Expressions of estrogen receptor subtypes and c-met proto-oncogene in endometrial carcinoma and their correlation

Objective To investigate the expressions of estrogen receptor(ER)subtypes and c-met proto-oncogene in human endometrial carcinomas and to assess the clinical significance of ER and c-met in this carcinoma.Methods Reverse transcription PCR(RT-PCR)was used to detect the expressions of ERα,ERβ and c-met proto-oncogene mRNA in 30 samples of endometrial carcinoma and 11 samples of normal endometrium.Results The expression of ERα in endometrial carcinoma(0.70±0.40)was significantly reduced in comparison to that in normal endometrium(1.14±0.56,P<0.05).A similar finding was made for the expression of ERβ in carcinoma(0.24±0.18)versus normal tissues(0.48±0.20,P<0.05).In contrast,c-met mRNA expression was increased in endometrial carcinoma(1.45±0.72)compared to that in normal endometrium(0.42±0.31,P<0.01).A decrease tendency of the expression of ERα was also found from Stage Ⅰ(0.82±0.41)to a more severe Stag Ⅱ-Ⅲ of endometrial carcinoma(0.42±0.17,P<0.05).The analysis of ERα and ERβ mRNA revealed a decrease tendency from shallow to deep invasion of the uterine muscles(P<0.05).We found that the expressions of ERα and ERβ were negatively correlated with c-met proto-oncogene with a coefficient correlation of-0.63(P<0.01)and-0.32(P<0.05),respectively.Conclusion ERα and ERβ are both involved in mutagenic action of carcinogen.C-met proto-oncogene plays an important role in the carcinogenesis and development of endometrial carcinoma.C-met and ER expressions show a negative correlation in the development of endometrial carcinoma.

宫颈癌患者癌组织c-Met mRNA与NF-κB mRNA表达的关系及其对预后的影响

目的分析肝细胞生长因子受体原癌基因c-Met mRNA与核因子-κB(NF-κB)mRNA在宫颈癌发病中的关系及对宫颈癌患者预后的影响。方法选取本院宫颈癌患者89例作为癌变组,宫颈癌前病变患者89例作为癌前病变组,因子宫肌瘤行全子宫切除患者89例作为正常宫颈组。采用RT-PCR检测3组宫颈组织中c-Met、NF-κB mRNA相对表达量。采用Spearman/Pearson分析c-Met mRNA与NF-κB mRNA在宫颈癌发病中的关系。采用Kaplan-Meier曲线分析不同c-Met mRNA、NF-κB mRNA表达水平患者的3年生存率。结果宫颈组织中c-Met、NF-κB mRNA相对表达量,癌变组>癌前病变组>正常宫颈组(P<0.05)。癌前病变组、癌变组c-Met mRNA与NF-κB mRNA呈正相关(P<0.001)。c-Met高表达与NF-κB mRNA高表达在宫颈癌发病中呈正向交互作用(P<0.05)。c-Met、NF-κB mRNA与宫颈癌临床分期、淋巴结转移、脉管浸润呈正相关,与分化程度呈负相关(P<0.05)。癌变组c-Met、NF-κB mRNA高表达患者3年生存率低于低表达患者(P<0.05)。结论c-Met mRNA与NF-κB mRNA高表达在宫颈癌发病中呈正向交互作用,与临床分期、淋巴结转移、脉管浸润呈正相关,且宫颈癌患者3年生存率显著降低。

