中华蜜蜂和意大利蜜蜂蜂毒前溶血肽原蛋白cDNA的克隆与序列分析

分别从中华蜜蜂Apisceranacerana和意大利蜜蜂Apismellifera工蜂毒腺中抽提总RNA ,通过RT PCR方法扩增 ,各得到了蜂毒前溶血肽原蛋白的cDNA ,再将扩增产物克隆到pGEM Teasy载体上 ,进行测序和序列分析。结果表明 ,所扩增到的这两个片段长度均为 2 13bp ,均为编码蜂毒前溶血肽原的cDNA ,并分别推导出两者所编码的氨基酸序列。经序列比较 ,中华蜜蜂前溶血肽原与意大利蜜蜂、印度蜜蜂Apisceranaindica前溶血肽原的同源性都为 97%。所报道的中华蜜蜂蜂毒前溶血肽原的核苷酸序列的GenBank登录号为AF48790 7。

二种胡蜂前溶血肽原基因在昆虫杆状病毒系统中的表达

构建亚非马蜂和额斑黄胡蜂前溶血肽原基因的重组供体质粒pBacHT-PhPPM和pBacHT-VmPPM,转化到穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中,得重组穿梭载体Bacmid-PhPPM和Bacmid-VmPPM,再用Lipofectin介导其DNA转染粉纹夜蛾细胞系Tn-5B1-4,最后观察细胞表达时相动态.经ELISA法证实,胞内表达产物具有良好的抗原性,证明二种重组病毒Bacmid-PhPPM和Bacmid-VmPPM已在昆虫细胞中得到了表达.

中华蜜蜂前溶血肽原基因在Tn-5B1-4细胞中的表达

构建中华蜜蜂前溶血肽原基因的重组供体质粒pBacHT-GFPTAccPPM,将其转化进入穿梭载体Bacmid的受体菌DH10Bac中,得重组穿梭载体Bacmid-GFPTAccPPM,再用Lipofectin介导其DNA转染粉纹夜蛾细胞系Tn-5B1-4,最后观察细胞表达时相动态。经ELISA法和荧光显微镜观察证实,胞内表达产物既能发射易于检测的绿色荧光,又具有良好的抗原性,证明重组病毒Bacmid-GFPTAccPPM已在昆虫细胞中得到了表达。