脑立体定位斜插法在小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞纤维投射研究中的应用

目的 探讨脑立体定位斜插法靶向注射小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶的可行性,并观察该方法对小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞纤维的神经投射。方法 利用脑立体定位直插法(进针方向与水平方向垂直)或斜插法(进针方向与水平方向的垂直线呈30°夹角)标记Pcp2-Cre小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶,对比两种手术方式对小鼠颈部上方肌肉组织的影响;选择梯度剂量(500、300、150 nL)的顺行示踪病毒,探索适宜的病毒注射剂量;通过斜插法在小鼠小脑蚓部第Ⅸ小叶注射重组酶依赖性顺行示踪病毒,观察该小叶浦肯野细胞的传出神经投射。结果 相较于脑立体定位直插法,斜插法中小鼠头部皮肤切口更小,且不易破坏小鼠颈部上方肌肉;在前囟后6.00 mm、中线旁开0.00 mm、深4.08 mm坐标处,采用斜插法能靶向定位到小脑蚓部第Ⅸ小叶;同时,150 nL低剂量的病毒可较好的标记小脑蚓部第Ⅸ小叶浦肯野细胞,且不发生泄漏;通过病毒顺行示踪,在小鼠小脑顶核中间部、前庭小脑核、前庭内侧核巨细胞部以及前庭下核均检测到来自第Ⅸ小叶浦肯野细胞的神经投射纤维。结论 脑立体定位斜插法能在一定程度上减轻手术对小鼠颈部上方肌肉的破坏,通过该方法注射顺行示踪病毒能精确靶向小脑蚓部第Ⅸ小叶,并观察到该小叶浦肯野细胞的传出神经投射。

鸭疫里默氏杆菌Ⅸ型分泌系统分泌蛋白AS87_RS03090的原核表达及其突变株构建

研究发现细菌Ⅸ型分泌系统(T9SS)效应分子的生物学功能具有多样性,它们参与细菌自身的生命活动或与细菌的致病性密切相关。在前期研究中我们发现鸭疫里默氏杆菌T9SS的效应分子大多具有酶活性,可能参与其生命活动或与致病性相关。为探索鸭疫里默氏杆菌T9SS分泌蛋白AS87_RS03090的功能及其与细菌毒力的关系,本研究根据鸭疫里默氏杆菌AS87_RS03090基因序列设计了特异性引物,并在其上、下游引物中分别添加BamHⅠ和SalⅠ酶切位点,将其克隆到pCold TF载体上构建原核表达载体,诱导表达和纯化出鸭疫里默氏杆菌AS87_RS03090重组蛋白(rAS87_RS03090);本研究还利用自然转化的方式成功构建了AS87_RS03090基因突变株Yb2Δ03090。研究结果将有助于进一步鉴定鸭疫里默氏杆菌T9SS在其致病过程中发挥的作用。

Beautiful Flow Plus与FUjiⅨ玻璃离子水门汀在牙颈部楔状缺损治疗中的应用效果比较

目的:比较Beautiful Flow Plus与FUjiⅨ玻璃离子水门汀在牙颈部楔状缺损治疗中的应用效果。方法:选取牙颈部楔状缺损患者198例(567颗患牙),根据修复时充填材料不同将患者分为观察组101例289颗患牙(Beautiful Flow Plus修复治疗)和对照组97例278颗患牙(FUjiⅨ玻璃离子水门汀修复治疗)。比较两组患者治疗后1、2年填充体状态及修复成功率。比较两组患者治疗后2年咀嚼功能、美观度评分。记录治疗期间和治疗后2年内患者不良事件发生情况。结果:两组治疗后1年患牙填充体状态良好率及修复成功率比较差异无统计学意义(均P>0.05)。治疗后2年,观察组色泽协调性良好及无边缘着色的牙齿比例高于对照组(均P<0.05)。两组其余充填体状态良好率及修复成功率比较差异无统计学意义(均P>0.05)。治疗后2年,两组干燥咀嚼物X50数值较治疗前降低,且观察组低于对照组(均P<0.05)。治疗后2年,两组患者和医生美观度评分较治疗前升高,且观察组高于对照组(均P<0.05)。在治疗期间和治疗后2年内,两组不良事件总发生率比较差异无统计学意义(P<0.05)。结论:与FUjiⅨ玻璃离子水门汀比较,Beautiful Flow Plus在牙颈部楔状缺损治疗中具有较好的远期美学效果,且有助于改善患者咀嚼功能。

