Fast Evaluation of Oxidative DNA Damage by Liquid Chromatography-Electrospray Tandem Mass Spectrometry Coupled With Precision-cut Rat Liver Slices

Objective To establish a fast and sensitive method for the detection of 8-hydroxy-2’-deoxyguanosine （8-OHdG） in precision-cut rat liver slices by HPLC-MS/MS and to investigate isoniazid （INH） -induced oxidative DNA damage. Methods Precision-cut liver slices （300 μm） were prepared from male rats, and incubated with INH （0.018 mol/L） for 2 h after 1 h preincubation. DNA in the slices was extracted and digested into free nucleosides at 37℃ . The samples were injected into HPLC-MS/MS after the proteins were removed. The level of oxidative DNA damage was estimated using the ratio of 8-OHdG to deoxyguanosine （dG）. Results The limit of detection of 8-OHdG was 1 ng/mL （S/N=3） and the intra-assay relative standard variation was 3.38% when one transition 284.3/168.4 was used as a quantifier and another two transitions 284.3/140.2, 306.1/190.2 as qualifiers. 8-OHdG and dG were well separated, as indicated by elution at 10.02 and 7.37 min, respectively. INH significantly increased the ratio of 8-OHdG to dG in rat liver slices （P〈0.05）. Conclusion 8-OHdG in precision-cut liver slices could be sensitively determined by HPLC-MS/MS. HPLC-MS/MS coupled with precision-cut tissue slices is a fast and reliable analytical technique to evaluate oxidative DNA damage of target tissues caused by procarcinogens and cytotoxins.

Application of Precision-Cut Rat Liver Slice to Study the Influence of Monocrotaline, Tussilago farfara Alkaloids on the Expression of Cytochrome P450 Enzymes

Precision-cut liver slice has been successfully used to study the mechanism of drug-induced hepatotoxicity, the prediction of liver toxicity, the discovery of early hepatic toxicity biomarker and the metabolism of drug in liver. We detected the expression of CYP3A4, CYP2B1 + CYP2B2 and CYP2E1 in precision-cut liver slice after co-cultured with monocrotaline or Tussilago farfara alkaloids to investigate the hepatotoxicity mechanism of those drugs. After co-culturing with monocrotaline or Tussilago farfara alkaloids for 6 hours, the expression of CYP3A4 in the microsome of precision-cut liver slices was detected by Western blot, and the expressions of CYP2B1 + CYP2B2 and CYP2E1 were detected by immunofluorescence. The results showed that monocrotaline induced the expression of CYP3A4 and CYP2B1 + CYP2B2, and Tussilago farfara alkaloids obviously up-regulated the expression of CYP2E1 and CYP3A4. Thus, we conclude that the up-regulation of CYP3A4, CYP2B1 + CYP2B2 and CYP2E1 may be one of the toxic mechanisms of liver injury of those drugs.

醋氨酚所致精密肝切片损伤模型的建立及CYP2E1的调节作用

目的:利用精密肝切片(PCLS)技术,建立醋氨酚所致肝切片损伤的体外模型,并探讨CYP2E1活性变化对肝损伤的调节作用,为研究和筛选肝保护药物提供实验依据。方法:利用振荡切片机制备PCLS,建立培养系统。将终浓度为500μmol/L的醋氨酚分别与切片共孵育0、2、4、6h,测定培养基和切片中的谷胱甘肽S-转移酶(GST)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。在体给予不同剂量(0.25、0.5、1.0g/kg)的CYP2E1诱导剂乙醇,每天一次,连续3d。末次给药8h后处死动物,取其肝脏制备PCLS,再与500μmol/L醋氨酚共同孵育6h,检测ALT和LDH漏出率。正常PCLS与不同浓度的二乙基二硫代氨基甲酸酯盐(DDTC,CYP2E1抑制剂)(5、10、20μmol/L)、500μmol/L醋氨酚共同孵育6h,检测ALT和LDH漏出率。结果:与常规培养组比较,醋氨酚孵育4、6h组的GST和LDH漏出率显著升高(P<0.01)。与醋氨酚模型对照组比较,乙醇中、大剂量组LDH漏出率和小、大剂量组ALT漏出率皆升高(P<0.01,P<0.05);DDTC各浓度组ALT漏出率则降低(P<0.05)。结论:PCLS与500μmol/L醋氨酚共孵育4h即能成功地建立体外肝切片损伤的模型。抑制CYP2E1活性可能对醋氨酚所致的肝损伤有保护作用,而上调CYP2E1活性则可能加重醋氨酚所致的肝损伤。