沉默c-met基因表达对胃癌肝高转移潜能细胞生物学行为的影响

背景胃癌肝高转移潜能细胞(XGC9811-L)是本实验组在前期工作中建立的一株具有肝脏高转移潜能的胃癌细胞系,c-met基因在其中高表达。c-met是肝细胞生长因子(HGF)的受体。目的研究沉默c-met基因表达对XGC9811-L的增殖、侵袭和转移等生物学行为的影响。方法 2014年1—6月,采用细胞转染法将重组质粒p SuppressorRetro-c-met-siRNA导入XGC9811-L,建立稳定转染细胞系,按有无转染和转染目的基因的不同分为未转染组、空载体组、随机序列组和siRNA组。采用荧光定量反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测XGC9811-L中c-met mRNA相对表达水平,Western blotting法检测c-met相对表达水平,通过细胞增殖实验检测各组细胞增殖能力并绘制细胞生长曲线,通过侵袭实验和运动实验计算各组穿膜细胞数。结果 siRNA组c-met mRNA、c-met相对表达水平低于未转染组、空载体组、随机序列组(P<0.05)。siRNA组第3天、第5天、第6天、第7天细胞增殖能力低于未转染组、空载体组、随机序列组(P<0.05)。在侵袭实验中,siRNA组穿膜细胞数少于未转染组、空载体组、随机序列组(P<0.05)。在运动实验中,siRNA组穿膜细胞数少于未转染组、空载体组、随机序列组(P<0.05)。结论沉默c-met基因的表达可以抑制XGC9811-L的增殖、侵袭和转移能力,c-met在胃癌肝转移的发生、发展过程中可能起重要作用,抑制c-met基因表达可能会抑制胃癌细胞向肝脏转移。

胃癌组织中c-Met的表达及其临床意义

目的:研究c-Met在胃癌组织中的表达及其临床意义。方法:收集2011年1月至2011年12月盐城市第一、三人民医院外科接诊、手术切除并经病理证实的胃癌石蜡标本69例,另取同期胃黏膜不典型增生组织标本20例以及正常胃黏膜标本20例作对照。采用免疫组织化学法检测胃癌组织中c-Met蛋白的表达,采用real-time PCR法检测15例手术切除的胃癌和癌旁组织中c-Met mRNA的表达。采用Spearman秩相关分析评估c-Met蛋白与胃癌标志物骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)表达的关系。结果:c-Met蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为65.2%,明显高于胃黏膜不典型增生组织(30%)及正常胃黏膜组织(20%,均P<0.01);c-Met蛋白表达与胃癌的淋巴结转移、临床TNM分期相关(P<0.01)。胃癌组织中c-Met mRNA的表达显著高于正常胃黏膜组织[(0.20±0.12)vs(0.03±0.02),P<0.01]。OPN、MMP-9蛋白的表达与胃癌的浸润、临床TNM分期、淋巴结转移相关,且c-Met蛋白的表达与OPN、MMP-9的表达呈正相关(P<0.05)。结论:c-Met在胃癌组织中高表达,在胃癌的发生、发展过程中具有重要的作用,与OPN、MMP-9可能存在一定的协同性。

胃癌组织中OPN、c-Met蛋白的异常表达及其意义

目的研究骨桥蛋白(OPN)与肝细胞生长因子受体(c-Met)在胃癌组织中的表达特征,探讨其与临床病理参数的关系。方法采用免疫组织化学法检测69例胃癌组织、15例胃黏膜不典型增生组织及10例正常胃黏膜组织中OPN和c-Met蛋白的表达水平。结果 OPN在胃癌组织中的阳性表达率为69.6%,高于胃黏膜不典型增生组织(40%)及正常胃黏膜组织(20%)差异有统计学意义(P<0.05);OPN表达与肿瘤的浸润深度、临床TNM分期、淋巴结转移之间有明显的相关性。c-Met在胃癌组织中的阳性表达率为65.2%,明显高于胃黏膜不典型增生组织(26.7%)及正常胃黏膜组织(10%,P<0.01);c-Met表达与肿瘤的淋巴结转移、临床TNM分期之间有明显的相关性。结论 OPN与c-Met在胃癌中高表达,在肿瘤的浸润转移过程中存在一定协同性,在胃癌的发生、发展过程中具有重要作用。

胃癌组织c-met蛋白表达的意义及其与微血管密度的关系

目的探讨cmet蛋白在胃癌组织中的表达与胃癌临床病理特征及其肿瘤微血管密度的关系。方法对47例手术切除的胃癌组织采用免疫组织化学法检测cmet蛋白的表达及其肿瘤微血管密度。结果胃癌组织中cmet蛋白表达阳性率为85.1%,cmet阳性率与胃癌肿瘤的直径、有无淋巴结转移、浸润深度、TNM分期、是否有淋巴管及静脉癌栓有关;cmet阳性组胃癌微血管密度高于对照组。结论cmet蛋白的表达促进了胃癌的生长、浸润及转移,并促进胃癌的血管生成,与胃癌预后不良及临床病理特征有重要关系。

