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阳离子交换FPLC二步法制备级纯化单克隆抗体
1
作者
刘智广
陈志南
+2 位作者
刘成刚
米力
徐力青
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
1994年第3期43-50,共8页
作者在快速蛋白液相色谱系统(FPLC)建立的二步法制各级纯化单克隆抗体的方法.是将McAb腹水用pH6.0,10mmol/LPB透析或稀释8倍后,直接上SP-40HRFPLC进行一次纯化,纯化的IgG组分再用40%饱...
作者在快速蛋白液相色谱系统(FPLC)建立的二步法制各级纯化单克隆抗体的方法.是将McAb腹水用pH6.0,10mmol/LPB透析或稀释8倍后,直接上SP-40HRFPLC进行一次纯化,纯化的IgG组分再用40%饱和硫酸铵盐析进行二次纯化和浓缩,即得到McAb纯品。每次上作量80~85ml腹水,可得到纯化抗体600~650mg,得率约为7.3mg/ml腹水,回收率为73%,一次色谱纯化周期仅需50min.用SDS-PAGE法凝胶过滤色谱法和DEAE阴离子交换色谱法检测抗体纯度,一次纯化的McAb大于92%,二次纯化的McAb大于97%。用免疫组织化学ABC测定抗体活性,一次纯化的McAb为1:80000(7.8×10-11mol/L),二次纯化的McAb为1:100000(6.25×10-11mol/L).纯化McAb的热稳定性好,37℃保温144h后抗体活性无明显变化(P>0.05);特异性高,与正常组和其它癌组织几乎无交叉反应。该法操作简单,既具有常压色谱的制备量,又具有HPLC法的纯化速度及分辨率,同时又解决了色谱纯化McAb的浓缩问题,是获得高纯度、高活性IgG类单克隆抗体的实用方法.用本方法提纯?
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关键词
抗体单克隆
纯化
离子交换色谱法
盐析
快速蛋白液相色谱系统
下载PDF
职称材料
题名
阳离子交换FPLC二步法制备级纯化单克隆抗体
1
作者
刘智广
陈志南
刘成刚
米力
徐力青
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
1994年第3期43-50,共8页
基金
国家863课题
文摘
作者在快速蛋白液相色谱系统(FPLC)建立的二步法制各级纯化单克隆抗体的方法.是将McAb腹水用pH6.0,10mmol/LPB透析或稀释8倍后,直接上SP-40HRFPLC进行一次纯化,纯化的IgG组分再用40%饱和硫酸铵盐析进行二次纯化和浓缩,即得到McAb纯品。每次上作量80~85ml腹水,可得到纯化抗体600~650mg,得率约为7.3mg/ml腹水,回收率为73%,一次色谱纯化周期仅需50min.用SDS-PAGE法凝胶过滤色谱法和DEAE阴离子交换色谱法检测抗体纯度,一次纯化的McAb大于92%,二次纯化的McAb大于97%。用免疫组织化学ABC测定抗体活性,一次纯化的McAb为1:80000(7.8×10-11mol/L),二次纯化的McAb为1:100000(6.25×10-11mol/L).纯化McAb的热稳定性好,37℃保温144h后抗体活性无明显变化(P>0.05);特异性高,与正常组和其它癌组织几乎无交叉反应。该法操作简单,既具有常压色谱的制备量,又具有HPLC法的纯化速度及分辨率,同时又解决了色谱纯化McAb的浓缩问题,是获得高纯度、高活性IgG类单克隆抗体的实用方法.用本方法提纯?
关键词
抗体单克隆
纯化
离子交换色谱法
盐析
快速蛋白液相色谱系统
Keywords
antibody
monoclonal
purificanon
liquid chromatograpby
salting-out
ion exchange chromatography
fast protein liquid chromatograghy(FPLC)
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
阳离子交换FPLC二步法制备级纯化单克隆抗体
刘智广
陈志南
刘成刚
米力
徐力青
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
1994
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