Semi-Pre-HPLC与HPLC-MS联用的二维色谱分析系统对代谢相关脂肪性肝病肝线粒体中滇黄精药源成分的检测

目的检测代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)肝线粒体中滇黄精药源成分的分布情况。方法24只6周龄雄性SD大鼠采用随机数字表法分为正常组、模型组和滇黄精水提物组,每组8只。正常组以普通饲料喂养,其他组以高脂饲料喂养。建立模型同时滇黄精水提物组按照8 g/(kg·d)灌胃滇黄精水提物,正常组与模型组灌胃等体积的生理盐水,连续14周。最后一次给药1 h后,取各组大鼠肝组织,分离得到线粒体,采用Semi-Pre-HPLC联合HPLC-MS二维色谱分析系统分析各组肝线粒体药源成分。结果MAFLD大鼠肝线粒体中检测到10种药源成分,其中7种已报道脂代谢调节活性,分别为薯蓣皂苷元、薯蓣皂苷、菝葜皂苷元、Pratioside D1、异甘草素、β-谷甾醇、常春藤皂苷元。结论检测到的10种药源成分可能是滇黄精调节线粒体缓解MAFLD的主要活性物质。

柱前衍生-高效液相色谱法测定特殊医学用途奶粉中牛磺酸含量

建立以邻苯二甲醛为衍生试剂,柱前衍生-HPLC测定特殊医学用途奶粉中牛磺酸含量的方法。选用C18色谱柱进行产物分离,并对衍生试剂用量、流动相比例、流速、混合次数、衍生后等待时间等因素进行优化。结果表明衍生试剂用量30μL,流动相体积比20∶80,流速0.6 mL/min,混合6次,衍生完成后等待时间0 min时,衍生物的峰面积和峰形最优。在此实验条件下3种不同浓度牛磺酸标准品的精密度测定衍生物峰面积相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为0.08%~0.75%,精密度高。对两种特殊医学用途奶粉中牛磺酸含量进行检测,重复性实验测定RSD分别为0.67%和0.37%,重复性稳定;样品加标平均回收率分别为97.6%~104.5%和106.0%~110.3%,回收率好。该研究方法反应条件温和、操作性强,适用于特殊医学用途奶粉中牛磺酸含量的测定。

高效液相色谱法测定药物中的哌啶羧酸类化合物

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定药物中的哌啶羧酸类化合物(PADs)的通用方法。方法:采用2,4-二硝基氟苯(DNFB)作为衍生试剂,使用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,0.1%磷酸水和乙腈为流动相进行梯度洗脱,紫外检测器,外标法定量。结果:PADs在不同溶剂中,定量限~3倍限度浓度范围内线性关系均良好,r均大于0.999;定量限回收率均在85%~110%,且相对标准偏差(RSD)均小于4%,50%~200%限度浓度的回收率均在90%~108%,且RSD均小于3%;检测限均小于0.03μg/mL(相当于供试品溶液浓度的0.0075%),定量限均小于0.08μg/mL(相当于供试品溶液浓度的0.020%)。结论:该HPLC方法灵敏度高、通用性强、准确度高,可以作为测定药物中PADs的通用方法。

AQC柱前衍生高效液相色谱方法测定康复新液中游离氨基酸和总肽的含量

目的应用6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)柱前衍生化技术,建立康复新液中游离氨基酸和总肽的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法,并以总肽含量为指标对市售样品进行检测。方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(Kromasil 100-5 C18色谱柱);60%乙腈(A)-0.14 mol·L^(-1)三水合乙酸钠溶液,用磷酸调节pH值至5.0(B)为流动相,梯度洗脱;柱温:39℃;流速:1.0 mL·min^(-1),检测波长:248 nm。结果14种氨基酸均能达到良好的分离效果;门冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、组氨酸、甘氨酸、精氨酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和苯丙氨酸分别在2.0~99.7、3.4~168.5、2.8~139.6、4.0~201.4、4.8~238.1、6.7~336.9、3.3~167.5、9.7~487.3、4.1~202.5、4.4~221.6、5.4~270.5、3.3~166.8、4.8~240.8、4.7~236.6μg·mL^(-1)范围内呈现良好的线性关系(r=0.9995~1.0000);游离氨基酸的平均加样回收率(n=6)为86.8%~108.1%,RSD为2.8%~4.4%,总肽酸水解氨基酸的平均加样回收率(n=6)为83.2%~102.7%,RSD为0.1%~3.1%;仪器精密度、重复性、稳定性实验的RSD均小于5.0%。结论该方法与现行质量标准的紫外分光光度法比较,二者测定的总氨基酸含量结果基本一致,但前者的专属性、重现性更优;以具有生物活性的总肽为质控指标,针对性更强,可为康复新液的质量评价提供更科学、合理的方法。