碳酸酐酶Ⅸ在肝细胞癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系

目的探讨肝细胞癌(HCC)组织中碳酸酐酶Ⅸ(CAIX)的表达情况及其与临床病理特征的关系。方法应用GEPIA数据库分析HCC组织及其配对肝组织中CAIX mRNA表达水平及其对HCC患者预后的影响;收集2021年1月至2023年12月河南中医药大学第一附属医院经病理诊断为HCC的肝脏穿刺及手术标本45例、癌旁正常肝组织37例,用免疫组化法检测标本中CAIX蛋白表达情况,并分析CAIX蛋白表达与HCC患者临床病理特征的关系。结果GEPIA数据库分析发现,HCC组织中CAIX mRNA表达水平明显高于正常肝组织(肿瘤369例,正常肝组织160例;t=8.532,P<0.001),CAIX mRNA高表达组HCC患者总生存期短于CAIX mRNA低表达组(Log-rank P=0.002)。HCC组织中CAIX蛋白阳性率55.56%(25/45),高于正常肝组织的0.00%(0/37)(χ^(2)=29.571,P<0.001)。CAIX蛋白表达与肿瘤分级、肿瘤大小、Ki-67表达、磷脂酰肌醇蛋白多糖-3表达有关(χ^(2)=4.549,P=0.033;χ^(2)=6.790,P=0.009;χ^(2)=4.664,P=0.031;χ^(2)=6.461,P=0.011)。结论CAⅨ蛋白在HCC组织中高表达,可能与HCC的进展及预后差有关,并有望成为潜在的诊断指标和治疗靶点。

20 nm膜过滤人凝血因子Ⅸ工艺研究

目的:优化人凝血因子Ⅸ纳米膜过滤条件,确定最佳过滤工艺。方法:采用Planova 20N对人凝血因子Ⅸ进行过滤,研究离子强度、白蛋白含量、精氨酸含量以及温度对人凝血因子Ⅸ回收率、过滤量和过滤速度的影响。结果:在白蛋白含量2 g/L、精氨酸含量5 g/L、离子强度0.3 mol/L,以及温度为20℃的条件下,20 nm膜过滤人凝血因子Ⅸ的效果最佳。该条件下,4 h过滤总量达到158.58 L/m^(2),平均过滤速度约为39.645 L/(m^(2)·h),人凝血因子Ⅸ效价回收率平均为94.98%。结论:通过优化过滤条件,可得到较高的过滤量和回收率,有利于降低生产成本。

人体血清中原卟啉Ⅸ自体荧光光谱研究

通过对人体血清样品和模拟人体生理条件下原卟啉Ⅸ和牛血清白蛋白混合溶液的荧光光谱测定和分析,表明人体血清中原卟啉Ⅸ的自体荧光光谱主要来自于原卟啉Ⅸ和血清白蛋白的结合形式。此外,还考察了血清白蛋白和原卟啉Ⅸ对原卟啉Ⅸ荧光发射峰的影响。和不含有白蛋白的原卟啉Ⅸ溶液相比较,白蛋白不但使原卟啉Ⅸ产生的荧光峰发生红移,而且具有很强的增敏效应。在白蛋白存在条件下,当原卟啉Ⅸ浓度值小于0.8×10-5mol·L-1时,随着它的浓度增加,原卟啉Ⅸ的荧光发射峰稍有红移;而当原卟啉Ⅸ浓度值大于0.8×10-5mol·L-1时,其荧光发射波长几乎不随原卟啉Ⅸ浓度而变化。

