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流式细胞术检测细胞周期影响因素及不同免疫细胞亚群周期分析
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作者 刘丹 张洁 +2 位作者 郭正阳 薛丽香 王羽晴 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1308-1316,共9页
细胞周期检测对于了解细胞增殖状态、细胞功能研究、药物筛选与评估等领域具有重要意义。流式细胞仪分析细胞周期是目前较为经典且广泛应用的检测手段之一。碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染是最常用的基于流式的检测细胞周期方法,然... 细胞周期检测对于了解细胞增殖状态、细胞功能研究、药物筛选与评估等领域具有重要意义。流式细胞仪分析细胞周期是目前较为经典且广泛应用的检测手段之一。碘化丙啶(propidium iodide,PI)单染是最常用的基于流式的检测细胞周期方法,然而,该方法在使用过程有诸多处理因素会对检测结果造成影响。此外,不同免疫细胞亚群在不同细胞周期阶段的分布差异也有助于研究免疫反应,了解疾病状态。本文以B16-F10细胞系为例,采用PI单染法,从固定条件、上机条件和软件分析3个角度,评价多种处理因素对细胞周期检测结果的影响。根据结果分析,在进行细胞周期检测时,建议取3×10^(6)个细胞,用300μL预冷PBS重悬细胞后逐滴滴入700μL预冷的无水乙醇,放置于4℃或-20℃过夜固定,低速收样,收样速率为每秒400~600颗粒数,去黏连后需收集至少3000个细胞。另外,通过EdU、PI双指标染色可以精确划分细胞周期,而细胞表面标志物染色联合Ki-67和PI染色法,可在不进行细胞分选的情况下进行不同免疫细胞亚群周期分析。本文较为系统的探讨了PI单染法检测细胞周期的影响因素,提供了标准的实验操作流程。建立了EdU联合PI检测细胞周期和针对不同免疫细胞亚群周期分析方案,拓宽了细胞周期检测方式。 展开更多
关键词 流式细胞术 细胞周期 碘化丙啶 免疫细胞亚群
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PI法和Annexin V/PI法检测蓝舌病毒HbC_3诱导人肝癌细胞的凋亡 被引量:3
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作者 汪艳 刘春新 +3 位作者 易有荣 崔冶建 朱珺 董长垣 《中国病毒学》 CSCD 2006年第3期253-256,共4页
利用流式细胞仪比较PI法和AnnexinV/PI法检测不同时间人肝癌细胞感染蓝舌病毒HbC3的凋亡率分析。结果:PI法在24h、36h、48h的凋亡率分别为10.8±3.05、21.7±6.28、28.3±10.6;AnnexinV/PI法的凋亡率分别为20.42±3.70... 利用流式细胞仪比较PI法和AnnexinV/PI法检测不同时间人肝癌细胞感染蓝舌病毒HbC3的凋亡率分析。结果:PI法在24h、36h、48h的凋亡率分别为10.8±3.05、21.7±6.28、28.3±10.6;AnnexinV/PI法的凋亡率分别为20.42±3.70、49.3±8.11、79.6±11.5。二种方法及不同时间感染病毒细胞的凋亡率之间有显著差异(P<0.01)。证明了AnnexinV/PI法能特异地、准确地检出早期凋亡的细胞、继发性坏死的细胞,BTV-HbC3诱导Hep-3B细胞凋亡是致肿瘤细胞病变、死亡的重要表现形式之一。 展开更多
关键词 propidium iodide(pi) ANNEXIN V/pi 凋亡 流式细胞仪
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基于FDA-PI双荧光复染法的茄病镰刀菌孢子活性检测 被引量:13
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作者 柴阿丽 韩云 +3 位作者 武军 石延霞 谢学文 李宝聚 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第14期2757-2766,共10页
【目的】茄病镰刀菌(Fusarium solani)孢子活性的检测是病害有效防控的基础。传统的孢子萌发法操作复杂,耗时费力,需要建立一种简便、快速的孢子活性检测方法。研究旨在建立基于荧光素二乙酸酯(fluorescein diacetate,FDA)-碘化丙啶(pro... 【目的】茄病镰刀菌(Fusarium solani)孢子活性的检测是病害有效防控的基础。传统的孢子萌发法操作复杂,耗时费力,需要建立一种简便、快速的孢子活性检测方法。研究旨在建立基于荧光素二乙酸酯(fluorescein diacetate,FDA)-碘化丙啶(propidium iodide,PI)双荧光复染法和流式细胞术(flow cytometry,FCM)的茄病镰刀菌孢子活性检测技术。【方法】通过测定FDA和PI的最佳染色时间和最佳工作浓度,建立茄病镰刀菌孢子活性检测的FDA-PI复染法。为评价该方法的准确性,一方面用FDA-PI法检测已知死孢子比例(0、25%、50%、75%、100%)的茄病镰刀菌样品,分析实测死亡率和理论死亡率的相关性;另一方面,经物理、化学和杀菌剂处理后,比较FDA-PI复染法和孢子萌发法的检测结果。【结果】确定了FDA和PI的最佳染色参数,其中PI的最佳工作浓度为3μg·m L-1,最佳染色时间为4℃处理10 min;FDA的最佳工作浓度为100μg·m L-1,最佳染色时间为25℃处理20 min。用该技术检测已知死孢子比例样品,各样品实测孢子死亡率和理论死亡率之间呈极显著正相关(R2=0.99,P<0.05)。经物理和化学处理后,FDA-PI复染法测得的孢子死亡率与孢子萌发法测得的孢子萌发率之间也呈显著负相关(R2=0.99,P<0.05)。经杀菌剂处理后,随着药剂浓度增高,对茄病镰刀菌杀灭效果增强。其中,氰胺化钙处理后,FDA-PI复染法和孢子萌发法检测孢子死亡率结果一致;而咯菌腈和多菌灵处理后,FDA-PI复染法检测孢子死亡率略低于孢子萌发法检测结果。【结论】建立了基于FDA-PI复染法和流式细胞术的茄病镰刀菌孢子活性检测技术,该技术可以替代传统的孢子萌发方法,大幅度缩减病原菌活性检测时间,提高检测效率,对植物病原真菌活性检测平台的建立具有重要的参考价值,将其应用于杀菌剂的筛选还需要进一步的深入研究。 展开更多