柱前衍生高效液相荧光检测法测定复方氨基酸注射液中甲硫氨酸亚砜的含量

目的建立测定复方氨基酸注射液中甲硫氨酸亚砜质量分数的高效液相色谱法。方法采用柱前衍生HPLCFLD法,色谱柱为Agilent Poroshell 120 EC-C18柱(3.0 mm×100 mm,2.7μm)或效能相当的色谱柱,以乙酸钠四氢呋喃溶液为流动相A,乙酸钠溶液-乙腈-甲醇(体积比20∶40∶40)为流动相B,流速为1.0 mL/min,采用荧光检测器,激发波长为233 nm,发射波长为441 nm。结果甲硫氨酸亚砜质量浓度在0.02605~2.605μg/mL范围内线性关系良好(r=0.9996),检测限为1.3×10^(-3)ng,平均回收率为100.1%,RSD为0.3%。结论建立的方法操作简单、准确、灵敏度高,适用于复方氨基酸注射液中甲硫氨酸亚砜的测定。

前维生素D相对校正因子的研究及测定

目的:测定前维生素D相对校正因子,简化维生素D含量测定的计算方法。方法:通过对各国药品标准中维生素D含量计算方法的研究,采用HPLC法测定前维生素D相对校正因子,并对测定的影响因素进行了考察。结果:统计了国内7家实验室的前维生素D相对校正因子的测定结果,确定了254 nm和265 nm 2个波长下的前维生素D相对校正因子。结论:采用前维生素D相对校正因子法计算维生素D的总量,简化了实验步骤,避免了随机操作误差。该方法快速、准确,为进一步提高维生素D制剂标准奠定了基础。

柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定白酒中的甜蜜素

白酒中甜蜜素(化学名为环己基氨基磺酸钠)是我国食品安全监督抽检计划中的重点关注项目,生产企业亟需简单、经济、灵敏度高而且可靠的检测方法。本研究建立了柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定白酒中甜蜜素的方法。在酸性条件下,通过脱磺酸基反应将样品中的环己基氨基磺酸钠转化为氨基化合物,然后加入400 g/L的氢氧化钠溶液中和样品处理液,再加入邻苯二甲醛衍生试剂与样品溶液中的氨基化合物进行反应,产生具有荧光信号的吲哚取代衍生物。以反相C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相进行等度洗脱,荧光检测器检测,外标法定量。结果表明,甜蜜素在0.1~2.0 mg/L范围内呈良好的线性关系,其相关系数(r^(2))大于0.999。基于白酒样品,在0.1~1.0 mg/kg含量范围内进行3个浓度水平的加标回收试验(n=6),平均回收率为90.7%~100.9%,相对标准偏差为3.5%~5.6%,方法的检出限为0.03 mg/kg,定量限为0.10 mg/kg。应用本方法对市售9种白酒样品进行检测,结果与GB 5009.97-2016(第三法)液相色谱-串联质谱法所得结果一致。本方法具有成本低、灵敏度高、专属性强、定量结果准确的特点,适用于大批量白酒中甜蜜素的定量检测,可为生产企业或相关机构进行白酒中甜蜜素的日常监测提供有力的技术支持。

制备液相色谱法在辅酶Q10分离纯化中的应用研究

目的 :旨在探究制备液相色谱法在辅酶Q10(Coenzyme Q10,简称CoQ10)的分离纯化过程中的应用,以提高其纯度和产率,为辅酶Q10的工业化生产提供新的思路和技术支持。方法 :我们采用了一种新颖的技术方法,旨在除去5-脱甲氧基辅酶Q10杂质,从而改善CoQ10的质量。首先,我们准备了辅酶Q10的混合样品,包括目标产物和杂质。接下来,我们运用液相色谱法,利用某特定参数,如流速、柱温和检测波长,以分离目标产物和杂质。该方法的关键在于对色谱条件的优化,以确保高效、精确地分离出CoQ10。结果 :实验结果表明,采用液相色谱法成功实现了对辅酶Q10的分离纯化。通过优化色谱条件,我们有效地去除了5-脱甲氧基辅酶Q10杂质,提高了CoQ10的纯度。同时,该方法也显著提高了CoQ10的产率,使其更具商业化价值。结论 :本研究验证了制备液相色谱法在辅酶Q10生产中的可行性和效果。该方法为提高CoQ10的质量和产量提供了可行途径,并为其工业化生产提供了新的思路。因此,液相色谱法可成为辅酶Q10分离纯化过程中的有力工具,有望推动辅酶Q10的广泛应用和市场推广。

