蜂毒素对人胚肺成纤维细胞生长的抑制作用及其机制探讨

目的研究蜂毒素(melittin)对人胚肺成纤维细胞(MRC-5)生长的抑制作用及其机制。方法采用MTT法检测蜂毒素对MRC-5细胞的增殖抑制作用;流式细胞仪检测细胞周期;RT-PCR法检测细胞中Cyclin D1、CDK4及E2F-1mRNA的表达变化;Western blot法检测Cyclin D1、CDK4、p21及E2F-1蛋白表达。结果与对照组比较,蜂毒素处理组细胞增殖明显受到抑制,并呈剂量和时间依赖性(P<0.05);流式细胞仪检测结果发现,随着浓度的增大,G0/G1期细胞百分比逐渐上升,S期细胞百分比逐渐下降;同时Western blot结果提示蜂毒素(1,2,4 mg.L-1)可以明显降低Cyclin D1、CDK4及E2F-1表达,而上调p21表达。结论蜂毒素能抑制MRC-5细胞增殖,其机制可能与干扰该细胞G0/G1期相关基因的转录相关且抑制Cyclin D1/E2F信号转导。

许旺细胞源神经营养因子对大鼠肌卫星细胞体外活性的影响

目的应用细胞体外培养研究体系，探讨许旺细胞源神经营养因子与成肌干细胞一卫星细胞的作用关系。方法建立大鼠肌卫星细胞体外培养体系，制备含不同浓度的许旺细胞源神经营养因子培养基．动态观测在这些条件培养基作用下，肌卫星细胞的形态、MTT生长曲线和肌管形成率等指标的变化。结果肌卫星细胞生长能力反应在细胞增殖和分化两方面，浓度为200ng／mlSDNF可以促进卫星细胞增殖；浓度分别为50、100、200、400ng／mlSDNF时肌管形成较为突出，相对增殖作用来说，可能促分化功能更为典型。结论SDNF对肌卫星细胞增殖和分化有一定的调控作用，相对而言促分化作用更加明显。推测其在延缓失神经肌萎缩方面有一定的作用。

常温3D打印双相磷酸钙／聚乙烯醇复合支架的制备与体外成骨分化研究

目的探讨常温3D打印双相磷酸钙／聚乙烯醇骨组织工程支架的制备及其对骨髓基质干细胞（BMSCs）体外成骨分化的影响。方法将双相磷酸钙、聚乙烯醇溶液混匀，应用常温3D打印技术联合冷冻干燥技术制备双相磷酸钙／聚乙烯醇支架；应用注模成型法制备非打印支架。测定2种支架的表面微结构、孔隙率、弹性模量及亲水性。体外成骨实验分3组（n=3）：打印支架组、非打印支架组、空白对照组（无支架）。将BMSCs种植于支架培养7、14d，比较3组BMSCs的增殖情况、碱性磷酸酶活性及成骨相关基因的表达量。结果成功制备可控孔径、孔隙率的组织工程支架，支架孔隙率平均为59．6％±3．6％，弹性模量平均为（429．3±54．3）kPa。培养7、14d，打印支架组细胞的吸光度值（0．987±O．047、1．497±0．076）均显著高于非打印支架组细胞（0．767±0．063、1．181±O．098），非打印支架组细胞吸光度值又显著高于空白对照组细胞（0．532±O．046、0．895±0．062），差异均有统计学意义（P〈0．05）。培养7、14d，打印支架组与非打印支架组的碱性磷酸酶活性、成骨相关基因表达量比较差异均无统计学意义（P〉0．05）；但均显著高于空白对照组，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论常温3D打印技术联合冷冻干燥技术可制备孔径可控、连通性好的骨组织工程支架，体外与细胞共培养可促进细胞黏附、增殖及成骨分化。