自建Lowry法测定B型肉毒神经毒素蛋白质含量

目的:探究适宜的B型肉毒神经毒素中蛋白质含量测定方法。方法:分别应用《中国药典》四部(2020版)中蛋白质测定法项下福林酚法(药典方法)和自建的Lowry法(本方法)测定3批B型肉毒神经毒素中的蛋白质含量,比较两种方法的线性关系、精密度和准确度。结果:两种方法的线性都具有良好的相关性,药典方法和本方法线性绝对系数R2分别为0.9972和0.9987;两种方法都具有良好的精密度和重复性,但本方法的相对标准偏差更低。结论:自建的Lowry法更适合B型肉毒神经毒素中蛋白质含量的测定。

Lowry法测定马铃薯中蛋白质提取物的含量

目的采用Lowry法测定马铃薯中蛋白质提取物的含量。方法以国家蛋白质标准品为含量测定对照品,样品溶液和标准品溶液分别取1 ml,加碱性铜溶液5 ml,室温放置10 min,快速加入酚试剂0.5 ml,室温放置30 min,在波长650 nm处检测吸光度,外标法测定蛋白含量。结果国家蛋白标准品线性范围0.1～0.5 mg.ml-1,回归方程为Y=1.874 X+0.064(R=0.999),平均加样回收率为100.24%,RSD为1.63%。结论用该Lowry法测定马铃薯蛋白质提取物的含量,方法准确、简便、重复性好。

威廉环毛蚓提取物蛋白质含量测定方法研究

目的 建立威廉环毛蚓提取物蛋白质含量测定的最佳方法。方法 以氨基酸分析仪测定的威廉环毛蚓提取物中的氨基酸含量为指标,对蛋白质含量检测方法 Lowry法2、改良Lowry法、BCA法、Bradford法进行对比评价。结果 Lowry法2、改良Lowry法、BCA法、Bradford法测定威廉环毛蚓提取物蛋白质含量(上清液)结果分别为27.03%、45.85%、31.58%、11.11%,威廉环毛蚓提取物蛋白质含量(混悬液)的结果分别为38.44%、52.39%、44.06%、11.56%。采用氨基酸分析仪法测定得到威廉环毛蚓提取物中游离氨基酸含量为4.18%,将威廉环毛蚓提取物蛋白质酸水解之后测定总氨基酸含量为48.53%。结论 在威廉环毛蚓提取物样品溶液的处理方式上,与样品上清液相比,样品混悬液的测定结果更接近样品中蛋白质的真实含量。以牛血清白蛋白(BSA)为对照品,相较于Lowry法2、改良Lowry法和Bradford法,BCA法更适宜用于威廉环毛蚓提取物中的蛋白质含量测定。

Lowry法测定宫颈癌片中蛋白质的含量

目的:制定宫颈癌片中蛋白质的含量测定方法。方法:采用Lowry法测定含量,以660nm为测定波长测定吸收度。结果:宫颈癌片中水溶性蛋白质在0.048￣0.144mg/ml范围内线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为97.70%(n=5),RSD=1.25%。结论:该方法简便,准确,重现性好,可作为宫颈癌片的质量控制标准。

Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的不确定度分析

目的对Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的不确定度进行分析和评价。方法建立Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的的数学模型,找出影响不确定度的因素,并对各个不确定度分量进行评估。结果计算出了各变量的不确定度,取包含因子K=2,置信概率为95%,Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的扩展不确定度为0.0364。结论此评价方法适用于Lowry法测量重组艾塞那肽蛋白含量的不确定度评估。

Lowry法测定人凝血因子Ⅷ蛋白含量

目的:对Lowry法应用于人凝血因子Ⅷ蛋白含量测定中的可行性进行研究。方法:考察S公司人凝血因子Ⅷ原液及成品,比较凯氏定氮法与Lowry法对蛋白测定结果产生的差异,及不同浓度保护剂对Lowry法的影响。结果:甘露醇对蛋白含量测定有明显正干扰,甘氨酸有负干扰;对样品进行预稀释,辅料在低浓度范围内,当甘露醇浓度为0.1%和甘氨酸浓度为0.3%时,可减少辅料的干扰作用。结论:适当稀释样品可减少保护剂的干扰,用Lowry法测定人凝血因子Ⅷ蛋白含量,简单快速准确可行。

