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LAMC2通过PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞增殖的研究

目的 探讨层粘连蛋白γ2(LAMC2)通过PI3K/Akt对胃癌细胞增殖的影响。方法 利用癌症基因组图谱(TCGA)及基因表达综合数据库(GEO)联合分析胃癌中与细胞增殖相关差异基因,根据差异倍数确定候选基因LAMC2。UALCAN及Kaplan-Meier plotter在线数据库分析LAMC2在胃癌中的表达及其与临床病理特征的关系,采用蛋白印迹(Western blot)法检测人胃癌细胞株(HGC-27、NCI-N87、SNU-1)中LAMC2的表达。构建LAMC2敲减胃癌细胞模型,Western blot检测LAMC2的表达,确定模型构建效果。将HGC-27及NCI-N87细胞分成空白对照(Control)组、阴性对照(si-NC)组及LAMC2敲减(si-LAMC2)组,5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine, EdU)及平板克隆实验分析细胞增殖及克隆形成能力,Western blot检测细胞增殖蛋白(CyclinD1、PCNA、c-Myc)表达及PI3K/Akt通路激活情况。结果 LAMC2是胃癌中与细胞增殖相关的差异倍数最大的差异基因,其在胃癌中的表达显著上调,与胃癌的分期、分级及生存等临床病理相关。LAMC2在人胃癌细胞(HGC-27、NCI-N87、SNU-1)中的表达均显著高于GES-1细胞(均P<0.01)。与si-NC组比较,si-LAMC2显著抑制HGC-27及NCI-N87细胞增殖,降低细胞克隆形成率(P<0.01),细胞增殖蛋白(CyclinD1、PCNA及c-Myc)表达均被显著降低(均P<0.01),PI3Kp85及Akt磷酸化水平均被显著下调(均P<0.01)。结论 LAMC2在胃癌中的表达上调,与胃癌的分期、分级及生存等临床病理相关,其可通过激活PI3K/Akt通路促进细胞增殖。

我国体育学期刊通讯(信)作者著录情况分析

根据通讯(信)作者的著录要求,即联系人、课题负责人、在读硕士或博士研究生的导师和具有高级职称,对北大核心收录的16个体育学期刊进行查阅,分析发现:(1)标注通讯(信)作者的项目标注率大部分在90%以上,结合项目标注率和通讯(信)作者的著录信息,可判断通讯(信)作者的著录整体符合要求;(2)期刊标注率达到100%,平均篇数标注率为58.0%,且所有期刊只标注1位通讯(信)作者;(3)只有《体育科学》和《中国体育科技》采用“*”对通讯(信)作者在作者署名处进行显著标注,其他期刊未标注;(4)有9个期刊使用“通信作者”,6个使用“通讯作者”,1个混合使用“通信作者”和“通讯作者”;(5)通讯(信)作者的著录信息各期刊之间缺乏共识,有10个期刊未标注通讯(信)作者的联系方式,年龄、学历、职称和导师类型的著录表现出一定的随意性。研究认为,我国体育学期刊通讯(信)作者著录的主要问题在于著录格式的不规范、不统一,建议在继续确保通讯(信)作者著录要求的同时,期刊管理部门和期刊协会对通讯(信)作者的具体称谓、标注形式和著录格式应进行标准化和规范化统一。

基于波段选择的烟草病害检测模型

烟草是我国重要的经济作物,税收的重要来源,为国家的经济发展做出了巨大贡献,然而,烟草病害严重影响烟叶产量与品质。采用光谱分析技术对烟草病害进行早期防治具有非常重要的现实意义。以接种烟草花叶病毒(TMV)与马铃薯Y病毒(PVY)的烟草为研究对象,分别采集室内与室外培养的染病烟草叶片高光谱数据。为实现对烟草病害的精准识别,每隔两天对两种染病烟草进行光谱数据采集,将每种病害数据详细地分成五个严重度等级,最终获得1697个在350~2500nm波段范围内的光谱数据。为对烟草高光谱数据进行有效利用,以支持向量机(SVM)为基础,结合快速近邻波段选择算法(FNGBS)与归一化匹配滤波(NMFW),提出一种聚类与排序相结合的波段选择算法(FNG-NMFW)。FNG-NMFW首先采用FNGBS算法对烟草光谱进行精细分组,再采用NMFW算法对各组波段进行排序以选择特征光谱,实现烟草光谱特征提取与降维。在波段选择的基础上,采用SVM对烟草特征光谱进行分类,最终实现高精度烟草病害检测。研究结果显示:该模型性能稳定,在样本数量较少情况下,即可实现TMV与PVY两种病害的高精度识别。对于TMV1与TMV3,该算法可以获得精度优于94%的检测结果,对于PVY1与PVY3,该算法精度接近90%,表明该算法可有效完成两种病害早期的识别与预防工作。与采用全波段光谱数据进行病害检测的模型相比,FNG-NMFW模型优势明显,烟草病害检测结果总体精度达94.46%,精度提高约1.5%,检测时间由12.9s缩短为1.1s。