慢病毒介导的c-met RNA干扰对人乳头状甲状腺癌K1细胞生物学行为的影响

目的:探讨c-Met在乳头状甲状腺癌(PTC)中的表达;构建针对人c-met基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,并观察其对K1细胞c-met基因的沉默效应及对细胞生物学行为的影响。方法:免疫组化方法检测35例乳头状甲状腺癌及25例良性甲状腺疾病手术切除标本中c-Met的表达;构建人c-met基因的RNAi慢病毒载体,应用荧光定量RT-PCR与Western blotting检测其对c-met的干扰效率,应用克隆形成实验、流式细胞术、划痕实验和Transwell实验检测其对细胞克隆形成、周期、迁移、侵袭能力的影响,应用裸鼠模型评估RNA干扰后细胞成瘤能力的影响。结果:c-Met在PTC中的表达明显高于良性甲状腺组织;成功构建了c-met RNAi慢病毒载体,RT-PCR及Western blotting实验显示其对乳头状甲状腺癌K1细胞c-met mRNA及蛋白表达的抑制均较明显;克隆形成实验显示c-met RNAi慢病毒载体能够抑制K1细胞的克隆形成能力;流式细胞术检测显示c-met RNAi慢病毒载体能够减少S细胞比列;划痕实验及Transwell实验显示c-met RNAi慢病毒载体能够抑制细胞迁移和侵袭;裸鼠成瘤实验显示RNA干扰后细胞的成瘤能力降低。结论:c-met RNAi慢病毒载体能够抑制K1细胞的克隆形成能力、细胞周期进程、迁移、侵袭及成瘤能力。

高糖诱导人肾间质成纤维细胞c-met的表达及黄芪对其的调节作用

目的:体外研究高糖对人肾脏间质成纤维细胞c-met表达的影响,并观察黄芪药物血清对其的调节作用。方法:体外培养人肾脏间质成纤维细胞,按培养液不同分为正常对照组、高糖组和甘露醇组。于作用后6、12、24、48和96h,采用逆转录-聚合酶链反应方法检测c-met和转化生长因子β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)mRNA表达,蛋白印迹分析检测c-met蛋白的表达。制备含药血清,将成纤维细胞分高糖组、对照血清组和10%黄芪含药血清组,作用24h和48h后,检测c-met蛋白和mRNA表达情况。结果:与正常对照组比较,高糖组细胞培养12h时c-met mRNA表达增加(P<0.05),24h达高峰(P<0.01),之后表达逐渐下降;高糖组细胞培养24h时,TGF-β1的表达开始增加(P<0.05),96h达到高峰(P<0.01)。与高糖组以及对照血清组比较,黄芪含药血清可使细胞c-met mRNA和蛋白表达增加(P<0.01,P<0.05)。结论:高糖刺激早期诱导c-met表达,之后表达下降。黄芪可以通过诱导c-met表达延缓糖尿病肾病的进展。

c-met基因表达与大肠腺瘤演化与癌变过程相关性的研究

目的:评价大肠腺瘤演化与恶变过程中c-met基因的表达及其临床意义。方法:利用组织微阵列技术检测41例不同阶段的不典型增生的大肠腺瘤、16例早期癌变的大肠腺瘤和56例进展期大肠癌标本中的c-met基因。结果:在大肠腺瘤非不典型增生、轻度不典型增生、中重度不典型增生、早期癌变和进展期癌的演变中,c-met基因的阳性率分别为43.75%、50.0%、66.7%、75.0%和82.1%;过表达率分别为18.8%、10.0%、46.7%、50.0%和66.1%。而且进展期癌c-met基因的阳性率和过表达率均显著高于大肠腺瘤非不典型增生,P<0.01。大肠腺瘤演变程度与c-met阳性表达强度之间的密切关系分析显示,两者显著相关,P=0.011。结论:c-met基因表达与大肠腺瘤演化的程度及恶变相关;大肠腺瘤不典型增生级别越高,c-met基因表达越强。大肠腺瘤早期癌变时c-met基因已呈过表达状态。