Lowry法测定重组人血清白蛋白-白细胞介素2融合蛋白含量的方法验证

试验验证了Lowry法测定重组人血清白蛋白-白细胞介素2融合蛋白含量的方法,为后续试验提供重组人血清白蛋白-白细胞介素2融合蛋白含量的检测方法。以蛋白含量测定国家标准品为标准品,在100~0μg/m L浓度范围内建立标准曲线,线性关系良好,相关系数(R^2)大于0.99。标准曲线上至少6点(包含两端)满足准确度介于95.2%~111.67%,标准曲线下限准确度介于95.98%~103.6%。高、中、低质量浓度(80,40,20μg/m L)质控样本批内精密度均介于1.51%~4.41%,批间精密度均介于3.83%~6.36%。综合上述信息,Lowry法测定重组人血清白蛋白-白细胞介素2融合蛋白含量的方法稳定,可重现。重组人血清白蛋白-白细胞介素2在200~10μg/m L质量浓度范围内均一。

改良Lowry法测定不同产地凹纹胡蜂药材蛋白质含量

目的:建立凹纹胡蜂药材中蛋白质含量测定的方法。方法:采用改良Lowry法测定标准小牛血清蛋白(BSA)和凹纹胡蜂药材中的蛋白质含量并对其进行方法学考察。结果:该方法线性及相关度良好,线性范围较宽,精密度、稳定性、重复性和加样回收率较佳;用该方法分别对不同产地的3批凹纹胡蜂药材中蛋白质含量进行测定,蛋白质含量分别为:德宏州(批号:20150630)12.37%,保山市(批号:20150927)13.08%,曲靖市(批号:20151112)9.63%,药材含水量经测定依次为6.12%、9.92%、10.17%。结论:不同产地凹纹胡蜂药材中蛋白质含量有一定差异,采自曲靖市的样品蛋白质含量偏低;实验采用的改良Lowry法测定结果准确、简便、稳定,适用于凹纹胡蜂药材中蛋白含量的测定。

Lowry法测定眼宁滴眼液中蛋白质的含量

目的 :制定眼宁滴眼液中蛋白质的含量测定方法。方法 :采用Lowry法测定含量 ,以 650nm为测定波长测定吸收度。结果 :在 0 0 4～ 0 2 0mg/ml之间呈良好线性关系 ,相关系数r=0 9990 ,平均回收率为 99 9% (n =6) ,RSD =1 3 %。结论 :本法简便、准确、重现性好 。

碱热改性米渣谷蛋白对W/O/W型双重乳液稳定性的影响

目的:实现米渣谷蛋白在乳浊体系中的应用。方法:选取碱热改性米渣谷蛋白和span80,采用一步乳化法制备W/O/W型双重乳液,并考察蛋白浓度对双重乳液稳定性的影响。结果:当蛋白质量分数从0.5%升高至2.5%时,乳液大粒径峰消失,显微结构中液滴的双重结构增强,表观黏度及黏弹性提高,离心稳定性和贮藏稳定性增强。当蛋白质量分数为2.5%时,离心后乳清析出指数从37.21%降至10.56%,分层时间从6 h延长至96 h。蛋白质与span80形成复合膜共同稳定油水界面,形成中间态液滴,当界面蛋白足以形成刚性界面膜时,液滴从中间态转为稳定的双重结构;当蛋白质量分数为3.0%时,双重乳液发生絮凝使大粒径峰重新出现,稳定性下降,离心后乳清析出指数为16.48%,制备后96 h左右分层,过剩的蛋白质一部分参与内相液滴的构建,另一部分单独形成O/W型液滴吸附于大体积液滴外侧。结论:一步乳化法下,蛋白质量分数为2.5%时,可制得稳定双重乳液。

