肌苷酸合成酶系PURH基因对苏禽乌骨鸡胸肌肌苷酸含量的关联分析

在分析氨基咪唑氨甲酰核苷酸转甲酰基酶/次黄嘌呤核苷酸环水解酶基因(fused IMP cyclohydrolasegene/phosohoribosylaminoimidazolecarboxamide formyltransferase PURH)对苏禽乌骨鸡鸡群体肌肉肌苷酸含量的遗传效应。采用PCR-SSCP方法检测苏禽乌骨鸡PURH基因外显子9和外显子16多态性,分析多态位点不同基因型与90日龄胸肌肌苷酸(IMP)含量的关联,各种基因型与胸肌IMP含量的方差分析结果表明:PURH基因外显子16中多态位点T17446C与IMP含量显著相关,TT型个体胸肌IMP含量较CT型高出0.757 mg/g,TT型个体胸肌IMP含量较CC型高出1.083 mg/g,均达到极显著水平(P<0.01),CT型个体IMP含量也显著地高于CC型(P<0.05)。因此,可以利用该基因型对鸡的肉质风味性状进行标记辅助选择。

北京油鸡cDNA文库的构建及purH基因的表达

利用SMART技术构建了北京油鸡肝脏全长cDNA文库,构建的未扩增文库滴度为1.96×106pfu·mL-1,文库重组率为92.8%,插入片段长度为1.23kb,扩增文库滴度为1.64×1010pfu·mL-1。设计purH基因保守引物对该文库进行筛选,克隆了北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506),将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-N3-purH,将其导入北京油鸡体外培养细胞中。转染后24、48和72h,pEGFP-N3-purH转染率为10.3%～53.2%,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中。随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。结果表明,构建的北京油鸡肝脏组织cDNA文库符合建库要求。

PurH基因在大蒲莲猪及其杂交后代肌肉中表达及其与肌苷酸含量关联分析

旨在研究PurH基因在大蒲莲及其杂交组合猪肌肉中的表达差异,并与肌苷酸含量进行相关性分析,为探讨肌苷酸代谢基因PurH与重要风味物质的关系奠定理论基础。选择95.0 kg体重大蒲莲猪(DPL)、长白×大蒲莲猪(LDPL)、杜洛克×长白×大蒲莲猪(DLDPL)各8头,屠宰后取背最长肌,提取总RNA。应用荧光定量PCR(qPCR)对11个常用的候选内参基因和PurH基因表达量进行检测,同时利用高效液相色谱测定肌肉中肌苷酸含量。结果表明:(1)geNorm软件评价分析显示,YWHAZ和RPL4是肌肉中表达最稳定的内参基因,可利用其表达量的几何均值标准化PurH基因表达量;(2)肌肉中肌苷酸含量依次为DPL>LDPL>DLDPL,DPL分别比DLDPL和LDPL提高25.35%(P<0.05)和15.93%(P>0.05),DPL、LDPL肌肉中PurH基因表达量分别比DLDPL增加50.00%和25.00%(P<0.05),DPL肌肉中PurH基因表达量比LDPL增加20%(P>0.05);(3)DPL、LDPL、DLDPL背最长肌中肌苷酸含量与PurH基因表达量变化趋势一致。相关性分析发现,肌苷酸含量与PurH基因表达量显著正相关。研究揭示,肌肉中PurH基因mRNA表达量和肌苷酸含量依次为DPL>LDPL>DLDPL,而且PurH基因表达量与肌肉肌苷酸含量呈显著正相关,为培育富含肌苷酸的优质猪肉提供理论支撑。

北京油鸡purH基因结构与表达特征研究

提取北京油鸡8种组织的总RNA,利用RT-PCR检测purH基因mRNA的差异表达。将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-purH,利用脂质体介导法将其导入北京油鸡体外培养细胞中,进行G418药物筛选和克隆化培养。结果表明:北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506)编码区为1782 bp,编码593 aa的多肽,转染后24 h、48 h和72 h,pEGFP-purH转染率在10.3%～53.2%之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状。经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFp-purH融合蛋白的克隆细胞株,RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-purH已整合到北京油鸡成纤维细胞基因组中,在优化的条件下,阳性细胞凋亡率、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P>0.05)。

Analysis of the Genetic Effects of Three Genes Involved in de novo Purine Biosynthesis on IMP Content in Baier Chickens

GPAT,AIRC and purH genes are involved in the de novo purine biosynthesis,and they all had significant effects on muscle inosine monophosphate(IMP) content in chickens.This study was designed to investigate the effects of GPAT,AIRC and purH genes on muscle IMP content in a relatively large population of Baier chickens;single genotype effects as well as the combined genotype effects were analyzed.The results further support that GPAT,AIRC and purH genes had effects on muscle IMP content;they might be candidate loci or linked to major genes affecting muscle IMP content.The combined genotypic effects were significantly higher than those of the single genotypes and were even larger when more gene loci were combined.We tentatively conclude that combined genotypes are superior to single genotypes as potential molecular markers for meat quality traits in chicken.

肌苷酸合成酶系3个基因对白耳鸡胸肌肌苷酸含量的遗传效应

GPAT、AIRC和PURH基因作为肌苷酸合成过程中的酶系基因,它们对鸡肌肉肌苷酸含量均具有显著的效应。为了进一步验证这3个基因对肌苷酸含量的遗传效应,本研究以白耳鸡为试验材料,采用PCR-SSCP和测序相结合的方法,分析了这3个基因的单基因以及合并基因型对鸡胸肌肌苷酸含量的影响。结果表明:GPAT、AIRC和PURH基因均对白耳鸡胸肌肌苷酸含量的差异产生影响,均与鸡肌肉IMP含量存在显著关联(P<0.05),这3个位点可作为影响鸡肌肉肌苷酸含量的分子标记;合并基因型的遗传效应要高于最优秀的单个基因型效应。因此,可以利用合并基因型对鸡的肉质风味性状进行标记辅助选择。

宁乡猪不同杂交组合背最长肌肌苷酸含量与相关基因表达的关联性分析

为了探讨猪肌苷酸含量与相关基因表达的相关性,试验采用高效液相色谱法测定宁乡猪杂交组合杜×宁、巴×宁、巴×巴宁和巴宁×巴宁背最长肌肌苷酸含量,采用实时荧光定量PCR（qPCR）技术检测背最长肌ADSL、GPAT和PURH基因的表达水平。结果表明：巴×宁猪肌苷酸含量显著高于巴×巴宁猪（P〈0.05）;ADSL基因在巴×宁猪中的表达量极显著高于巴×巴宁猪（P〈0.01）,GPAT和PURH基因在巴×宁猪中的表达量均显著高于巴×巴宁猪（P〈0.05）;ADSL和GPAT基因表达量与肌苷酸含量均呈显著正相关（P〈0.05）,PURH基因表达量与肌苷酸含量呈极显著正相关（P〈0.01）。说明ADSL、GPAT和PURH基因与肌苷酸沉积密切相关,可作为猪肉品质的选择依据。