为了研究蒙古马常规冷冻精液生产前后精子中蛋白质的表达变化,试验采用数据非依赖采集(data independent acquisition,DIA)定量蛋白质组学技术对3匹蒙古马精液常规冷冻前后(新鲜精液和冷冻精液)的总蛋白进行定量分析,并将总蛋白在碳水...为了研究蒙古马常规冷冻精液生产前后精子中蛋白质的表达变化,试验采用数据非依赖采集(data independent acquisition,DIA)定量蛋白质组学技术对3匹蒙古马精液常规冷冻前后(新鲜精液和冷冻精液)的总蛋白进行定量分析,并将总蛋白在碳水化合物酶(carbohydrate-active enzyme,CAZyme)、京都基因与基因百科全书同源性(Kyoto encyclopedia of proteins and genomes ortholog,KO)、基因本体论(gene ontology,GO)、真核生物同源类群(eukaryotic orthologous groups,KOG)数据库中注释;以lb(冷冻精液总蛋白的数量/新鲜精液总蛋白的数量)>2或<0.5、P<0.05筛选差异表达蛋白质(differentially expressed proteins,DEPs),对筛选到的DEPs进行GO富集分析和KEGG信号通路分析,最后对部分DEPs进行Western-blot验证。结果表明:共得到新鲜精液和冻精总蛋白数量为2429个,这些蛋白在CAZyme、KO、GO、KOG数据库分别注释到64,923,2028,1868个,分别占总蛋白数量的2.63%、38.00%、83.49%和76.90%;共筛选出1406个DEPs,其中下调DEPs为794个,上调DEPs为612个。在GO功能富集分析中,有369个下调DEPs参与了生物学进程中的生物调控,419个下调DEPs定位于细胞组分中的细胞外区域,631个下调DEPs参与到分子功能中分子功能中,31个上调DEPs参与了生物学进程中的精子发生,161个下调DEPs定位于细胞组分中的线粒体中。在KEGG通路富集分析中,有288个DEPs显著富集代谢通路中。DEPs中膜联蛋白(annexin,ANXA2)、微管蛋白α链(tubulin alpha chain,TUBA8)、精子尾部外致密纤维2(outer dense fiber of sperm tails 2,ODF2)和精子发生相关48(spermatogenesis associated 48,SPATA48)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)和热休克蛋白90α家族B类成员1(heat shock protein 90-alpha family class B member 1,HSP90AB1)等蛋白与精子密切相关;经Western-blot检测,HSP70和HSP90蛋白在冻精中的表达量极显著低于新鲜精液(P<0.01)。说明冻融过程严重影响了蒙古马精子中HSP70和HSP90蛋白的表达。展开更多
环指蛋白43(ring finger protein 43,RNF43)是巨人蛋白家族成员,具有环状结构的泛素链接酶结构域和跨膜区等特征性序列,编码E3泛素化激酶,具有E3泛素-蛋白连接酶活性。RNF43因与锌指蛋白3(zinc and ring finger 3,ZNRF3)存在高度结构同...环指蛋白43(ring finger protein 43,RNF43)是巨人蛋白家族成员,具有环状结构的泛素链接酶结构域和跨膜区等特征性序列,编码E3泛素化激酶,具有E3泛素-蛋白连接酶活性。RNF43因与锌指蛋白3(zinc and ring finger 3,ZNRF3)存在高度结构同源而在Wnt/β-catenin信号通路研究中受到关注。研究表明,RNF43主要通过与Wnt/β-catenin信号通路受体结合,泛素化卷曲蛋白受体和靶向溶酶体途径降解来抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性。RNF43功能的缺失导致卷曲蛋白降解的减少或缺乏,从而增强Wnt/β-catenin信号通路的活性。RNF43的Wnt膜受体清除效应是通过与膜受体结合介导的,故较多研究认为RNF43定位于细胞膜。但也有部分学者认为RNF43是细胞核定位,甚至并无特定细胞器定位,而散在分布于细胞质内。RNF43基因的异常表达和基因突变被认为与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。现有研究主要包括结直肠肿瘤病变、胃腺癌、胰腺囊性病变、肝癌、卵巢肿瘤、子宫内膜腺癌和神经胶质瘤等。尽管总体研究支持RNF43是一种抑癌基因,但仍有小部分研究提示存在癌基因可能。本文将从RNF43基因的结构基础及定位、生物学功能及其在部分肿瘤中的表达情况做一综述。展开更多
