苏云金杆菌高毒力菌株4.0718的快速选育

从湖南省不同生态区域的旱作地、果园和稻田采集的 858份土样中 ,分离筛选出苏云金杆菌 30株。选取一株具典型苏云金杆菌菌落特征和较高杀虫毒力的菌株 70 1 2c为出发菌株 ,经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合诱变 ,显微涂片染色镜检 ,发现菌体的伴孢晶体的形状、大小、数量及芽孢与伴孢晶体的比例与杀虫效力密切相关。以这些特征为参考进行快速初筛和毒力生测复筛 ,筛选出一株高毒力突变杀虫菌株 4 0 71 8。该突变株杀虫毒力与原始菌株相比提高了 7 5倍 ,在 6、1 2和 2 4h内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达 2 0 %、97%和 1 0 0 %。此菌株的高效速效杀虫毒力经连续 1

两株苏云金芽胞杆菌晶体与芽胞形成过程的细胞学对比分析

苏云金芽胞杆菌(Bt)中绝大多数杀虫晶体蛋白(ICPs)的表达依赖于芽胞形成,为了从细胞水平研究晶体与芽胞形成之间的关系,本文选用Bt 4.0718与工程菌BtΔleuB为研究对象,利用FM4-64对不同生长阶段的菌体细胞染色,并用激光共聚焦扫描显微镜进行了对比观察和分析。结果显示,Bt 4.0718芽胞的发育依次经历了不对称隔膜和内吞形态学阶段后,能顺利进入下一个发育阶段,直至完成芽胞发育过程后母细胞凋亡裂解;而BtΔleuB细胞进入不对称隔膜期的时间明显延迟,且芽胞发育被阻滞于内吞阶段,伴胞晶体形成最早于不对称隔膜期可见,并且晶体体积继续增大直至细胞死亡。qRT-PCR结果显示,σE、spoIIR和spoIIGA的高水平转录是维持BtΔleuB细胞中ICPs正常表达的关键因素。本研究结果对进一步揭示晶体与芽胞形成之间的关系及构建性状优良Bt工程菌具有一定的参考价值。

引进俄罗斯苏云金芽孢杆菌菌株A1.2/92的发酵研究

介绍经研究确定引进的俄罗斯苏云金芽孢杆菌菌A1.2/92的发酵条件、生产方法和大量生产的Bt制品的活性测定技术。通过摇瓶培养,利用20L发酵罐和500L发酵罐发酵,建立了完善发酵条件和活性测定技术,获得了高活性的生物杀虫剂(Bt),供温室和田间应用。

苏云金芽胞杆菌spoⅢD基因缺失突变株的特点

【目的】构建苏云金芽胞杆菌spoⅢD基因缺失突变株,并研究其与出发菌株的表型及性质差异。【方法】采用基因同源重组技术敲除了苏云金芽胞杆菌HD-73菌株中的spoⅢD基因,构建了spoⅢD缺失突变株,测定生长曲线,并通过扫描电子显微镜观察,芽胞计数分析及SDS-PAGE蛋白电泳比较突变株与出发菌株的差异。构建遗传互补菌株,观察菌株性状的回复情况。【结果】通过温敏载体同源重组敲除技术获得了苏云金芽胞杆菌HD-73菌株spoⅢD基因缺失突变株,生长曲线测定表明,突变株较出发菌株在平稳期后期生长较缓和;扫描电子显微镜观察和芽胞计数分析显示,突变株基本丧失了形成芽胞的能力,但依然形成晶体。SDS-PAGE结果显示,在SSM培养基中,突变株对伴胞晶体蛋白的形成量影响并不显著;在营养较富集的Luria-Bertani培养基中,突变株中伴胞晶体蛋白的形成量较野生型和互补株明显降低。利用载体pHT315携带spoⅢD操纵子互补突变株,互补株恢复了产生晶体和芽胞的能力。【结论】本研究证明spoⅢD基因是苏云金芽胞杆菌芽胞形成所必需,同时与晶体蛋白的表达相关。

Bt伴孢晶体毒素对不同时期中华卵索线虫的毒力

采用不同浓度的10株Bt伴孢晶体蛋白分别作用于中华卵索线虫受精卵及各期幼虫,探讨该类Bt蛋白对多种农林害虫天敌中华卵索线虫的安全性。结果表明:S1-1、S1-4、S3-2、S3-3、S7-1、S7-6和S8-1等7个菌株同时表达cry1Ac和cry5基因,S1-8、S2-1和HD-1等3个菌株只表达cry1Ac基因。含Cry5蛋白的菌株对线虫卵表现出一定的杀灭毒性,其中S1-4菌株的毒力最强,LD50作用24、48和72h时分别为0.1503、0.1313和0.0182μg/mL。而Bt伴孢晶体蛋白对感染期幼线虫和寄生后期幼线虫无明显致死效应;经Bt处理的感染期幼线虫对棉铃虫的感染率及平均感染强度与对照组无显著性差异(P>0.05),寄生后期幼线虫能正常蜕皮和交配产卵。将含上述浓度Bt蛋白的棉花叶片喂食已感染线虫的棉铃虫,线虫能够正常发育并从宿主体内脱出。

含SLH的苏云金芽胞杆菌菌株的筛选

本实验通过采集河边、污水池边、草坪上和花坛中的土壤样本,利用平板划线法分离和纯化目标菌株,获得菌落形态类似于苏云金芽胞杆菌菌株。再通过相差镜检观察其是否形成透明的芽胞及致密的深色的伴胞晶体,以及利用SDS-PAGE检测晶体蛋白的表达来筛选苏云金芽胞杆菌。提取菌种的基因组DNA并进行PCR,扩增S-层蛋白特异性的保守SLH序列,获得的阳性菌株即为含SLH的苏云金芽胞杆菌,最后筛选到5株包含SLH的苏云金芽胞杆菌。