银杏种仁蛋白分离纯化及其抑菌活性

从银杏种仁中分离纯化具有抑菌活性的蛋白质,并分析其抑菌活性。结合抑菌活性分析,采用硫酸铵分级盐析、透析、纤维素DE-52阴离子交换柱层析及Sephadex G-75凝胶过滤柱层析对银杏种仁蛋白(Ginkgo bilobaseed protein,GBSP)进行分离纯化,得到一种抑菌蛋白GBSPⅠ-A。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测结果显示,该蛋白呈单一条带,其分子质量约为42.80 kD;Superdex G-75柱层析结果显示GBSPⅠ-A呈单一对称峰,高效凝胶渗透色谱测定其分子质量为39.32 kD;该蛋白对肺炎克雷伯氏菌、金黄色葡萄球菌、戴尔有孢圆酵母及黑曲霉的最小抑菌浓度(minimum inhibitory conce ntration,MIC)分别为20、20、20、12 mg/mL。

mcpr1基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达

目的 :构建mcpr1基因原核表达载体 ,表达MCPR1蛋白。 方法 :采用多聚酶链式反应 (PCR)扩增出mcpr1基因的蛋白编码序列 ,克隆到中间载体中 ,再经双酶切 ,亚克隆到表达载体中 ,构建该基因的融合表达载体pGEX 4T mcpr1,在大肠杆菌中用IPTG诱导表达 ,SDS PAGE电泳。 结果 :酶切和测序鉴定 ,表明融合表达载体内插入片段正确 ,在大肠杆菌中诱导后 ,出现一条 3 60 0 0的新蛋白带 ,主要存在于细菌沉淀中 ,占总蛋白的3 9 %。结论 :研究表明mcpr1基因编码的蛋白质能够在原核细胞中表达 。

乳酸片球菌素PA-1在大肠杆菌中的表达与纯化

为了实现该细菌素的外源表达,本实验首先利用聚合酶链式反应从乳酸片球菌PAF中扩增出乳酸片球菌素PA-1的结构和免疫基因,然后克隆到表达载体p GEX-6p-1,构建了N端含有GST-His-DDDDK标签的重组质粒p GEX/his-ped AB,然后转化进入大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷诱导,重组乳酸片球菌素PA-1在大肠杆菌胞内成功表达。表达的融合蛋白先经过镍亲合层析柱纯化,然后注入谷胱甘肽S-转移酶亲和色谱柱用肠激酶处理,释放出成熟的乳酸片球菌素PA-1。利用高效液相色谱和质谱技术检测乳酸片球菌素PA-1纯度。以单核细胞增生李斯特氏菌CMCC54004为指示菌,利用琼脂扩散法检验乳酸片球菌素PA-1活性。结果表明,携带GST-His-DDDDK标签的融合蛋白无活性,标签切除后其抑菌活性恢复,且其纯度达90%以上。

猪札幌病毒VPg基因的原核表达及免疫原性研究

为获得猪札幌病毒病毒基因组连接蛋白(viral protein genome-linked,VPg),本试验以中国西北地区猪札幌病毒CH430株RNA为模板,通过RT-PCR扩增VPg基因,将其克隆至pMD19-T Simple Vector,双酶切及基因测序鉴定后,再亚克隆至pET-30a中构建重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。将纯化的目的蛋白免疫家兔得到超免疫血清。结果显示,获得的VPg基因全长为339bp,编码113个氨基酸。SDS-PAGE结果显示,重组菌在37℃、1.0mmol/L IPTG诱导表达6h时重组蛋白表达量最高,表达的目的蛋白主要以包涵体的形式存在,大小为22ku,与预期结果相符。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白与超免疫血清具有良好的反应原性。超免疫血清ELISA效价可达1∶12 800,且具有良好的特异性。本试验获得的超免疫血清为研究猪札幌病毒非结构蛋白VPg的结构与功能奠定了基础。

葵花籽粕蛋白制备及其功能性质分析

以提取绿原酸后的葵花籽粕为原料,在单因素试验的基础上,采用L9(34)正交优化试验确定葵花籽粕蛋白最佳制备工艺。采用蛋白层析仪分离纯化葵花籽粕蛋白,确定了纯化工艺,同时以大豆蛋白为对照,研究了葵花籽粕蛋白的溶解性、起泡性与起泡稳定性、乳化性与乳化稳定性、持水性、持油性等功能性质。结果表明,葵花籽粕粗蛋白最佳碱提工艺为料液比1∶25(g/m L)、温度40℃、时间30 min、碱液p H 12.0,提取率为61.04%±2.5%,蛋白质含量为66.94%±3.2%;分离纯化的工艺条件为上样量3.0 m L、洗脱液流速0.4 m L/min,纯化后蛋白质含量为93.20%±3.5%,纯度提高了26.36%±1.6%;葵花籽粕蛋白的等电点PI为4.2;葵花籽粕蛋白的溶解性,起泡性、起泡稳定性、乳化性、乳化稳定性均略高于大豆蛋白,持水性略低于大豆蛋白,持油性明显高于大豆蛋白。葵花籽粕蛋白有望作为食品工业的风味保持剂。

HPV16E7-HSP70融合蛋白在大肠杆菌中表达及纯化

[目的]在大肠杆菌中表达HPV16E7-HSP70融合蛋白并进行纯化和复性,为进一步研究HPV16E7-HSP70融合蛋白抗喉癌免疫活性奠定基础。[方法]用构建的原核表达质粒pET28aHPV16E7-HSP70转化大肠杆菌BL21,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达;通过超声波裂解细菌,高浓度尿素裂解包涵体和Ni2+离子金属螯合亲和层析纯化目的蛋白;并对融合蛋白进行复性;用SDS-PAGE及WesternBlot进行分析鉴定。[结果]SDS-PAGE分析显示有分子量约为90kD的融合蛋白表达,表达产物以包涵体形式存在,表达量可达30%;纯化后目的蛋白的纯度达到95%;经WesternBlot鉴定复性后的融合蛋白能与抗HPV16E7抗体、抗HSP70抗体特异性结合。[结论]HPV16E7-HSP70融合蛋白能够在体外大肠杆菌中表达获得。

卡介苗多糖核酸与结核菌素皮试阳转的相关性研究

目的:探讨卡介苗多糖核酸(BCGPSN)诱导变应性鼻炎患者结核菌素皮试(PPD)阳转情况及其治疗变应性鼻炎的相关机制。方法:将60例变应性鼻炎患者,随机分为BCGPSN治疗组和口服息斯敏组,各30例。正常对照组20例。应用酶联免疫吸附试验和UniCAP系统检测治疗前后血清嗜酸粒细胞阳离子蛋白(ECP)、血清总IgE(tIgE)水平,同时观察PPD。结果:BCGPSN治疗组治疗后,ECP、tIgE明显低于治疗前,差异有统计学意义(P<0.01),PPD阳转率为37.5%,与息斯敏组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:BCGPSN可调节变应性鼻炎患者的免疫失衡,促进Th1细胞功能,减轻变应性鼻炎的发作。

蛋白净化剂改善表面淀粉胶使用性能的实践

采用一种复合型蛋白净化剂对文化纸表面施胶淀粉胶液进行净化处理的应用情况。实践表明:蛋白净化剂对绝干淀粉的适宜比例为10%时,此条件下胶液黏度和成纸表面强度变化不大,胶液系统不同部位的冲刷周期均明显延长,与胶料相关的施胶机断纸和纸病明显减少,吨纸施胶成本降低7.8元。