文摘为了研究蒙古马常规冷冻精液生产前后精子中蛋白质的表达变化,试验采用数据非依赖采集(data independent acquisition,DIA)定量蛋白质组学技术对3匹蒙古马精液常规冷冻前后(新鲜精液和冷冻精液)的总蛋白进行定量分析,并将总蛋白在碳水化合物酶(carbohydrate-active enzyme,CAZyme)、京都基因与基因百科全书同源性(Kyoto encyclopedia of proteins and genomes ortholog,KO)、基因本体论(gene ontology,GO)、真核生物同源类群(eukaryotic orthologous groups,KOG)数据库中注释;以lb(冷冻精液总蛋白的数量/新鲜精液总蛋白的数量)>2或<0.5、P<0.05筛选差异表达蛋白质(differentially expressed proteins,DEPs),对筛选到的DEPs进行GO富集分析和KEGG信号通路分析,最后对部分DEPs进行Western-blot验证。结果表明:共得到新鲜精液和冻精总蛋白数量为2429个,这些蛋白在CAZyme、KO、GO、KOG数据库分别注释到64,923,2028,1868个,分别占总蛋白数量的2.63%、38.00%、83.49%和76.90%;共筛选出1406个DEPs,其中下调DEPs为794个,上调DEPs为612个。在GO功能富集分析中,有369个下调DEPs参与了生物学进程中的生物调控,419个下调DEPs定位于细胞组分中的细胞外区域,631个下调DEPs参与到分子功能中分子功能中,31个上调DEPs参与了生物学进程中的精子发生,161个下调DEPs定位于细胞组分中的线粒体中。在KEGG通路富集分析中,有288个DEPs显著富集代谢通路中。DEPs中膜联蛋白(annexin,ANXA2)、微管蛋白α链(tubulin alpha chain,TUBA8)、精子尾部外致密纤维2(outer dense fiber of sperm tails 2,ODF2)和精子发生相关48(spermatogenesis associated 48,SPATA48)、热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)和热休克蛋白90α家族B类成员1(heat shock protein 90-alpha family class B member 1,HSP90AB1)等蛋白与精子密切相关;经Western-blot检测,HSP70和HSP90蛋白在冻精中的表达量极显著低于新鲜精液(P<0.01)。说明冻融过程严重影响了蒙古马精子中HSP70和HSP90蛋白的表达。
文摘环指蛋白43(ring finger protein 43,RNF43)是巨人蛋白家族成员,具有环状结构的泛素链接酶结构域和跨膜区等特征性序列,编码E3泛素化激酶,具有E3泛素-蛋白连接酶活性。RNF43因与锌指蛋白3(zinc and ring finger 3,ZNRF3)存在高度结构同源而在Wnt/β-catenin信号通路研究中受到关注。研究表明,RNF43主要通过与Wnt/β-catenin信号通路受体结合,泛素化卷曲蛋白受体和靶向溶酶体途径降解来抑制Wnt/β-catenin信号通路的活性。RNF43功能的缺失导致卷曲蛋白降解的减少或缺乏,从而增强Wnt/β-catenin信号通路的活性。RNF43的Wnt膜受体清除效应是通过与膜受体结合介导的,故较多研究认为RNF43定位于细胞膜。但也有部分学者认为RNF43是细胞核定位,甚至并无特定细胞器定位,而散在分布于细胞质内。RNF43基因的异常表达和基因突变被认为与多种恶性肿瘤的发生发展密切相关。现有研究主要包括结直肠肿瘤病变、胃腺癌、胰腺囊性病变、肝癌、卵巢肿瘤、子宫内膜腺癌和神经胶质瘤等。尽管总体研究支持RNF43是一种抑癌基因,但仍有小部分研究提示存在癌基因可能。本文将从RNF43基因的结构基础及定位、生物学功能及其在部分肿瘤中的表达情况做一综述。