安君宁对吗啡依赖大鼠脑内前脑啡肽原表达的影响

目的研究安君宁对雄性SD大鼠吗啡依赖相关脑区前脑啡肽原表达的影响。方法30只体质量180～220g的雄性SD大鼠,设对照并建立吗啡依赖模型后随机均衡分为5组:淀粉正常对照组,吗啡戒断并安君宁治疗12d、30d组,吗啡戒断并淀粉治疗12d、30d组。吗啡依赖模型的建立采用剂量递增10日法(5mg·kg-1·次-1～50mg·kg-1·次-1,2次/d,腹腔注射)。安君宁干预方法:灌胃1g·kg-1·次-1,2次/d;对照组灌等量的淀粉。各组大鼠按预定时间麻醉、灌注、留取脑组织。采用原位杂交技术测定腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(NAs)、前额皮质(PFC)前脑啡肽原(PENK)mRNA水平。结果安君宁干预组与干预对照组相比,VTA、NAs、PFC中PENKmRNA水平显著升高(P<0.05)。吗啡戒断12d,安君宁干预组VTA、NAs、PFC中PENKmRNA水平分别为(14.74±4.81)×10-2、(16.09±4.94)×10-2、(20.47±7.03)×10-2,而干预对照组分别为(9.74±0.87)×10-2、(5.94±0.91)×10-2、(10.87±3.96)×10-2;戒断30d,安君宁干预组分别为(17.46±8.27)×10-2、(25.73±8.24)×10-2、(26.58±6.29)×10-2,而干预对照组分别为(12.36±6.95)×10-2、(10.31±0.78)×10-2、(19.78±7.08)×102。结论安君宁能促进吗啡依赖大鼠依赖相关脑区前脑啡肽原表达的恢复。

传代培养PC12细胞的分泌特性及PENK基因表达的研究

目的观察PC12细胞传代培养中的生长情况,检测培养液中去甲肾上腺素(NE)和甲硫氨酸脑啡肽(M-EK)的分泌水平及细胞前脑啡肽(PENK)基因的表达情况,为细胞移植镇痛的研究提供实验依据。方法PC12细胞在DMEM+15%胎牛血清中培养,酶法消化传代;采用高效液相色谱-电化学检测法检测培养液中NE的浓度;采用放射免疫法检测培养液中M-EK的浓度;采用反转录PCR检测细胞PENK mRNA的表达。结果传代培养PC12细胞的基础分泌:NE为(465.8±78.5)pg/mL,M-EK为(4.3±0.66)pg/mL;PENK低水平表达。结论PC12细胞在传代培养过程中,可合成和分泌NE和M-EK,并可检测到PENK基因的表达,为细胞移植镇痛提供新的细胞来源。

不同间隔时间电针对佐剂性关节炎大鼠炎症局部前阿黑皮素和前脑啡肽原mRNA表达的影响

目的:观察不同间隔时间电针对佐剂性关节炎(AA)大鼠的镇痛效应,以探讨针刺镇痛的最佳间隔时间和作用机制。方法:将96只大鼠随机分为对照组、模型组和电针组,每组再分为3 h、6 h、12 h和24 h小组,以Freund’s完全佐剂造成AA大鼠模型,电针选取悬钟和昆仑穴,分别以3 h、6 h、12 h和24 h作为治疗间隔时间,连续治疗6 d,以痛阈、炎症局部前阿黑皮素(POMC)mRNA和前脑啡肽原(PENK)mRNA表达作为观察指标。结果:间隔24 h电针能显著提高AA大鼠的痛阈;不同间隔时间电针均能促进炎症局部POMC mRNA和PENK mRNA的表达。结论:间隔24 h电针可明显提高对AA大鼠的镇痛效应;不同间隔时间电针镇痛效应与促进炎症局部阿片肽基因表达有关。

NIH3T3细胞中前脑啡肽原基因的稳定表达

目的:利用重组逆转录病毒载体pLNCX2-pENK,研究pENK基因在NIH3T3细胞中是否能够稳定表达。方法:用pLNCX2-pENK转染病毒包装细胞PT67,其病毒上清液感染NIH3T3细胞,检测pENK基因是否整合入NIH3T3细胞基因组中并通过RT-PCR及放射免疫法检测基因表达情况。结果:病毒基因组整合到NIH3T3细胞基因组中,并检测到目的基因转录及蛋白表达。结论:用逆转录病毒载体能将pENK基因整合到靶细胞NIH3T3基因组中,且该基因能长期稳定表达,为慢性疼痛的进一步治疗奠定了基础。