柱花草种质植物学特征比较分析

为利用植物形态学研究柱花草种质资源的遗传多样性,筛选优良柱花草种质,笔者对48份柱花草种质的植物学特征进行了观测比较并进行了聚类分析。结果表明48份种质(品种)中有3份是半灌木,2份种质属二年生草本,其余42份属多年生草本植物;绝大多数(35份)种质茎的生长习性是直立型或斜升型,只有5种是匍匐型;只有1份为白花,其它47份种质为深浅不同的黄色花。柱花草的植物学特征存在广泛变异,其变异系数由大到小依次为:自然株高(24.63%)、绝对株高(22.29%)、长/宽(16.00%)、叶宽(15.66%)、叶长(12.92%)、种子千粒重(12.22%)。对于48份种质从13个植物学特性指标进行聚类分析,将48份种质分为两大类:圭亚那种柱花草种和非圭亚那种柱花草种。

载脂蛋白E基因多态性与中国人阿尔茨海默病和颈动脉粥样硬化相关性研究

为了探讨中国散发性阿尔茨海默病 (SAD)及颈动脉粥样硬化 (CAS)与ApoE基因多态性的关系 ,应用聚合酶链式反应———限制性片段长度多态性 (PCR RFLP)技术检测 46名SAD患者、31名CAS患者及 5 0名正常老年人的ApoE基因多态性分布特征。结果显示SAD组及CAS组ApoEε4等位基因频率均高于对照组 (P <0 0 5 ) :SAD组为15 2 % ,CAS组为 14 5 % ,对照组为 3 0 % ;但CAS组ApoEε2等位基因频率明显高于SAD组 (P <0 0 5 ) :CAS组为41 9% ,SAD组为 2 1 7%。本研究提示ApoE4等位基因是SAD和CAS的共同危险因素 ,但ApoE2等位基因对CAS病人患AD具有保护作用。

硼对油菜花器官发育和结实性的影响

在缺硼和正常供硼条件下，油菜花器官的含硼量明显高于叶片，尤其是雌蕊和雄蕊中的含量可达同期叶片的两倍左右；硼过量时则以叶片含硼量最高。缺硼导致雄蕊长度、干重下降，花药绒毡层异常，花粉囊分化受阻。缺硼和硼过量均使油菜单株有效角果数，每角果籽粒数及结角率、结籽率、油菜籽产量下降。硼对角果的胚珠数没有影响。与宁油７号相比，宁油８号油菜品种更易受缺硼和过量硼的影响。

遗传算法结合偏最小二乘法无损评价西洋梨糖度

基于遗传算法的波段选择法在组合优化问题上具有很大的搜索优势,适应性很广。文章将该方法应用于西洋梨糖度近红外光谱分析中,探讨数据优化筛选的可行性。光谱经多元散射校正或标准归一化处理后进行波段选择,选择结果与样品中被测成分有关,4个品种洋梨的最佳个体染色体编码有一定共性。分别建立了四种洋梨的GA-PLS模型和全谱模型,早红考密斯、五九香、凯斯凯德和康佛伦斯的GA-PLS建模数据点分别从1 557减少到了434,496,310和496。GA-PLS/Fr-PLS模型的预测标准偏差分别为0.428/0.518,0.696/0.694,0.425/0.421和0.567/0.633,其中早红考密斯和康佛伦斯GA-PLS模型的预测精度明显优于全谱模型,而五九香和凯斯凯德的GA-PLS模型与全谱模型相近。结果表明,遗传算法用于PLS建立西洋梨糖度校正模型前的数据优化筛选是可行的,有效提高测量精度,减少建模变量。