Lowry法检测百日咳抗原中百日咳毒素、丝状血凝素、黏附素含量方法验证

目的对Lowry法2检测百日咳抗原中百日咳毒素(pertussis toxin, PT)、丝状血凝素(filamentous hemagglutinin, FHA)、黏附素(pertactin, Prn)含量进行方法学验证。方法将PT、FHA、Prn国家标准品系列稀释, 在0~50 μg/ml浓度范围内建立标准曲线。在已知浓度的PT、FHA、Prn精制液中加入国家标准品配制加标样品, 采用Lowry法2检测蛋白含量, 考察准确度和精密度。对原液生产中使用的400 mmol/L PBS进行专属性试验。分别在检测后10、20、30 min再进行检测以考察方法的耐用性。结果回收率介于91.1%~110.7%;准确度相对标准偏差为1.8%~9.2%, 批间精密度相对标准偏差为2.6%~6.2%;400 mmol/L PBS对样品测定无干扰;检测样品在30 min内读取数据有效。结论该法具有良好的线性、准确性、精密性、专属性和耐用性, 可用于百日咳抗原中PT、FHA、Prn含量的测定。

药用真菌粗多糖蛋白含量测定方法

以药用真菌姬松茸(Agaricus blazei)、鸡腿菇(Coprinus comatus)、猴头(Hericium erinaceus)、灰树花(Grifola frondosa)和灵芝(Ganoderma lucidum)的水提多糖为材料,采用二喹林甲酸法、考马斯亮蓝法、福林-酚法、紫外分光光度法、离子色谱法和传统凯氏定氮法对其中的蛋白含量进行测定和比较分析。结果表明,不同测定方法获得的蛋白含量测定值有差异;笔者推荐使用离子色谱法进行精确蛋白含量测定,采用福林-酚法进行快速趋势比较测定。

微波消解-浓度直读法快速测定食品中的蛋白质

为建立一种快速测定食品中蛋白质的新型分析方法,选择小麦为样品,用微波程序压力消解技术进行处理,用氨气敏电极-浓度直读法直接读取数据,快速测定了小麦中的蛋白质。结果表明:粗蛋白质含量在12.56%～14.19%之间,RSD为1.4%～3.2%(n=5),加标回收率为97.16%～104.7%,线性范围为1×10-5～1×10-2mol/L,相关系数为0.9991,检出下限为:1.4682μmol/L。分析结果与国标法对照无显著性差异。该法具有简便、灵敏、快速、准确、直观、无需蒸馏和滴定操作等显著优点,结果令人满意。

水的酸碱度对Bradford法检测蛋白质含量的影响

目的探讨水酸碱度的变化对Bradford法检测蛋白质含量的影响。方法用pH分别为4.0(pH=4.0组)、7.0(pH=7.0组)和10.0(pH=10.0组)的双蒸水配置Bradford法所需要的试剂,绘制标准曲线,检测标准蛋白浓度,比较水的酸碱度的变化对标准曲线的影响。结果pH=4.0组和pH=7.0组的标准曲线拟合度较pH=10.0组标准曲线拟合度明显增高;pH=4.0组和pH=7.0组检测的蛋白质含量与已知蛋白浓度相比差别无统计学意义(P>0.05);pH=10.0组检测蛋白质的含量与已知蛋白浓度、pH=7.0组和pH=4.0组相比差别均有统计学意义(P<0.05),pH=7.0组和pH=4.0组检测蛋白质含量的准确性高于pH=10.0组。结论双蒸水酸碱度的变化可以影响Bradford法检测蛋白质含量的精确度。