声化学激活原卟啉Ⅸ杀伤艾氏腹水瘤细胞的分子机理

采用频率为2.2MHz、声强为3W/cm2的低强度聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞的损伤进行研究,并初步探讨其作用的生物学机制。分别用荧光分光光度法、激光共聚焦扫描显微镜分析原卟啉Ⅸ在肿瘤细胞内的积聚、定位情况;利用台盼蓝拒染法测定聚焦超声激活原卟啉Ⅸ对细胞存活率的影响;透射电镜观察细胞的超微结构变化;罗丹明123检测线粒体膜电位变化;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-dichlorodihydrofluorescin diacetate,DCFH-DA)检测细胞内活性氧(Reactive oxygen species,ROS)水平;硫代巴比妥酸法检测细胞膜脂质过氧化水平的变化。通过研究发现,艾氏腹水瘤细胞对原卟啉Ⅸ有一定的选择性吸收和留作用,原卟啉Ⅸ主要定位于细胞的线粒体中;在超声结合原卟啉Ⅸ作用下,艾氏腹水瘤细胞的存活率明显下降;细胞的超微结构发生明显损伤;线粒体膜电位下降;ROS生成量显著增加;脂质过氧化水平显著增加。研究结果表明:超声激活原卟啉Ⅸ对艾氏腹水瘤细胞有着明显的协同杀伤效应,其间产生的活性氧自由基作用,降低线粒体膜电位,增加膜的脂质过氧化水平,可能是其损伤艾氏腹水瘤细胞的主要因素之一。

激光诱导荧光光谱中内源性原卟啉Ⅸ对胃癌生长状态的标示作用

用不同的生物治疗方式治疗人胃癌的裸鼠模型,通过测量治疗后的瘤体体积和检查病理组织学的变化,确定了各组胃癌组织中癌细胞的不同坏死程度。应用激光诱导自体荧光光谱系统测量不同坏死程度的胃癌组织的自体荧光光谱。结果发现,随肿瘤坏死程度的加重,自体荧光光谱中内源性原卟啉Ⅸ(Pp Ⅸ)的特征峰值降低,而烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的特征峰未能提示该变化。表明Pp Ⅸ可以作为标识,灵敏地表征胃癌组织的生长状态。

原卟啉Ⅸ-声动力学疗法诱导S180肿瘤细胞的凋亡

采用频率为2.2MHz,声强为3W/cm2的低强度聚焦超声结合原卟啉Ⅸ对S180肿瘤细胞的损伤以及诱导细胞凋亡的发生进行研究,并探讨其作用的分子机制。超声激活原卟啉Ⅸ作用于S180肿瘤细胞处理后,不同时间段取材,通过Annexin V-PI荧光双染观察凋亡细胞的形态学变化;采用TUNEL末端标记法检测细胞凋亡的发生率;利用间接免疫荧光技术和免疫细胞化学技术检测细胞内凋亡相关蛋白Caspase-8、Caspase-3以及死亡底物聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的表达活性变化。实验结果显示:超声激活原卟啉Ⅸ可以诱导S180肿瘤细胞凋亡的发生,并且凋亡细胞的比例随着取材时间的延迟明显增加;免疫细胞化学染色表明声动力学处理显著增强了细胞内Caspase-8和Caspase-3的蛋白表达活性,并且其活化程度分别于处理后1h和3h达到最高,而死亡底物PARP也发生时间相关性剪切。研究表明,超声结合原卟啉Ⅸ可以通过诱导细胞凋亡的方式发挥其抗肿瘤活性,其作用的分子机制可能涉及到膜受体介导的Caspase-8。