制备型高效液相色谱法制备纯化3种辣椒素单体

利用制备型反相高效液相色谱法从辣椒素类物质中制备了3种辣椒素单体。在PRC-ODS色谱柱(250mm×21.5mm,13μm)上,以甲醇-水(体积比为70∶30)为流动相,流速为15mL/min,采用等度洗脱方式,从80%的辣椒素类物质中制备了3种辣椒素单体。经核磁共振氢谱(1H NMR)及电子轰击离子源质谱(EI-MS)分析,确认它们分别为降二氢辣椒素、辣椒素和二氢辣椒素,收率分别为60.1%,58.9%和72.3%。高效液相色谱分析表明所制备的3种化合物的纯度分别达到了98.12%,99.93%及100.7%。

制备型高效液相色谱法从积雪草提取物中分离纯化积雪草甙和羟基积雪草甙对照品

积雪草甙和羟基积雪草甙是积雪草及其相关制品质量控制的两个指标成分,本研究利用制备型高效液相色谱从积雪草提取物中同时分离纯化得到这两个成分。对制备色谱的流动相组成、流速、进样量和检测波长等制备参数进行了优化。采用的色谱柱为C18柱(50mm×200mm,5μm);流动相为甲醇-水(体积比为60∶40),流速100mL/min;二极管阵列检测器在220nm检测;进样体积为1.5mL。在20min的运行时间内,积雪草甙和羟基积雪草甙与干扰成分得到很好的分离,产品纯度达到98%以上。此方法具有快速高效、产品纯度高的特点,可以用于制备积雪草甙和羟基积雪草甙对照品。

柱前衍生高效液相色谱法对动物组织中胶原蛋白的测定

动物组织中的胶原蛋白经酸水解后生成包括羟脯氨酸在内的氨基酸混合物,用邻苯二甲醛（OPA）与其中的一级氨基酸衍生,再用9-芴基甲氧基羰酰氯（FMOC）与其中的羟脯氨酸衍生,用反相高效液相色谱法测定羟脯氨酸含量。羟脯氨酸是胶原蛋白的特异性氨基酸且含量稳定,因而可通过样品中羟脯氨酸的含量计算胶原蛋白含量。在0.01-50 mg.L^-1范围内,羟脯氨酸的峰面积和质量浓度之间的相关系数为0.9993,保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为0.30%和2.9%。该法选用FMOC与氨基酸衍生产物的特征波长检测,能够完全屏蔽一级氨基酸衍生物的干扰,可快速、准确、高效地测定羟脯氨酸及胶原蛋白的含量。

高效液相色谱法测定生物胺衍生条件的优化研究

利用荧光检测器(FLD),采用柱前衍生高效液相色谱法(HPLC)对组胺(HIS)、色胺(TRP)、2-苯乙胺(2-PHE)、腐胺(PUT)、尸胺(CAD)、酪胺(TYR)、亚精胺(SPD)和精胺(SPM)8种生物胺(BA)进行测定分析。通过探究丹酰氯(Dns-Cl)质量浓度、反应体系的pH、衍生时间及衍生温度对生物胺衍生反应的影响,确定最优的衍生条件。结果显示,当Dns-Cl的质量浓度为BA质量浓度的10倍、pH 11.0、40℃下避光反应45 min,所有BA均能有效分离。BA的相对标准偏差(RSD)在3%以内,能够满足分析要求。

高效液相色谱法测定金钱菇多糖的单糖组成

采用高效液相色谱法,测定金钱菇多糖的单糖组成。用超声辅助提取金钱菇多糖,通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑酮(PMP)衍生水解后的单糖,高效液相色谱法检测衍生物。结果表明:金钱菇多糖由甘露糖(Man)、核糖(Rib)、鼠李糖(Rha)、葡萄糖(Glc)、半乳糖(Gal)、木糖(Xyl)组成,其摩尔为1.00∶0.90∶0.91∶28.03∶1.58∶0.11。该方法快速、简便、重现性好,可用于测定金钱菇多糖的单糖组成。

