与已知序列结果一致。结论：成功构建了HBcAg基因和PreS1（1～65）肽基因的真核重组载体。

诺雷德联合瑞宁得治疗绝经前和围绝经期晚期乳腺癌临床疗效观察

目的:观察诺雷德联合瑞宁得治疗绝经前和围绝经期晚期ER(+)和(或)PR(+)乳腺癌的内分泌治疗疗效和不良反应。方法:36例绝经前和围绝经期晚期乳腺癌患者,皮下注射诺雷德3.6mg,每28日1次,激素水平达绝经期后同时服用瑞宁得,每日1次,每次1mg。结果:完全缓解(CR)1例,部分缓解(PR)10例,稳定(SD)15例,进展(PD)10例,总有效率30.6%,临床获益率为58.3%。ER和PR同时阳性表达的及组织学分级Ⅰ级的有效率高,P<0.05;与HER-2表达无关,P>0.05;胸壁局部复发和骨转移治疗疗效优于内脏等其他转移,P<0.05。激素达绝经水平的诺雷德应用中位次数为3次。不良反应包括潮热、多汗、关节痛、乏力等,可耐受。结论:诺雷德联合瑞宁得治疗疗效肯定,不良反应轻微,是绝经前和围绝经期晚期乳腺癌内分泌治疗较好的选择。

8-氯腺苷对生长因子诱导的视网膜色素上皮细胞增殖抑制作用的研究

目的探讨８氯腺苷（８ｃｈｌｏｒｏａｄｅｎｏｓｉｎｅ，８ＣＬＡ）对生长因子诱导的视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞增殖的抑制作用。方法通过ＲＰＥ细胞培养，采用３ＨＴｄＲ掺入测定８ＣＬＡ对肿瘤坏死因子α（ｔｕｍｏｒｎｅｃｒｏｓｉｓｆａｃｔｏｒ，ＴＮＦα）、白细胞介素１β（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ，ＩＬ１β）和碱性成纤维细胞生长因子（ｂａｓｉｃｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ｂＦＧＦ）诱导的ＲＰＥ细胞ＤＮＡ合成的抑制作用。结果三种因子单独使用均可使ＲＰＥ细胞３ＨＴｄＲ掺入每分钟计数（ｃｏｕｎｔｐｅｒｍｉｎｕｔｅ，ＣＰＭ）值明显增高（Ｐ＜０．０５），８ＣＬＡ在其终浓度为２～１６μｍｏｌ／Ｌ时可使三种因子刺激的ＲＰＥ细胞３ＨＴｄＲＣＰＭ值明显降低（Ｐ＜０．０５）。在ＴＮＦα、ＩＬ１β、ｂＦＧＦ和８ＣＬＡ组，分别于１６、８、２μｍｏｌ／Ｌ时，ＣＰＭ值与基础值相近（Ｐ＞０．０５）。结论８ＣＬＡ可抑制生长因子诱导的ＲＰＥ细胞增殖。

补肾活血方治疗早发性卵巢功能不全患者围绝经期症状的临床预测模型构建

目的构建补肾活血方治疗早发性卵巢功能不全(POI)患者围绝经期症状的临床预测模型。方法回顾性收集经补肾活血方治疗6个月的伴有围绝经期症状的POI患者临床资料,包括年龄、生育史(妊娠史、分娩史、流产史)、月经史(初潮年龄、月经周期、经期、经量)、婚姻状况、确诊年龄、病程、血清生殖内分泌指标[卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、催乳素(PRL)、孕酮(P)、睾酮(T)、抗苗勒管激素(AMH)]、超声检查相关指标[卵巢动脉收缩期血流峰值流速(PSV)、血流阻力指数(RI)]、临床症状等。运用改良库珀曼(Kupperman)评分将患者分为治疗有效组和无效组。采用最小绝对收缩选择算子(LASSO)回归分析筛选影响补肾活血方对POI患者围绝经期症状治疗结局的因素,并根据筛选结果构建多因素Logistic回归模型及筛选独立预测因子。通过Hosmer-Lemeshow检验评价模型拟合优度,并采用受试者工作特征(ROC)曲线下面积(AUC)、校准曲线、临床决策曲线(DCA)分别评价模型的区分度、校准度及临床影响。结果在接受补肾活血方治疗的204例伴有围绝经期症状的POI患者中,有效组152例,无效组52例。LASSO回归分析筛选出婚姻状况、病程、经期、FSH、LH、AMH、卵巢动脉PSV共7个变量为影响疗效的因素。通过多因素Logistic回归分析,初步判断病程(2.44±1.61)年、FSH水平25~40 U/L、AMH水平(0.85±0.28)ng/ml、卵巢动脉PSV[8.50(7.00,10.38)]cm/s、经期延长、经期缩短为补肾活血方治疗POI患者围绝经期症状的独立影响因素。构建出补肾活血方治疗POI患者围绝经期症状的临床预测模型,模型的AUC为0.78;DCA分析得到预测概率为60%时,则每100例患者接受治疗后,约有50人可获得较好疗效;校准曲线预测概率为30%~85%时,模型预测曲线与实际观测曲线较为接近。结论构建出的临床预测模型提示补肾活血方适合病程长、基础卵巢功能较好、经期紊乱的POI伴围绝经期症状患者。此模型有助于调整患者就医预期及区别优势人群,可为补肾活血方精准化治疗POI围绝经期症状提供思路。