应用DNA测序技术检测血友病B患者FⅨ基因突变

为了研究3名中国汉族非亲缘系血友病B患者凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变的类型,常规检测患者血浆APTT及FⅨ∶C,进行表型诊断;抽提患者外周血白细胞基因组DNA,应用PCR技术分8段扩增FⅨ基因外显子序列,用双脱氧终止法检测核酸序列。结果表明:与正常对照者相比,HB患者APTT测定值明显升高,FⅨ∶C测定值明显降低,PT测定值正常。测序结果显示3例HB患者均有相应的基因序列改变,患者1有外显子6G22119A点突变,患者2有外显子1G7932C点突变,患者3有外显子T32685C点突变。结论:3例HB患者均检测到相应的基因序列改变,这为HB患者基因缺陷的分子机制提供了证据。

血红素氧合酶-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ对裸鼠胃癌腹膜转移的抑制作用

背景:前期研究证实血红素氧合酶-1(HO-1)是与人胃癌腹膜高转移细胞株GC9811-P具有亲和力的多肽序列PⅢ的天然配体,两者结合可能抑制胃癌的腹膜转移。目的:探讨HO-1抑制剂锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)对裸鼠胃癌腹膜转移的抑制作用及其可能机制。方法:48只BALB/c裸鼠经GC9811-P胃癌组织块胃壁原位种植建立胃癌腹膜转移模型后随机分为3组,于术后1周起分别予ZnPPⅨ、钴原卟啉(CoPPⅨ,HO-1诱导剂)或铜原卟啉(CuPPⅨ,阴性对照)40μg隔日腹腔注射。术后第23d每组取6只裸鼠处死,测定腹膜转移结节数量、体积、质量和腹水量。其余裸鼠用于存活率实验,于出现明显生命衰竭体征时处死,以免疫组化方法检测腹膜转移瘤中CD31标记的肿瘤微血管密度(MVD),以酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血管内皮生长因子(VEGF)含量。结果:与CoPPⅨ组和CuPPⅨ组相比,ZnPPⅨ组荷瘤裸鼠腹膜转移结节数量、体积、质量和腹水量均显著减低(P<0.05),生存期延长(P<0.01),腹膜转移瘤MVD和VEGF含量降低(P<0.05)。结论:HO-1参与了胃癌腹膜转移的调控,其抑制剂ZnPPⅨ可能通过抑制肿瘤血管发生而抑制裸鼠胃癌腹膜转移。

A-Ⅸ-Ⅱ压装炸药失效模式分析

为了探讨A-Ⅸ-Ⅱ压装炸药的失效模式,通过扫描电镜、工业CT分别对低装药密度、中装药密度和高装药密度A-Ⅸ-Ⅱ炸药装药在高低温循环温度应力施加下的结构稳定性进行分析研究,并讨论了裂纹和"渗油"两种结构失稳模式。研究表明A-Ⅸ-Ⅱ压装炸药的主要失效模式是药柱产生裂纹,"渗油"引起的结构失稳是否会导致装药失效还有待进一步研究。

应用荧光原位杂交检测人凝血因子Ⅸ在转基因小鼠染色体上的整合

应用荧光原位杂交 (FISH)技术检测两个转基因小鼠家系从F1到F4 代的整合情况。阳性转基因小鼠 98%～ 10 0 %的中期分裂相 ,85 %～ 94%的间期核出现杂交信号 ;阴性对照小鼠 10 0 %的中期分裂相、95 %～ 96 %的间期核未出现杂交信号。结果表明 ,该FISH实验条件能对转基因整合位点进行高效特异检测。本文分析的两家系转基因小鼠均为单位点整合 ,但整合位点不同。各家系内F1到F4 代的转基因小鼠均可检出整合染色体 ,且整合位点相同 ,表明外源基因稳定整合并遗传给后代。