MACC1及c-Met在前列腺癌组织中的表达

目的探讨结肠癌转移相关基因1(MACC1)及肝细胞生长因子受体(c-Met)在前列腺癌中的表达及其与前列腺癌发展、浸润和转移的关系。方法采用枸椽酸-微波-SP免疫组织化学染色法检测67例前列腺癌组织及30例前列腺增生(BPH)组织中MACC1和c-Met的表达情况,并结合临床病理因素进行相关分析。结果 MACC1及c-Met表达水平在前列腺癌组织中不同Gleason分级、病理分级、前列腺特异性抗原(PSA)水平及根治术后是否发生骨转移方面差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),而不同年龄,是否吸烟的表达水平差异无统计学意义;且Ⅲ期和Ⅳ期前列腺癌中MACCl的高表达率明显高于BPH(P<0.05),c-Met蛋白高表达率仅在Ⅳ期前列腺癌高于BPH(P<0.05)。前列腺癌中MACC1与c-Met的表达呈正相关(P<0.01)。Kaplan-Meier生存曲线表明前列腺癌组织中MACC1及c-Met高表达较低表达无骨转移生存时间短且生存率低。结论 MACC1和c-Met的异常高表达可能与前列腺癌的发展及浸润密切相关,且预示骨转移的发生,可能成为多种恶性肿瘤判断预后、诱导转移的预测指标。

大黄对硫代乙酰胺致急性肝衰竭大鼠IL-6及c-met蛋白的表达影响

目的:观察大黄对试验性急性肝衰竭大鼠IL-6及c-met蛋白的表达影响。方法:皮下注射硫代乙酰胺(TAA)600mg/kg体重,2次,间隔24h,造成大鼠急性肝衰竭模型,用大黄干预处理。结果:大黄可以使急性肝衰竭大鼠IL-6水平明显降低,c-met蛋白表达增强,改善肝组织病变。结论:大黄减轻TAA致急性肝衰竭大鼠的机理可能与其降低IL-6并增加c-met蛋白表达有关。

自分泌运动因子受体和C-Met蛋白在舌鳞状细胞癌中的表达

目的探讨自分泌运动因子受体(AMFR)、C-Met蛋白在舌鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义。方法采用免疫组化SABC方法检测80例舌鳞状细胞癌组织切片中AMFR、C-Met的表达。结果与正常舌组织相比,AMFR在舌癌中高表达(76.25%),与TNM分期有相关性(P<0.05)。C-Met蛋白的阳性表达率为83.75%,与组织学分化,TNM分期,有无淋巴结转移有相关性(P<0.05)。AMFR和C-Met蛋白的表达呈正相关(P<0.05)。结论舌癌中的AMFR和C-Met蛋白高表达,对于估计舌鳞状细胞癌的生物学特性具有重要的价值,为舌鳞状细胞癌综合治疗的提供一定的理论基础。