MSCT对肝硬化患者肝脏体积变化的评估

目的探讨16层螺旋CT测量肝硬化患者肝脏体积的变化规律。方法选择54例肝硬化患者作为研究组,Child-Pugh分级结果为:A级23例,B级18例,C级13例。对照组20例为无肝脏疾病且肝功能正常者,应用16层螺旋CT测量肝脏体积并与研究组进行比较。结果对照组与肝硬化组Child-Pugh分级B级、C级,肝硬化组Child-Pugh分级A级与B级、C级以及B级与C级之间肝脏体积差异均有统计学意义(P<0.05),对照组与肝硬化组Child-Pugh分级A级之间肝脏体积差异无统计学意义(P>0.05)。结论 MSCT对人体肝脏体积测量具有很好的一致性及可重复性;肝硬化患者肝脏的体积与疾病的严重程度相关。

多层CT灌注技术在鉴别肝肿瘤病变的临床价值

目的分析多层CT灌注技术对肝肿瘤病变鉴别的临床价值。方法以我院2013年5月-2015年5月就诊的40例肝脏疾病患者为研究对象,病理学检查证实良性病变22例,恶性病变18例,选择同期健康体检人员20例为正常对照组,均接受320排CT灌注扫描,比较各组肝脏组织CT灌注成像参数。结果肝囊肿各灌注参数均为0。肝血管瘤、肝癌患者与正常对照组在BF、MTT、HPI、HAP方面比较差异有统计学意义(P<0.05)。肝血管瘤BF、BV、PVP明显高于肝癌(P<0.05)。肝癌HAP上明显不均匀高灌注,部分坏死区低灌注,边缘明显比中心坏死区灌注高;PVP上明显不均匀低灌注,大部分病灶和周边肝实质间分界不明显。肝血管瘤HAP上边缘结节性强化区明显高灌注,早期无强化区低灌注;PVP上灌注区部分低灌注,早期无强化区低灌注。结论 320排CT灌注成像各参数对肝脏肿瘤血流状态反映,对肿瘤良恶性判断有重要作用。

多层螺旋CT在不同肝硬化分级评估中的应用

利用多层螺旋CT对不同肝功能分级的52例乙型肝炎后肝硬化患者、50例酒精性肝硬化患者及25例正常对照组受试者进行肝脏体积在体测量,并进行kappa检验和方差分析,结果显示多层螺旋CT在体肝脏体积测量具有很好的一致性及可重复性(P<0.01);乙型肝炎后肝硬化与酒精性肝硬化患者肝脏体积的总体变化趋势相同,都随着病情的进展逐渐缩小,Child-Pugh分级B级之间的乙肝后肝硬化与酒精性肝硬化组患者的肝脏体积差异达到统计学上显著性水平。

DSA三维重建技术结合多层螺旋电子计算机断层扫描用于肝癌介入术患者中的分析

目的:分析针对肝癌介入术患者采用DSA三维重建技术结合多层螺旋电子计算机断层扫描诊断体现出的应用价值。方法:选取2020年1月~2022年5月在本院行介入治疗的60例肝癌患者为研究对象,对患者实施DSA三维重建技术与多层螺旋电子计算机断层扫描检查,将DSA作为判定的金标准,观察术后病灶数量,比较DSA三维重建技术、DSA三维重建技术应用于肝癌介入术诊断,对于残留或复发病灶识别体现出的敏感度、准确度以及特异度。结果:DSA三维重建技术、多层螺旋电子计算机断层扫描联合检查残留病灶的敏感度为89.3%、准确性为96.2%,高于多层螺旋电子计算机断层扫描单一检查(77.9%、91.4%)和DSA三维重建技术单一检查(83.5%、95.9%),P<0.05;DSA三维重建技术、多层螺旋电子计算机断层扫描联合检查复发病灶的敏感度为88.6%、准确性为95.1%,高于多层螺旋电子计算机断层扫描单一检查(70.7%、91.4%)和DSA三维重建技术单一检查(74.2%、93.9%),P<0.05。结论:DSA三维重建技术联合多层螺旋电子计算机断层扫描检查应用于肝癌介入治疗的疗效评定可保证检出残留、复发病灶更高的可靠性,阳性病灶检出能力优于单一影像学检查。