猪圆环病毒2型ORF2重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

利用已构建的基因工程重组菌BL21(DE3)表达猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2编码的结构蛋白,经切胶纯化后作为免疫原。采取抗原量依次递增的免疫方式免疫8周龄BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合。间接酶联免疫吸附试验(ELISA)筛选,有限稀释法进行亚克隆3次,最终获得4株稳定分泌抗PCV2 ORF2重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞,分别命名为D2A1、H4G2、B10H10和G1G2。经ELISA检测,其腹水效价分别达到1∶2.048×107、1∶2.56×106、1∶1.28×106、1∶2.56×106。亚型鉴定4株单克隆抗体均属IgG2a亚型,其轻链均为κ链。Western blot鉴定表明获得的4株单克隆抗体均能特异性的识别43 kD的重组PCV2 ORF2蛋白。在间接免疫荧光试验中,单抗D2A1株的反应为阴性,H4G2、B10H10和G1G2反应为阳性,表明后3株单抗能够识别天然的PCV2 ORF2蛋白表位。本试验为进一步研究PCV2ORF2基因的功能及建立快速准确的诊断PCV2的方法奠定了基础。

微生物谷氨酰胺转胺酶的分批发酵生产

在首先采用我们自行设计的2L小型、便易的生化反应器,对我们研究室保藏的高产酶菌株链霉菌(Streptomyces sp.)WZFF.L-M168发酵生产微生物谷氨酰胺转胺酶(MTG)过程中发酵培养基的碳源、氮源和初始pH值的影响作用进行研究,确定培养条件后,逐级扩大发酵罐规模,在20L和200L发酵罐上以在线监控技术手段直接监测分析环境因素对MTG发酵生产的作用效果,确立各级发酵罐分批发酵的生产工艺条件。结果表明:碳氮源采用葡萄糖、淀粉和多价胨,初始pH值为7.0,接种量5%～10%,发酵过程中在线控制培养温度、pH、通气量和搅拌速度等各项参数指标分别为30±0.5℃、6.6～6.9,0.8～1.1vvm和200～400r/min较为适宜。在这优化技术条件下,200L发酵罐可以稳定生产酶活在2.75U/ml以上的MTG。

观察大鼠下丘脑NPY神经元的培养及瘦素对其mRNA表达的影响

目的观察大鼠下丘脑NPY神经元的培养及瘦素对其mRNA表达的影响。方法用无血清限定性培养基体外培养新生大鼠的下丘脑神经元,观察其生长状况;用NSE、NF、NPY抗血清检测神经元的鉴定和表达,并对三者阳性细胞的胞体和突起做统计学分析。给予Leptin10-10mol/L、10-8mol/L、10-6mol/L3个浓度,观察leptin对NPYm RNA表达的影响。结果培养的NSE和NF阳性细胞生长至第7天时均达高峰;NPY阳性神经元在培养7～10d时,亦处于一稳定时期。NPYmRNA的表达在给予Leptin10-10mol/L时,与对照组相比无显著性差异;10-8mol/L、10-6mol/L浓度时,表达增强,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)。结论取材于新生大鼠的下丘脑亦可进行体外培养;培养一周时是研究单因素影响神经元的最佳实验时间;在离体环境下,高浓度的leptin(10-8mol/L、10-6mol/L)能促进NPYmRNA的表达,NPY可能表现为抑制GnRH分泌的作用。