胃癌及胃癌前病变中APC、bcl-2和c-met基因的表达及意义

目的:探讨APC、bcl-2和c-met基因在胃癌发生、发展中的作用以及在胃癌早期诊断中的意义。方法:应用免疫组化技术检测APC、bcl-2、c-met蛋白在30例胃癌、30例不典型增生、30例肠上皮化生(肠化)、10例胃腺瘤及20例正常胃黏膜组织中的表达。结果:①APC阳性表达率在肠化、不典型增生、胃癌及胃腺瘤组织中表达率分别为66.7%、53.3%、53.3%和50.0%,与正常胃黏膜组织(90.0%)比较明显降低(P<0.05),其中中重度不典型增生APC表达率(47.1%)低于轻度不典型增生(61.5%)(P<0.05)。APC在无淋巴结转移的胃癌组织中表达率高于有淋巴结转移的胃癌组织(P<0.05)。②bcl-2阳性表达率在胃癌(66.7%)、不典型增生(43.3%)、肠化(40.0%)胃黏膜组织中表达率均明显高于正常对照组(5.0%)和胃腺瘤组(10.0%)(P<0.05);轻度不典型增生组阳性表达率(30.8%)低于胃癌组(P<0.05);中重度不典型增生组(52.9%)与胃癌组比较差异无显著性(P>0.05)。中高分化胃癌组织中bcl-2表达率者高于低分化者(P<0.05),Lauren分型肠型胃癌中表达率高于弥漫型(P<0.05)。③c-met阳性表达率在胃癌(63.3%)、肠化(63.3%)和不典型增生组织(60.0%)均明显高于正常胃黏膜组(10.0%)和胃腺瘤组(10.0%)(P<0.05);中重度不典型增生组阳性表达率(70.6%)明显高于轻度不典型增生组(46.1%)(P<0.05);中重度肠化组阳性表达率(75.0%)明显高于轻度肠化组(55.6%)(P<0.05)。中高分化胃癌c-met阳性表达率高于低分化胃癌(P<0.05),有淋巴结转移者高于无淋巴结转移者(P<0.05)。结论:APC基因的失活、bcl-2和c-met基因的过表达对胃癌的发生、发展起促进作用;对中重度不典型增生胃黏膜进行APC、bcl-2和c-met基因检测有助于胃癌的早期诊断。

原癌基因C-met在子宫内膜癌中的表达的探讨

目的 :本研究通过对子宫内膜腺癌及正常内膜组织中原癌基因C -met表达状况的检测探讨 :正常内膜与内膜癌组织中C -met表达及内膜癌中C -met的表达与临床分期、组织学分级、肌层浸润、年龄、淋巴浸润的关系。研究方法 :采用免疫组化SP法对 5 5例子宫内膜腺癌及 30例正常内膜组织中C -met表达状况进行检测。采用组织化学记分 (H值 )。H值≥ 70为阳性表达。统计处理采用两样本均数t检验 ,多个样本均数间两两比较用q检验 ,偏态分布用秩和检验。结果 :正常子宫内膜中 ,腺上皮有C -met表达 ,主要定位于细胞膜上 ,在细胞浆内也有表达 ,其表达的阳性及强度均较低。C -met在增生期内膜的表达明显强于分泌期宫内膜的表达 ,两者之间有统计学意义 ,P <0 0 5。内膜癌C -met较正常子宫内膜有明显强的表达 ,两者之间有统计学意义 ,P <0 0 5。宫内膜癌中C -met表达随组织学分级和手术 -病理分期的增加而增强 ,P <0 0 5 ;而与年龄、肌层浸润、淋巴浸润无关。结论 :C -met对正常内膜细胞的增生、分化起重要的调节作用 ,同时C -met在宫内膜癌中的表达明显增高 ,推测对肿瘤的发展、预后有关。C

C-met和CD147在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的研究c-met、CD147在肝细胞癌中的表达,探讨两者的表达与肝癌侵袭转移的关系。方法采用免疫组织化学法对62例肝细胞癌手术切除标本中c-met、CD147的表达进行检测,评估c-met的表达与肝细胞癌临床病理因素的关系及与CD147表达的关系。结果 c-met、CD147在肝细胞癌组织中的阳性表达率分别为55%、61%,与正常肝组织比较差异有统计学意义(分别为5%、15%,P<0.01);c-met阳性表达率与肝细胞癌的转移及肿瘤分化有关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤的大小、分期无关;CD147的阳性表达率与肝细胞癌的转移、肿瘤分化及分期有关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤的大小无关;c-met阳性表达与CD147的异常表达有关(P<0.05)。结论在肝细胞癌的转移中,HGF/c-met与肝细胞癌的转移有关,并且与CD147存在联系,可能影响基质金属蛋白酶(MMPs)的表达,对于肝细胞癌的转移防治及预后具有一定的临床意义。