关键词 荧光素二乙酸酯 碘化丙啶 荧光染色 流式细胞术 茄病镰刀菌 活性分析
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FDA-PI双色荧光分光光度法检测细胞活性变化 被引量:12
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作者 祁爱群 钱凯先 +2 位作者 邵健忠 严庆丰 施沁清 《细胞生物学杂志》 CSCD 2000年第1期50-52,F003,共4页
本文建立了FDA-PI双色荧光分光光度法来推测细胞活性的变化,通过图谱初步地观察,进一步测定荧光测值,可以定性和定量地进行分析,此方法简便易行,直观,为测量细胞活性的变化提供一种良好的新方法。
关键词 细胞活性 FDA-pi双色荧光分光光度法 测定
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薏苡仁油诱导乳腺癌细胞系MCF-7细胞的凋亡及机理研究 被引量:29
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作者 曹国春 梁军 侯亚义 《实用临床医药杂志》 CAS 2007年第2期1-3,11,共4页
目的研究薏苡仁油对人乳腺癌细胞系MCF-7的凋亡诱导作用及机理。方法在体外设定不同浓度的薏苡仁油处理MCF-7细胞系的实验组,细胞培养24 h后,用MTT法测定其细胞活力;碘化丙啶(PI)染色后流式细胞仪检测其凋亡情况;罗丹明123(Rodamine 123... 目的研究薏苡仁油对人乳腺癌细胞系MCF-7的凋亡诱导作用及机理。方法在体外设定不同浓度的薏苡仁油处理MCF-7细胞系的实验组,细胞培养24 h后,用MTT法测定其细胞活力;碘化丙啶(PI)染色后流式细胞仪检测其凋亡情况;罗丹明123(Rodamine 123)标记后于酶标仪530 nm处测定其荧光强度值以检测线粒体膜电位情况。结果与对照组相比,随薏苡仁油浓度的上升,MCF-7细胞活力和增殖呈剂量依赖型的下降;流式细胞仪检测PI染色显示,各处理组的MCF-7细胞凋亡率随作用浓度的上升而增强,最高浓度组尤为明显;在高浓度组,罗丹明123荧光强度明显降低。这些结果表明薏苡仁油能抑制MCF7细胞的活力和增殖;诱导其凋亡;罗丹明荧光强度的减少,说明MCF-7线粒体膜电位有倒塌和去极化的情况发生,提示MCF-7细胞的凋亡与线粒体有关。结论薏苡仁油可明显促进MCF-7细胞的凋亡,其凋亡可能与线粒体破坏有关。 展开更多
关键词 薏苡仁油 MCF-7细胞 MTT 碘化丙啶(pi) 罗丹明123 膜电位
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小鼠脾淋巴细胞对人HepG2细胞杀伤活性检测方法的建立
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作者 陈丽玲 钟友宝 +4 位作者 刘漩 陈来 袁可望 黄丽婷 李姗姗 《实验动物与比较医学》 CAS 2019年第3期220-225,共6页
目的在建立既能保留人肿瘤生物学特性的,且免疫功能相对正常的人肿瘤异种移植动物模型的过程中,为保证小鼠脾淋巴细胞对人肿瘤细胞杀伤作用的考察效率,摸索建立基于流式细胞术的评价小鼠脾淋巴细胞对人HepG2细胞杀伤活性的方法。方法用... 目的在建立既能保留人肿瘤生物学特性的,且免疫功能相对正常的人肿瘤异种移植动物模型的过程中,为保证小鼠脾淋巴细胞对人肿瘤细胞杀伤作用的考察效率,摸索建立基于流式细胞术的评价小鼠脾淋巴细胞对人HepG2细胞杀伤活性的方法。方法用羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记人HepG2细胞,利用无水乙醇模拟杀伤人HepG2细胞,用碘化丙啶(PI)染色,流式细胞仪检测,确定CFSE和PI的浓度及作用时间。以小鼠脾细胞为效应细胞,人HepG2细胞为靶细胞,从效靶作用时间和效靶比方面进行优化,确定试验方法的最佳条件。结果采用CFSE/PI双标记将细胞分为CFSE^+PI-、CFSE^+PI^+、CFSE-PI^+和CFSE-PI-4个组群,可有效区分活细胞和被杀伤细胞。CFSE标记靶细胞的浓度采用2.5μmol/mL,效靶作用时间为12 h,效靶比10∶1。结论建立了基于流式细胞术的评价小鼠脾淋巴细胞对人HepG2细胞杀伤活性的方法,该方法的建立可为评价动物脾淋巴细胞对异种细胞的杀伤作用提供参考。 展开更多
关键词 小鼠 脾淋巴细胞 人HepG2细胞 羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE) 碘化丙啶(pi) 细胞毒活性
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狗坐骨神经荧光素及辣根过氧化物酶逆行追踪实验研究
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作者 曹涌 成红兵 +1 位作者 张沛云 王晓冬 《南通医学院学报》 2000年第4期326-327,330,共3页