促性腺激素对小鼠胚胎卵巢卵泡体外发育和类固醇激素分泌的作用

利用小鼠胚胎卵巢无血清培养体系研究了 FSH、h CG对小鼠胚胎卵巢卵泡发育的作用。结果发现 ,(1) FSH处理组胚胎卵巢卵泡体外生长发育要优于 ITS对照组 ;体外培养 15 d后 ,FSH处理组胚胎卵巢睾酮分泌量显著增加 ;在整个培养过程中 ,FSH诱导胚胎卵巢分泌少量雌二醇。 (2 ) h CG对胚胎卵巢卵泡发育的作用是双相的。在培养早期 ,h CG处理组进入生长相的小卵泡显著多于 ITS对照组 ,相应地此时雌二醇水平较高 ;随着卵巢培养的继续 ,雌二醇水平显著降低 ,h CG处理组总卵泡数开始急剧下降 ,大量小卵泡闭缩退化 ;到培养结束时 ,处理组卵巢内小卵泡已所剩无几 ,但残存的生长卵泡卵母细胞平均直径仍显著大于 ITS对照组。此时伴随睾酮分泌量的增加 ,雌二醇的分泌量重新增加。 (3) FSH+h CG处理组卵泡发育类似 h CG处理组 ,体外培养 15 d后 ,FSH+h CG促进睾酮分泌 ,而雌二醇的分泌水平很低。结果提示 ,FSH虽然不是小鼠胚胎卵巢原始卵泡生长起始所必需 ,但对腔前卵泡的进一步发育及其雌二醇的分泌有促进作用 ;雌二醇可能是促性腺激素发挥促卵泡体外发育和存活作用所必需的 ;h CG可促进卵泡提前生长发育 。

黑龙江省1986-2010年大豆审定品种的品质性状分析

本文对黑龙江省1986～2010年间审定推广的275个大豆品种的子粒蛋白质、脂肪和蛋脂总量等品质性状指标进行了分析。结果表明,2006～2010年审定的大豆品种的不同品质性状最高值均高于1986～1990年的最高值,其中,大豆品种脂肪含量最高值显著提高,与品种推广年代间存在显著的线性回归关系,说明近年来大豆品质育种尤其是高油育种取得较大进展。育成蛋白质含量高于45.0%的大豆品种8个,脂肪含量在23.0%以上的品种9个,蛋脂总量在63.0%以上的品种23个。

抗埃博拉病毒VP40蛋白单克隆抗体的制备及在抗原捕捉ELISA中的应用

本研究以原核表达、纯化的扎伊尔株埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)VP40蛋白片段免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体,获得一株分泌抗EBOV VP40蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞系。以重组杆状病毒表达EBOV VP40蛋白为抗原,经Western blot和间接免疫荧光检测该单克隆抗体显示出良好的特异性免疫反应。采用该株杂交瘤细胞系经腹腔注射接种8日龄BALB/c小鼠,制备腹水,并经纯化和HRP标记,获得HRP标记的抗EBOV VP40蛋白单克隆抗体。从而,初步建立一种抗原捕捉ELSIA诊断方法,以原核表达EBOV VP40蛋白片段兔抗血清为一抗,应用HRP标记的抗EBOV VP40蛋白单克隆抗体检测杆状病毒表达的重组EBOV VP40蛋白显示出良好的敏感性和特异性。结果表明,初步建立的抗原捕捉ELSIA诊断方法有希望成为一种理想的检测EBOV感染的诊断方法。

贯叶连翘总提取物对枯草杆菌的抗菌作用

报道了经光照和未经光照处理后贯叶连翘总提取物对枯草杆菌的作用 ,结果表明 :总提取物对枯草杆菌有强烈的抑菌或杀菌作用 ,并且其抑菌或杀菌作用与其浓度有关 。

鸭瘟病毒部分基因的克隆与序列分析

用BamH Ⅰ、Eco RⅠ、Hind Ⅲ、Pst Ⅰ、SalⅡ5种限制性内切酶消化鸭瘟病毒基因组DNA，回收2～6kb片段连入pUC19载体，构建了鸭瘟病毒基因组部分文库。选取部分克隆进行序列测定，获得5个UL片段基因，分别为UL33、UL34、UL45、UL46和UL47。序列比较显示，它们与α-亚科疱疹病毒其他成员相应基因具有不同程度的同源性。这是国内外对鸭瘟病毒以上基因序列的首次报道。

