H_2O_2对PC12细胞par-4和NF-κBP65基因表达的影响

目的 探讨 H2 O2 对 PC12细胞前列腺细胞应答凋亡蛋白 - 4 ( prostate apoptosis response- 4 ,par- 4 )和核转录因子 - κBP6 5 ( NF- κBP6 5 )基因表达的影响。方法 用不同终浓度 H2 O2 ( 0～ 4 0 0 nm ol/ L)处理 PC12细胞 8h,或终浓度 2 0 0 nm ol/ L H2 O2 处理 PC12细胞不同时间 ( 0～ 8h) ,采用 RT- PCR检测 par- 4、NF- κBP6 5 m RNA表达变化 ,Western blot检测 Par- 4和 NF-κBP6 5蛋白表达的变化。结果 随 H2 O2 浓度从 10 0～ 4 0 0 nmol/ L增加 ,par- 4、NF-κBP6 5 m RNA表达和 Par- 4、NF-κBP6 5蛋白表达水平逐渐增加 ;2 0 0 nm ol/ L H2 O2 作用 PC12细胞 0～ 8h,par- 4 m RNA表达和 Par- 4蛋白表达 ,在 2～ 8h随时间延长表达增加 ;在 0～ 8h NF- κB P6 5 m RNA表达和 NF- κBP6 5蛋白表达无明显变化。结论 H2 O2 可时间、剂量依赖性的增加 par- 4 m RNA表达和 Par- 4蛋白表达 ;H2 O2 可剂量依赖性的增加NF-κBP6 5 m RNA表达和 NF-κBP6 5蛋白表达 ;NF-κBP6 5 m RNA表达和 NF-κBP6

β-淀粉样肽(25-35)对PC12细胞前列腺凋亡反应蛋白-4和bcl-2基因表达的影响

目的观察β-淀粉样肽(25—35)(β-amyloidpeptide25—35,Ap25-35)诱导PC12细胞凋亡及对前列腺凋亡反应蛋白-4(prostateapoptosisresponse-4,par-4)和bel-2基因表达的影响。方法采用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,RT—PCR检测par-4和bcl-2基因mRNA表达变化,Westernblot检测Par-4和Bcl-2蛋白表达变化。结果随Aβ25-35浓度的增加,PC12细胞存活率降低,荧光染色可见细胞核固缩、核碎裂,par-4mRNA及蛋白表达增加,bcl-2mRNA及蛋白表达降低。结论在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡过程中Par-4和Bcl-2蛋白分子可能起重要作用。

胶质细胞源性神经营养因子对新生大鼠窒息后纹状体中Par-4基因表达的影响及其相关信号转导机制

目的研究胶质细胞源性神经营养因子对新生大鼠窒息后纹状体中促凋亡基因Par4表达的影响及其相关信号转导机制。方法制备新生大鼠缺氧缺血性脑病的动物模型,侧脑室给予胶质细胞源性神经营养因子(0.1、1.0、5.0μg/μl)。Westernblot测定Par4蛋白表达水平。结果新生大鼠窒息后纹状体中Par4蛋白表达上调、(P<0.01)。胶质细胞源性神经营养因子呈剂量依赖性地抑制缺氧缺血诱导的Par4蛋白表达上调(P<0.01)。给予200μmol L的P42/P44MAPK活性阻断剂PD98059预处理,胶质细胞源性神经营养因子对Par4表达的抑制作用由43%下调至22%(P<0.01)。结论胶质细胞源性神经营养因子抑制新生大鼠窒息后纹状体中促凋亡基因Par4的表达,其机制可能与P42/P44MAPK的活化有关。

靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞中CD2相关蛋白表达的影响及意义

目的研究小RNA干扰靶向抑制Par-4基因表达对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)中CD2相关蛋白(CD2AP)表达的影响及意义。方法利用构建靶向抑制Par-4基因的SiRNA真核表达载体转染hBMSCs。采用实时荧光定量PCR检测Par-4基因的mRNA水平。采用谷氨酸诱导hBMSCs凋亡。采用流式细胞术检测hBMSCs凋亡百分率。Westernblot检测hBMSCsCD2AP蛋白表达量。应用SPSS10.0软件进行统计学分析。结果1.Par-4-SiRNA可下调hBMSCsPar-4-mRNA水平,抑制率为88%(P<0.01)。而非抑制的对照序列未见抑制作用(P>0.05)。2.流式细胞术检测结果显示,与正常对照组比较,谷氨酸加常规hBMSCs组凋亡百分率为(59.12±5.43)%(P<0.01)。而在Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组中,谷氨酸对hBMSCs的凋亡诱导作用被显著抑制,凋亡百分率显著下调为(39.49±5.01)%(P<0.01)。3.Par-4-SiRNA转染的Par-4-SiRNA-hBMSCs组,谷氨酸对hBMSCs中CD2AP的下调作用被显著抑制,CD2AP蛋白的表达量显著上升(P<0.01)。结论靶向抑制Par-4基因的表达能够拮抗谷氨酸诱导的hBMSCs凋亡及CD2AP表达的下调。

阿魏酸钠对过氧化氢诱导的PC12细胞凋亡保护作用的研究

目的探讨阿魏酸钠(sodium femlate,SF)对过氧化氢(hydrogen peroxide,H_2O_2)引起的PC12细胞凋亡保护作用的可能机制。方法在H_2O_2诱导PC12细胞凋亡模型的基础上,采用MTT比色分析检测细胞存活率,RT-PCR检测前列腺凋亡响应基因Par-4(prostate apoptosis response-4,Par-4)和核转录因子-κB p65(nuclear factor-kappaB,NF-KB)mRNA表达,Westem blot检测Par-4和NF-κBp65蛋白表达。结果不同剂量SF预处理1h可提高PC12细胞的存活率,降低Par-4和NF-κBp65的mRNA表达以及蛋白表达。结论SF可剂量依赖性地对抗H_2O_2的神经素毒性作用,其机制可能与凋亡基因Par-4表达有关,与NF-κB的关系尚需进一步探讨。