温度对考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的影响

[目的]研究温度在考马斯亮蓝法测定蛋白质过程中的影响,为准确测定蛋白质浓度提供建议和指导。[方法]通过考马斯亮蓝法测定在不同温度和孵育时间下对已知不同浓度的牛血清蛋白的影响。[结果]在0-100 mg/ml蛋白质浓度标准曲线测定范围内,室温20℃孵育20-30 min时测定的蛋白质浓度比较稳定。同时蛋白质浓度越高,考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度过程中对各种因素影响的抵御能力越强。[结论]采用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度时,环境温度、待测样品浓度以及染料与蛋白质孵育时间等是决定实验结果准确性的重要因子。

一种可用于皮革分析的蛋白质快速检测方法

本文针对常规蛋白质检测法分析速度慢、难以实现在线自动检测的缺陷 ,建立起了一种新颖、简便、快速的分析方法 ,实现了 Lowry试剂—Folin试剂体系、双通道流路的蛋白质快速流动注射分光光度分析法。本文进行了方法精密度、线性回归、检测限等可行性参数的测定和干扰试验 ,并将该方法应用于皮革分析上。本方法测得的蛋白质含量与双缩脲法分析的结果较为一致。试验结果表明 ,本方法的线性好、分析速度快、精密度高、检测限低、节省人力物力 ,可应用于皮革分析检验 ,为皮革工业的科研和生产提供可靠的依据。

玉米黄粉酶解提取浓缩蛋白工艺优化研究

通过单因素试验和响应曲面法,优化了采用低温α-淀粉酶酶解提取玉米黄粉浓缩蛋白的条件。所得最佳工艺为料液比1:4、酶用量36U/g玉米黄粉、温度40℃、时间90min、pH值6.2。该条件下玉米黄粉浓缩蛋白纯度达到78.96%,得率为80.13%。

角倍蚜唾液的提取和蛋白鉴定

唾液是蚜虫与寄主植物相互作用的关键因子,蚜虫唾液研究对于作物抗蚜品种选育、防治技术开发和虫瘿形成机理研究等具有重要意义,但唾液的提取和浓缩是研究中的难点。本研究根据角倍蚜体型微小、体表有蜡粉的特点,对蚜虫唾液研究中常用的双层Parafilm膜夹营养液方法进行了改进,改进的方法能够成功提取角倍蚜干雌的唾液,用于质谱分析和蛋白鉴定。

醇法生产花生浓缩蛋白的工艺条件研究

以脱脂花生蛋白粉为原料,通过单因素实验和正交实验优化乙醇浸提法生产花生浓缩蛋白的工艺条件,并通过放大实验进行验证。结果表明,花生浓缩蛋白生产的最佳工艺条件为:乙醇体积分数65%,料液比1∶8,浸洗温度60℃,浸洗时间40 min,浸洗次数3次。在最佳工艺条件下所得花生浓缩蛋白产品的蛋白质含量为72%,氮溶解指数为42%。100 g放大实验所得花生浓缩蛋白产品的蛋白质含量为70%,氮溶解指数为40%。

二喹啉甲酸检测法测定Sprague-Dawley大鼠肝微粒体蛋白浓度

目的建立酶标仪检测大鼠肝微粒体蛋白浓度的方法。方法大鼠尾静脉连续3 d注射0.9%氯化钠注射液2 ml,第4 d解剖大鼠,取肝脏,应用差速离心法提取大鼠肝微粒体,用二喹啉甲酸检测（BCA）法测定肝微粒体蛋白浓度。结果蛋白标准曲线范围在0~0.5mg/ml,回归方程为Y=0.091 9＋0.868X,（R=0.998）。低、中、高浓度回收率分别为101.33%,110.67%,101.17%,日内和日间精密度分别为6.52%,0.53%,1.95%和3.01%,7.23%,0.74%。结论本实验建立的BCA蛋白测定法准确可靠,重复性和稳定性均良好,相比较传统的蛋白测定方法,更为迅速,具有较强的抗干扰的能力,为研究用药后肝微粒体酶活性的改变提供可靠的检测手段。