古细菌-硫细菌蛋白AF1514的纯化及晶体生长研究(英文)

本研究将AF1514蛋白的重组基因转化到大肠杆菌(E.coli BL21)并通过在12℃条件下的诱导表达产生了大量的目的蛋白。用镍柱亲和层析和分子筛Superdex-75凝胶过滤层析的两步蛋白纯化方法进一步纯化蛋白AF1514后,获得纯度较高的蛋白(纯度>95%)。纯化的母体蛋白和甲基化处理后的蛋白衍生物分别用悬滴汽相扩散法在16℃结晶。初步筛选所用的400多种结晶条件中,适合晶体生长的条件只有3种,其中最佳晶体生长条件溶液的成分包含0.1mol/L醋酸钠,pH5.0,0.1mol/L氯化钠和8%～14%(W/V)2-甲基2,4-戊二醇。蛋白晶体属于四方晶系,初步X-射线衍射分辨率为2.09A0。