椎动脉与Ⅸ～Ⅻ脑神经毗邻关系的解剖及其临床意义

目的观察椎动脉与Ⅸ~Ⅻ脑神经解剖特点及毗邻关系,探讨颈椎病与高血压的相关性。方法颅颈部标本15具,解剖剥离法,观察椎动脉颅内段、小脑下后动脉与Ⅸ~Ⅻ脑神经的关系;椎动脉颅内段与延髓的关系。并测量其数据。结果 (1)椎动脉自穿经硬脑膜处向前内侧斜行,在延髓侧方走行于Ⅸ~Ⅻ脑神经根丝的前方。左右侧椎动脉与Ⅺ,Ⅻ脑神经接触,与Ⅸ,Ⅹ脑神经不接触者分别为11例(11/15,占73.3%)和7例(7/15,占46.7%);(2)左右侧小脑下后动脉与Ⅸ~Ⅻ脑神经不接触者分别为5例(5/15,占33.3%)和1例;(3)左右侧椎动脉位于延髓腹外侧并与延髓相接触者分别为11例(11/15,占73.3%)和4例(4/15占26.7%),不接触者分别为4例(4/15占26.7%)和11例(11/15,占73.3%);相对于左侧,右侧椎动脉位置偏后。模拟颈部屈曲时椎动脉与延髓腹侧紧密接触,伸直时分离。结论椎动脉与Ⅺ,Ⅻ脑神经接触可能是高血压伴发枕后痛的形态学基础之一;小脑下后动脉走行迂曲,与Ⅸ~Ⅻ对脑神经根丝相互盘绕交叉,高血压搏动更易刺激脑神经根丝,出现相应症状。椎动脉和延髓密切接触极可能既产生颈部症状,又可能造成高血压。控制血压除了常规抗高血压药物,神经营养药物也可以用于治疗高血压。

小鼠胚胎干细胞凝血因子Ⅸ基因的定向敲除

目的：将小鼠胚胎干细胞中凝血因子Ⅸ（ｍＦⅨ）基因定向敲除，为建立血友病Ｂ的转基因小鼠模型奠定基础；摸索建立ＥＳ细胞基因打靶技术体系。方法：将线性化的针对小鼠ｍＦⅨ基因组的基因打靶置换型载体（ｐＭＦⅨＤＥＬ）ＤＮＡ用电穿孔法转入小鼠ＥＳ细胞，经过Ｇ４１８和ＧＡＮＣ分组药物选择，用ＰＣＲ和基因组Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交两种方法，鉴定药物抗性细胞中发生同源重组的情况。结果：（１）从药物抗性细胞克隆中鉴定获得了４个发生了按所设计的方式进行了同源重组的ＥＳ细胞克隆；（２）观察到在ＥＳ细胞中，ｐＭＦⅨＤＥＬ载体ＤＮＡ与内源ｍＦⅨ基因发生同源重组的频率平均为１．６７×１０－６。结论：得到了４个ｍＦⅨ基因已被敲除的ＥＳ细胞克隆；建立了ＥＳ细胞基因打靶的技术体系。

我国脑血栓患者家系凝血因子Ⅸ基因SNP9的检测

目的 探讨凝血因子 基因在第六外显子 2 3384- 2 3387bp存在单核苷酸多态性 (SNP9)在我国北方人群脑血栓发病机制中的作用。方法 应用聚合酶链反应 -限制性片断长度多态性 (PCR- RFL P)的方法 ,检测 2 0例脑血栓患者和他们家系及 6 0例正常健康对照组凝血因子 第六外显子 2 3384- 2 3387bp多态性分布。结果 2 0例脑血栓患者和 40例他们的家系成员 ,在 Mn II酶切后 ,可见 30 7bp片断基因类型全部是 A。正常 6 0例健康对照组基因多态性基因型也显示为 A,而在阳性对照可见 A、G和 AG。结论 在这一等位基因位点脑血栓家系和正常人群基因多态性基因型均为 A型。这一位点基因对我国脑血栓患者的作用机制有待于进一步探讨。