肝细胞生长因子对肺癌细胞运动和侵袭的影响及原癌基因C-met的表达

肝细胞生长因子（ＨＧＦ）可调节许多细胞的运动和生长，检测了ＨＧＦ对５种人类非小细胞肺癌细胞运动和侵袭的作用，有３种细胞的运动和侵袭力在ＨＧＦ刺激后增加。用ＲＮＡ印迹检测ＨＧＦ受体——原癌基因Ｃ－ｍｅｔ产物，可证实这几种细胞均有Ｃ－ｍｅｔｍＲＮＡ存在。细胞蛋白印迹检测进一步证实了ＨＧＦ受体的存在。这些结果表明ＨＧＦ可能在人类非小细胞肺癌的侵袭和转移方面扮演重要角色。

HGF、c-Met及MMP-2在子宫内膜异位症在位内膜的表达及意义

目的:探讨子宫内膜异位症在位内膜肝细胞生长因子(HGF)、其受体(c-Met)及基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达与发病机理的关系。方法:采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法检测45例盆腔子宫内膜异位症患者(内异症组)及30例非子宫内膜异位症妇女(对照组)在位内膜HGF、c-Met与MMP-2的免疫表达水平。结果:内异症组HGF、c-Met与MMP-2表达水平均高于对照组,且差异有显著性(P均<0.01),且两两之间均呈正相关性(P均<0.01)。结论:在位内膜HGF、c-Met、MMP-2的高表达可能与子宫内膜异位症的发病相关。

c-Met基因扩增在非小细胞肺癌表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂耐药机制中的作用

3背景表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor，EGFR）19外显子的缺失突变及21外显子的点突变（L858R）约占酪氨酸激酶区突变的90％。含有这些突变的非小细胞肺癌（non-small cell lungcancer，NSCLC）患者对酪氨酸激酶抑制剂（tyrosine kinase inhibitors，TKI）的敏感性超过75％。不幸的是，这些对TKI治疗有反应的患者最终都会产生继发耐药。研究发现，

C-Met基因转染对喉癌细胞生长的影响

目的初步探讨C-Met基因对喉癌细胞生长的影响。方法设实验组和对照组。实验组以携带C-MetcDNA的重组腺病毒载体Ad-c-Met转染喉癌Hep2细胞,对照组以空腺病毒载体转染喉癌Hep2细胞。转染后,观察两组喉癌Hep2细胞培养12d后的克隆形成率,培养第1、3、5、7天的存活细胞数和培养第7天的细胞周期。结果实验组细胞生长速率高于对照组(P<0.05);实验组克隆形成率(31±5)%高于对照组的(15±3)%(t=12.321,P<0.01);实验组G_0/G_1期细胞比例0.67±0.16,低于对照组的0.79±0.11(t=4.836,P<0.05);S期细胞比例0.19±0.02,高于对照组的0.06±0.01(t=15.357,P<0.01)。结论C-Met参与了喉癌细胞内的TGF-β信号通路,可以阻断TGF-β对喉癌细胞的生长抑制作用。

携带c-Met短发夹结构重组腺相关病毒的包装及滴度测定

目的:包装带有人U6启动子及c-Met短发夹环的重组腺相关病毒,为抑制c-Met的表达及进行肿瘤基因治疗研究奠定基础。方法:通过PCR方法将带有c-Met短发夹结构的片段构建至人U6启动子下游,将U6shMet构建至腺相关病毒载体质粒pSNAV中,将pSNAVUshMet转染BHK细胞,经G418筛选后加辅毒rHSV1-repcap包装成携带U6shMet的重组腺相关病毒。SDS-PAGE电泳分析病毒纯度,斑点杂交测定病毒滴度。结果:获得了2段带有c-Met短发夹结构的片段U6shMet1和U6shMet2,成功包装了2个带有U6shMet序列的重组腺相关病毒rAAVUshMet1和rAAVUshMet2,纯化后的病毒电泳分析条带清晰、杂带少,病毒滴度均为4×1012mg.L-1。结论:成功构建了带有U6shMet的重组腺相关病毒rAAVUshMet,病毒纯度好、滴度高,为抑制c-Met的表达及进行肿瘤基因治疗提供了运载工具。