目的 :确定狗周围神经逆行示踪试验的最佳示踪剂及示踪时间。方法 :用快蓝 (FB)、碘化丙啶 (PI)及辣根过氧化物酶 (HRP)注射于正常狗坐骨神经 ,选择不同时间观察脊髓及相应脊神经背根神经节的神经元。结果 :14天时神经元胞体开始出现 FB... 目的 :确定狗周围神经逆行示踪试验的最佳示踪剂及示踪时间。方法 :用快蓝 (FB)、碘化丙啶 (PI)及辣根过氧化物酶 (HRP)注射于正常狗坐骨神经 ,选择不同时间观察脊髓及相应脊神经背根神经节的神经元。结果 :14天时神经元胞体开始出现 FB,随后荧光逐渐加强和阳性标记细胞逐渐增多 ;而 PI及HRP追踪组 ,仅少量胞体中出现很细的 HRP未能观察到 PI。结论 :狗的周围神经逆行示踪试验最好选择易溶解、激发波长较短的荧光素 ,并在体内存留的时间要长 ,以 FB较为合适。 展开更多
关键词 坐骨神经 辣根过氧化物酶 逆行追踪试验 荧光素
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α-三联噻吩对斜纹夜蛾SL细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响
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作者 王玉健 张志祥 +2 位作者 廖美德 张前锋 徐汉虹 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1601-1607,共7页
【目的】研究α-三联噻吩(α-T)对斜纹夜蛾(Spodoptera litura)SL细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响。【方法】通过Rhodamine123染色和流式细胞术(flow cytometry,FCM)研究α-T处理SL细胞24 h和48 h后细胞线粒体膜电位的变化,并通... 【目的】研究α-三联噻吩(α-T)对斜纹夜蛾(Spodoptera litura)SL细胞线粒体膜电位及细胞周期的影响。【方法】通过Rhodamine123染色和流式细胞术(flow cytometry,FCM)研究α-T处理SL细胞24 h和48 h后细胞线粒体膜电位的变化,并通过PI染色和FCM,测定α-T处理SL细胞24 h和48 h后细胞周期各时相百分率的变化。【结果】光活化后的α-T处理SL细胞24 h后,0.0625 μg·mL^-1浓度和0.1250 μg·mL^-1浓度处理组细胞线粒体膜电位的变化幅度不大,而0.5000 μg·mL-1浓度处理组细胞线粒体膜电位明显升高,48 h后高浓度处理组(1.0000 μg·mL^-1)导致线粒体膜电位明显去极化;处理24 h后,低浓度(0.0625 μg·mL^-1)处理组细胞被阻滞于S期,而高于此浓度的光照处理组细胞被阻滞于G2/M期,48 h后,浓度≤0.1250 μg·mL^-1的光照处理细胞被阻滞于G2/M期,而浓度>0.1250 μg·mL^-1的光照处理组细胞被阻滞于S期。【结论】SL细胞经α-T处理后,细胞处于一系列复杂的动态变化中。当细胞本身不能扭转ROS造成的氧化损伤时,细胞线粒体膜电位和细胞周期时相即出现较大幅度的变化,这种变化决定着细胞的受损程度和细胞的死亡途径。 展开更多
关键词 α-三联噻吩(α-T) 斜纹夜蛾(Spodoptera litura)SL细胞 线粒体膜电位 细胞周期 流式细胞术 Rhodamine123 碘化丙啶(pi)
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Applicability of differential fluorescein diacetate and propidium iodide fluorescence staining for monitoring algal growth and viability
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作者 Swati Yewalkar Tong Wu +6 位作者 David Kuan Heli Wang Di Li Andy Johnson Dusko Posarac Sheldon Duff Xiaotao T.Bi 《Waste Disposal and Sustainable Energy》 2019年第3期199-206,共8页
Microalgae can be cultivated for producing high-valued products through the production of enzymes to offset the cost of CO_(2) sequestration,providing financial incentives.The viability of algae in the photobioreactor... Microalgae can be cultivated for producing high-valued products through the production of enzymes to offset the cost of CO_(2) sequestration,providing financial incentives.The viability of algae in the photobioreactor needs to be monitored to ensure biologically active live cells.In this study,we explored a simple fluorometry method for differentiation of live and dead algal cells in photobioreactors by fluorescein diacetate(FDA)and propidium iodide(PI)fluorescence staining.FDA stains fluorescent green to the living cells while PI stains the dead cells,allowing the discrimination of live and dead cells.The method was evaluated using two green algae and two