锌原卟啉ZnPPⅨ对Bel/FU肝癌耐药细胞株p-糖蛋白及化疗敏感性的影响

目的:评估锌原卟啉(ZnPP)Ⅸ对Bel/FU肝癌耐药细胞株p-糖蛋白(p-glycoprotein,p-GP)的影响,探讨ZnPPⅨ作为化疗耐药逆转剂可能性及相关作用机制。方法:不同浓度的ZnPPⅨ作用于Bel/FU肝癌化疗耐药细胞株,MTT法检测细胞株对化疗药物的半数抑制浓度(IC50)、Western blot检测p-GP表达量、罗丹明潴留试验检测p-GP药物外排功能。结果:ZnPPⅨ作用于Bel/FU细胞诱导24 h后,化疗药物IC50值均显著降低,p-GP表达量明显降低(P均<0.01),p-GP药物外排功能减弱。结论:ZnPPⅨ可通过影响p-GP蛋白质水平的表达,减弱p-GP药物外排功能,使肝癌耐药细胞株的化疗敏感性降低;ZnPPⅨ可作为一种潜在的化疗耐药逆转剂。

人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价检测中影响因素的探讨

目的探讨人凝血酶原复合物(PCC)中凝血因子Ⅸ效价检测的影响因素,优化检测条件。方法研究不同的Ca2+浓度对一期法检测凝血因子Ⅸ效价的影响,并分别考察磷酸三丁酯、聚山梨酯-80(S/D)以及硫酸鱼精蛋白中和肝素对检测的影响。结果 Ca2+浓度为0.012 5 mol/L时,检测结果最稳定,标准曲线的相关性(r2)为0.999±0.001,回收率为(99.2±1.789)%,5次重复试验的变异系数为1.80%;S/D对PCC样品中凝血因子Ⅸ效价检测的影响无统计学意义(P>0.1);PCC样品的肝素未中和时,稀释倍数的影响较大,中和后凝血因子Ⅸ效价受稀释倍数影响较小。结论优化了凝血因子Ⅸ效价检测的影响因素,最优Ca2+离子浓度为0.012 5 mol/L;S/D试剂无影响;硫酸鱼精蛋白中和肝素后,凝血因子Ⅸ效价受稀释倍数影响较小。

批式吸附法制备人凝血因子Ⅸ复合物(英文)

目的 制备纯度较高 ,潜在血栓性小的凝血因子Ⅸ (FⅨ )复合物。方法 以人新鲜冰冻血浆为原料 ,采用SD病毒灭活工艺 ,经国产DEAE SepharoseFastFlow胶批式吸附和Ca3 (PO4) 2 吸附制备凝血因子Ⅸ复合物。结果 两步的活性收率分别为 ( 89.94± 1.31) % (n =7)、( 82 .2 7± 2 .18) % (n =6 ) ,制品的FⅨ∶C比活为 ( 16 .2 8± 2 .80 )IU/mg。FIX的量为 ( 12 6 .82±11.6 0 )IU/瓶 ( 2 0 0PE)。结论 本工艺实用性较高 ,可用于制备低成本 ,高质量的凝血因子Ⅸ复合物。

一种磺胺类碳酸酐酶Ⅸ抑制剂的合成

为发展一种适合18F标记用于CAⅨ检测的特异性PET探针,该文以对氨基苯磺酰胺和三嗪为主要原料,用乙二醇、2-氟乙醇、对甲基苯磺酰氯对三嗪环进行适当修饰,合成了可能具有高亲和力和选择性的CAⅨ抑制剂4-[4-(2-氟乙氧基)-6-(2-羟基乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-亚胺基]苯磺酰胺,用于前期生物学评价和探针放射化学合成的参比化合物,同时合成了用作18F标记的前体化合物4-(4,6-双[2-(4-甲基苯磺酰氧基)乙氧基]-1,3,5-三嗪-2-亚胺基)苯磺酰胺,这两个化合物的收率分别为27.6%和13.1%,可满足下一步放射化学标记的需要。上述工作为进一步发展CAⅨ特异性PET探针建立了基础。