表达载体pEGFP—C3一PENK的构建以及在NIH3T3细胞中的表达

目的：构建质粒pEGFP-C3-PENK,并观察其在真核细胞中表达的时效.方法：构建质粒pEGFP-C3-PENK;低浓度裸质粒、高浓度裸质粒、脂质体介导分别转染NIH3T3细胞,观察转染率、绿色荧光蛋白表达情况;放射免疫法和免疫细胞化学法检测脑啡肽的表达情况.结果：质粒pEGFP-C3-PENK成功构建;低浓度裸质粒转染率5%;高浓度裸质粒转染率8%,脂质体介导转染率为20%;转染5周后仍有绿色荧光蛋白表达.结论：成功构建质粒pEGFP-C3-PENK,可在NIH3T3细胞中表达超过5周.

吗啡依赖大鼠部分脑区前脑啡肽基因表达改变

目的 研究吗啡依赖大鼠部分脑区的前脑啡肽基因(PENK)转录水平的改变。方法 将24只雄性Sprague-Dawlay大鼠随机等分为吗啡组(iq·2次·d-1,剂量逐日递增,5-50mg·kg·次,共10d)及对照组(注射相同体积的生理盐水)。在末次注射后的3h及3d,每组各随机灌注处死6只,取脑组织并冰冻切片,留取含中脑腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(NAC)、中脑导水管灰质(PAG)、杏仁核(AMG)、海马CAl区(HIPCAl)的切片。利用原位杂交技术及图像分析技术检测各脑区吸光度A值(PENKmRNA)的水平。结果末次注射后3h,吗啡组大鼠5个被检脑区PENK mRNA值,均显著低于同期对照组;末次注射后3d,在除AMG以外的4个被检脑区PENK mRNA值仍显著低于同期对照组。结论慢性吗啡处理可使多个脑区PENK基因表达明显下调,从而参与吗啡依赖与戒断。

电针后不同时间佐剂性关节炎大鼠炎症局部阿片肽基因表达的变化

目的:从时效关系角度观察电针对佐剂性关节炎(AA)大鼠镇痛后效应随时间延续的变化规律,并探讨电针镇痛后效应的产生机制。方法:以Freunds完全佐剂造成AA大鼠模型,在电针治疗后1h、3h、6h、12h、24h和48h观测大鼠痛阈、炎症局部前阿黑皮素(POMC)和前脑啡肽(PENK)mRNA的表达。结果:电针治疗后1h、3h、6h、12h,大鼠的痛阈提高,炎症局部的POMC和PENKmRNA的表达增强。结论:电针对AA大鼠镇痛有明显的后效应,可延续12h以上,且后效应的产生与大鼠炎症局部的POMC和PENKmRNA表达增强有关。

地卓西平对吗啡依赖大鼠部分脑区前脑啡肽基因表达的影响

目的:研究谷氨酸受体拮抗剂地卓西平对吗啡依赖大鼠部分脑区前脑啡肽(PENK)基因转录水平的影响。方法:18只雄性Sprague-Dawley大鼠随机等分吗啡组、干预组及对照组,每组6只。吗啡组大鼠腹腔注射吗啡,起始剂量5mg/kg,2次/d,逐日递增5mg,至第10天为50mg/kg;干预组大鼠每次注射吗啡前30分钟腹腔注射地卓西平0.075mg/kg;对照组按平行对照原则注射同体积的生理盐水。末次注射后3h取脑并冰冻切片,留取中脑腹侧被盖区(VTA)、伏隔核(NAc)、中脑导水管灰质(PAG)、杏仁核(AMG)、海马CA1区(HIPCA1)的切片。利用原位杂交及图像分析技术检测各脑区PENKmRNA的水平(吸光度A值)。结果:与对照组相比,吗啡组大鼠各脑区A值均明显降低,干预组大鼠在除AMG外的其它被检脑区也明显降低;与吗啡组相比,干预组大鼠VTA、NAc、AMG、HIPCA1区A值升高。结论:吗啡依赖大鼠多个脑区PENK基因表达明显下调,合并使用地卓西平可在一定程度上拮抗PENK基因表达的下调。