何首乌肝毒性物质基础探索研究

通过观察何首乌中蒽醌类成分对Hep G2细胞的细胞毒作用,并通过精密肝切片技术对细胞毒成分进行验证,探讨何首乌致肝毒性的物质基础。运用MTT法检测何首乌中游离蒽醌、结合蒽醌及柰类共11个单体成分对Hep G2细胞的毒性。将有明确细胞毒的成分与大鼠肝切片共同培养6 h后制备肝组织匀浆,通过BCA法测定匀浆液中蛋白含量,连续监测法测定并计算每1μg蛋白中丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、γ-谷氨酰氨基转肽酶（GGT）和乳酸脱氢酶（LDH）的漏出率,以考察这些成分对肝组织的毒性作用。细胞试验结果显示,只有大黄酸、大黄素、大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷和大黄素甲醚-8-O-（6＇-O-乙酰基）-β-D-葡萄糖苷显示一定的细胞毒作用,其IC50分别为71.07,125.62,242.27,402.32μmol·L-1,而其他7个化合物的毒性很小。肝切片试验结果显示,大黄酸400μmol·L-1组能引起肝切片ALT,AST,LDH漏出率的显著升高（P〈0.01）,100μmol·L-1组能引起肝切片LDH漏出率的显著升高（P〈0.05）;随药物浓度增大,肝切片中蛋白含量显著下降（P〈0.05）,显示有一定的量毒关系。大黄素400μmol·L-1组可引起肝切片ALT,GGT,LDH漏出率的显著升高（P〈0.01）。大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷800μmol·L-1组能引起肝切片ALT,AST,LDH漏出率的显著升高（P〈0.01或P〈0.05）,200μmol·L-1组能引起肝切片LDH漏出率的显著升高（P〈0.05）;且随药物浓度的增大肝切片中ALT,AST,LDH漏出率呈升高趋势,蛋白含量呈下降趋势。此外,浓度为800μmol·L-1的大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷还可使肝切片MTT还原能力显著下降（P〈0.01）。结果提示,大黄酸、大黄素及大黄素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷只有在高浓度（≥400μmol·L-1）时才可能对肝组织产生一定的损害作用。但是,据文献报道这3个成分的体内暴露水平都很低,要达到毒性浓度（400μmol·L-1或800μmol·L-1）的暴露水平,转化为健康成人至少分别需要单次口服4 898,339,5 581 g的何首乌药材,这与何首乌的临床使用剂量（生首乌3~6 g,制首乌6~12 g）相差甚远,因此,＂蒽醌类成分是何首乌肝毒性成分＂这一说法是缺乏科学依据的。

64排螺旋CT多重扫描肝肿瘤的诊断分析

本研究以67例肝肿瘤患者为研究对象,采用64排螺旋CT平扫及多重扫描,并以原始数据进行多平面重建、最大密度投影和三维容积重建等后期处理,试图分析和探讨64排螺旋CT多重扫描技术及其后期图像处理技术在诊断肝肿瘤的临床应用中价值。研究结果显示CT多重扫描的检出率（95.52%）明显优于平扫检出率（71.64%）;在多平面重建、最大密度投影和三维容积重建三种处理技术中,动脉解剖识别方面三维容积重建技术效果最优（p〉0.05）,病灶血管显示方面多平面重建技术效果最优（p〉0.05）,血管连续性显示方面最大密度投影技术效果最优（p〉0.05）;而3种后期图像显示方式在血管形态方面效果均良好（p〉0.05））。本研究结果提示64排螺旋CT多重扫描技术可较准确的进行肝肿瘤诊断,结合不同后期图像处理重建技术可为肝肿瘤诊断定性,在临床诊断肝肿瘤具有重要价值。