strains of cyanobacteria grown in shake flasks and a continuously stirred photobioreactor.The method was found applicable for Chlorella pyrenoidosa and Synechococcus 7002 but was not applicable for the cultures of Scenedesmus dimorphus and Synechococcus elongatus 7942.We conclude that FDA is a good stain for monitoring live algal cells in photobioreactors but its applicability to individual species of algae must be evaluated. 展开更多
关键词 Fluorescein diacetate(FDA) propidium iodide(pi) Live and dead algae Differential staining Continuous photobioreactor
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Correlation Analysis of the Results of Double Fluorescence(AO/PI) Staining and Clinical Outcomes 被引量:2
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作者 Yu-bao WANG Lei-wen ZHAO +3 位作者 Zu-qiong XIANG Xiu-zhuang ZHOU You-lun GUI Chang-hai HE 《Journal of Reproduction and Contraception》 CAS 2012年第2期111-118,共8页
Objective To estimate the predictive value of double fluorescence [acridine orange (AO)/propidium iodide (PI)] staining results for fertilization rate and clinical outcomes and analyze the correlation between th... Objective To estimate the predictive value of double fluorescence [acridine orange (AO)/propidium iodide (PI)] staining results for fertilization rate and clinical outcomes and analyze the correlation between the results of AO/P1 staining and sperm apoptosis. Methods A prospective study was carried out, 235 infertile couples remedied using traditional in vitro fertilization (IVF) were included. Semen collected from 235 patients were stained by fluorescence dye, AO and PL at the same time the spermatozoa apoptosis rate was calculated by using flow cytometry to detect the rate of Annexin V+/ PI- . The result of fluorescence was divided into 3 groups as green (G), yellow (Y) and red (R) according to the color of fluorescence. The correlation between the percent of the 3 colors and clinical outcomes and spermatozoa apoptosis rate was evaluated. Results Significant negative correlation was observed between the percentage of Y and fertilization rate (r= -0.42, P=0.04), no significant correlation was observed between the percentage of G, R and fertilization rate. The percentage of G, Y, R was not significantly different between pregnant patients and non-pregnant patients, respectiw,ly, while the percentage of Y was significant different between miscarriage patients and liveborn patients (r=0.6L P=0.01) and no significant difference exist in the percentage of G and R between liveborn patients and miscarriage patients. There was a significant positive correlation between the percentage of Y and the rate of Annexin V+/ PI (r=0.53, P=0.04), and no significant correlation was shown between the percentage of G, R and the rate of Annexin V+/ PI-.Conclusion The percentage of yellow group of double fluorescence (AO/PI) staining will affect the fertilization rate and the miscarriage rate, and this group of spermatozoa may be connected with the spermatozoa apoptosis. 展开更多