山楂叶提取物中牡荆素、金丝桃苷、异槲皮苷对照品的制备

采用高速逆流色谱结合半制备液相色谱技术快速分离山楂叶中低含量的牡荆素、金丝桃苷、异槲皮苷单体。以氯仿-甲醇-水-正丁醇(4∶3∶2∶1.5,V/V)为溶剂系统,流速为5.0 m L/min,转速为850 r/min,检测波长为254 nm,从山楂叶黄酮提取物中富集得到含牡荆素、金丝桃苷、异槲皮苷3种化合物的混合组分,经半制备液相进行二次分离纯化,得到纯度大于98%的牡荆素、金丝桃苷、异槲皮苷单体。研究结果表明,该技术对山楂叶中低含量黄酮类化合物的分离快速、高效,且纯度高。

高速逆流色谱结合制备液相色谱分离纯化桂枝中化学成分

本文首次采用高速逆流色谱结合高效液相色谱的方法对桂枝正丁醇相进行分离纯化。首先,以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水(8∶2∶6∶4,v/v)为高速逆流色谱溶剂系统,将桂枝正丁醇萃取相分为两个馏分,然后结合制备高效液相,共分离得到4个高纯度化合物。通过核磁共振波谱鉴定其化学结构,分别为香豆素(1)、反式-邻甲氧基桂皮酸(2)、桂皮酸(3)、反式-桂皮醛(4),这四种化合物纯度经高效液相检测均大于95%。该方法简便、快速、节省溶剂,可以对桂枝正丁醇相进行快速有效的分离纯化,具有较好的实用价值,为桂枝资源的进一步开发应用提供了技术和物质支持。

应用单磺酰氯柱前衍生法测定食品中的牛磺酸

提出柱前衍生高效液相色谱法测定饮料中的牛磺酸。在碱性条件下，用单磺酰氯作为衍生化试剂，以乙腈—醋酸钠缓冲溶液（pH=7.2）为流动相，在290nm处进行紫外检测。

高效液相色谱法检测猪肉中盐酸克伦特罗的前处理方法

通过优化样品前处理方法和高效液相的检测条件,建立快速简便测定猪肉组织中盐酸克伦特罗的高效液相色谱法。结果表明,优化后的样品前处理方法只需提取、蛋白质沉淀两个过程,且采用C18色谱柱,流动相乙腈∶0.02 mol/L乙酸铵溶液（含0.1%甲酸）=25∶75,流速1.0 m L/min,进样量20μL,检测波长243 nm,可以获得良好的色谱峰,检测限为0.025 mg/kg,样品加标回收率达88.55%-94.03%,精密度RDS〈2%。该方法能达到准确、快速、低成本、简便的要求,适用于猪肉组织中盐酸克伦特罗的快速检测。

HPLC法检测米曲霉降解体系中氯氰菊酯前处理方法的研究

针对霉菌降解体系中氯氰菊酯HPLC检测结果重复性差的问题,系统研究了HPLC法检测米曲霉降解体系中氯氰菊酯的前处理方法。结果表明,采取培养液全量取样方式可以解决降解体系中氯氰菊酯分散或分布不均的问题;超声辅助乙腈提取法可使菌体内蓄积或菌体表面吸附的氯氰菊酯得到有效释放。HPLC法对经前处理后降解体系中氯氰菊酯含量进行检测,具有精密度高、重复性和稳定性好、加标回收率高的特点。该方法的建立为微生物降解体系中拟除虫菊酯类农药的准确检测提供了方法参考。

柱前衍生化RP-HPLC测定芜菁子中的12种游离氨基酸

目的采用柱前衍生化PR-HPLC测定芜菁子中的游离氨基酸。探讨芜菁子的药用价值,挖掘新疆的芜菁子资源。方法采用水中超声提取异硫氰酸苯酯柱前衍生化后,用HPLC法测定芜菁子中的氨基酸。结果芜菁子中含有苏氨酸、缬氨酸、脯氨酸、蛋氨酸、甘氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸、丙氨酸、胱氨酸、色氨酸、异亮氨酸等12种游离氨基酸,其中人体必须氨基酸7种,约占总游离氨基酸的65.7%,12种氨基酸在45 min内可很好地分离,平均回收率为92.7%~98.2%。结论所建方法不需专门的氨基酸分析仪,操作简便、灵敏度高、准确可靠。芜菁子中氨基酸的种类齐全,含量丰富,具开发价值。

环境样品阿特拉津及降解产物分析方法进展

阿特拉津是一种世界范围广泛使用的除草剂。文章介绍了环境样品中阿特拉津及其降解产物分析的前处理技术和分析方法的研究进展,并为今后的研究方向提出了建议。