大鼠脑缺血对癫痫敏感性和脑内胶质原纤维酸性蛋白免疫反应的影响

本实验采用改良栓线法制备大鼠右侧大脑中动脉 (Middlecerebralartery ,MCA)缺血再灌注模型 ,腹腔注射阈下剂量 (35mg/kg·2d)戊四唑 (pentylenetetrazol,PTZ)制备慢性癫痫点燃模型。通过观察大鼠的行为 ,来检测其癫痫敏感性的改变。分别用硫堇染色、免疫细胞化学方法观察PTZ点燃脑缺血大鼠的相应脑区的神经病理学改变及脑内胶质原纤维酸性蛋白 (gliafibrillaryacidicprotein ,GFAP)免疫反应活性 (immunoreactivity,IR)的变化。结果显示 :脑缺血后大鼠癫痫敏感性明显增强 (P <0 0 5 )。右背侧海马CA1、CA3 区锥体细胞、额叶皮质神经元不同程度的脱失 (P <0 0 5 )并出现大量GFAP免疫反应阳性的星形胶质细胞 ,且细胞体积变大 ,突起变长变粗 ,免疫染色强度明显增强 (P <0 0 5 ) ,提示脑缺血大鼠癫痫敏感性增强 ,可能与海马及额叶皮质的神经元脱失及星形胶质细胞活化增生有关。

绿稻的花药培养

使用三步培养法对粳绿稻品系 810 10 4系进行花药培养。以N6 + 2 ,4 D 1.0mg/L +NAA 3.0mg/L +KT 1.0mg/L +椰乳 10 0mL/L +麦芽糖 5 0 g/L +Na2 SiO36 0mg/L +琼脂粉 7g/L(pH5 .8)作为愈伤组织诱导培养基 ,MS +BA 1.0mg/L +KT 1.0mg/L +NAA 0 .5mg/L +蔗糖 30 g/L +琼脂粉 7g/L(pH5 .8)作为分化培养基。愈伤组织诱导率为 3.33% ,绿苗分化率为 11.4 9%。获得绿色花培再生植株 18丛 ,分为 39个单株系。经田间形态观察和染色体计数鉴定 ,其中有 33个株系为单倍体 ,6个株系为二倍体。 6个二倍体株系中 ,有 2个株系的粒色表现为纯合体 ,有 4个株系的粒色表现为杂合体。 4个杂合体株系中 ,有一个显现出花叶性状。对花药培养过程中的形态变化观察结果表明 ,在三步培养法中 ,愈伤组织分化形成胚状体和不定芽 ,其中以形成胚状体为主 ;在愈伤组织直径约为

PRRSV缺失变异毒株HB-2(sh)/2002在人工感染仔猪组织中的分布与定位

用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)HB-2(sh)/2002滴鼻感染30日龄健康仔猪,分别于3、7、14、28、42天宰杀,用免疫组化法对呼吸道,泌尿道,生殖道和消化道的主要器官以及脑和主要淋巴器官中的病毒抗原进行了定位分析。结果表明,在各个时间段,病毒抗原阳性率最高的器官为呼吸道、消化道沿途的淋巴结,组织中的阳性细胞多数为巨噬细胞和树突细胞,从个别猪的脑、心肌、肝和呼吸道上皮的细胞检测到阳性信号,同时发现该毒株主要在巨噬细胞和呼吸道腺上皮细胞复制。

富硒麦芽对实验性肝癌大鼠NO、NOS和脂质过氧化的影响

50只清洁级SD大鼠随机分为4组:对照组(5只)、模型组(15只)、富硒麦芽组(15只)和亚硒酸钠组(15只)。对照组和模型组饲喂大鼠基础饲料,饲料含硒量为0.1mg/kg;富硒麦芽组和亚硒酸钠组分别在基础饲料中补充富硒麦芽和亚硒酸钠,饲料含硒量为3.0mg/kg。除对照组外,其余3组采用0.01%二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌16周,停止诱癌后继续饲养2周再处死全部大鼠,观察富硒麦芽对丙氨酸氨基转移酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、白蛋白(ALB)、总胆红素(TBIL)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合成酶(NOS)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的影响。结果显示,富硒麦芽组大鼠血浆ALT、ALP、TBIL、NO、MDA和肝组织NO、NOS、MDA显著低于模型组,全血和肝组织GSH-Px活性显著高于模型组;与亚硒酸钠组相比,富硒麦芽组大鼠血浆和肝组织的NO含量和NOS活性显著降低。试验表明富硒麦芽具有减轻肝脏损伤、延缓大鼠肝癌形成的能力,其作用机制之一可能为富硒麦芽能抑制NO的产生,清除体内大量过剩的氧自由基,减轻NO等自由基所致的脂质过氧化损伤。