关键词 acridine orange (AO) propidium iodide (pi SPERMATOZOA in vitro fertilization (1VF)
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汉逊酵母活性及活力荧光素二乙酸酯-碘化丙啶双荧光染色检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 王玢 徐世友 +2 位作者 杨俊杰 周晖国 雷清 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1347-1352,共6页
目的建立用于检测汉逊酵母活性和活力的荧光素二乙酸酯(carboxyfluorescein diacetate,CFDA)-碘化丙啶(propidium iodide,PI)双荧光染色法。方法通过单因素试验,优化CFDA的染色时间(5、10、20、40、60、120 min)、工作液浓度(50、100、... 目的建立用于检测汉逊酵母活性和活力的荧光素二乙酸酯(carboxyfluorescein diacetate,CFDA)-碘化丙啶(propidium iodide,PI)双荧光染色法。方法通过单因素试验,优化CFDA的染色时间(5、10、20、40、60、120 min)、工作液浓度(50、100、200、300μmol/L)及PI的染色时间(5、10、15、20、25 min)、工作液浓度(2、10、20、30μmol/L)。采用最适条件检测理论存活率为0、25%、50%、75%和100%的汉逊酵母样品,荧光显微镜下观察荧光信号,ImageJ软件分析灰度值;计数存活及死亡细胞个数,计算实际存活率和实际死亡率。同时分析实际灰度值、实际存活率及实际死亡率与相应理论值的相关性。采用建立的CFDA-PI双荧光染色法检测3批汉逊酵母培养物的活性及活力。结果CFDA和PI的最佳染色时间为60和5 min,最佳工作液浓度为200和2μmol/L。不同理论存活率汉逊酵母样品的实际灰度值、实际存活率及实际死亡率与相应理论值均具有显著相关性(R^(2)=0.9983~0.9992,P<0.05)。3批汉逊酵母培养物活性及活力3次检测值的CV分别为3.20%~4.03%和1.10%~2.27%。结论成功建立了用于检测汉逊酵母活性和活力的CFDA-PI双荧光染色法,可用于相关研究中汉逊酵母活性和活力的快速检测。 展开更多
关键词 汉逊酵母 荧光素二乙酸酯 碘化丙啶 荧光染色 活性 活力
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疫苗诱导的特异性细胞杀伤活性检测方法的建立 被引量:1
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作者 卫江波 徐然然 +6 位作者 付志浩 郑秀玉 饶春明 高凯 杜丽芳 王军志 沈心亮 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2012年第12期1680-1683,共4页
目的建立一种基于流式细胞术的评价疫苗诱导的特异性细胞杀伤活性的方法,以完善疫苗及基因治疗药物的评价方法。方法用羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(Carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)标记淋巴细胞,利用肿瘤坏... 目的建立一种基于流式细胞术的评价疫苗诱导的特异性细胞杀伤活性的方法,以完善疫苗及基因治疗药物的评价方法。方法用羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯(Carboxyfluorescein diacetate,succinimidyl ester,CFSE)标记淋巴细胞,利用肿瘤坏死因子(Tumor necrosis factor,TNFα)模拟杀伤淋巴细胞,用碘化丙啶(Propidium iodide,PI)染色,流式细胞仪检测,确定CFSE和PI的浓度及作用时间。利用已确知有较强细胞免疫作用的治疗性乙型肝炎疫苗免疫小鼠,分离特异性淋巴细胞并用特异性肽刺激,分离未免疫小鼠的淋巴细胞作为靶细胞,并用特异性抗原肽致敏,并从靶细胞的标记、效应细胞培养时间,效靶作用时间、效靶比几方面进行优化,确定试验方法的操作流程。结果采用CFSE/PI双标记能有效分离实验所需各组群,细胞分为CFSE+PI-、CFSE+PI+、CFSE-PI+、CFSE-PI-4个组群,可区分活细胞和凋亡细胞。CFSE标记靶细胞的时间为6 h;效应细胞培养时间为72 h;效靶作用时间为6 h;效靶比可使用100∶1和50∶1。结论建立了基于流式细胞术的评价疫苗诱导的特异性细胞杀伤活性的方法,该方法可有效和精确地评价CTL杀伤效应,完善了疫苗及基因治疗药物的评价方法。 展开更多
关键词 羧基荧光素二乙酸盐琥珀酰亚胺酯 碘化丙啶 流式细胞术 细胞毒杀伤作用
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