疟原虫配子体蛋白Pys48核酸疫苗的构建与免疫活性观测

为探讨约氏疟原虫配子体蛋白Pys48核酸疫苗的免疫效果及其效应，以约氏疟原虫Pys48全基因序列克隆和真核表达载体pcDNA3．1为基础获得核酸重组质粒，肌肉注射免疫BALB／c小鼠，ELISA检测小鼠血清中特异性抗体水平，并通过IFA检测疫苗的免疫活性以及免疫血清对有性阶段虫体发育的阻断效应。测序结果和酶切鉴定均证实构建的质粒为Pys48全基因插入质粒。ELISA结果显示疫苗免疫小鼠血清特异性抗体滴度明显高于对照组；IFA结果显示免疫血清能够明显阻断配子体向合子与动合子的发育，并且其传播阻断效应与免疫血清呈剂量依赖性关系。实验表明，真核表达载体pcDNA3．1表达的Pys48核酸疫苗具有良好的免疫原性，其免疫血清可显著抑制有性阶段原虫的进一步发育。

约氏疟原虫Pys48核酸疫苗传播阻断效应的实验研究

探讨约氏疟原虫(Plasmodium yoelii17XL)Pys48核酸疫苗免疫BALB/c小鼠的特异性抗体产生特点及其效应。将Pys48核酸疫苗肌肉内注射免疫BALB/c小鼠,并以空质粒注射组作为对照,3次免疫后通过P.y17XL攻击小鼠;采用ELISA检测免疫后小鼠血清中特异性抗体水平;通过P.y17XL感染小鼠,取其感染后第3天含有配子体的血液进行体外培养,观察合子、动合子的形成数量。ELISA结果显示疫苗免疫组小鼠血清特异性抗体滴度明显高于对照组;而合子、动合子数量明显低于对照组。提示Pys48核酸疫苗具有良好的免疫原性,免疫小鼠后可以建立起有效的传播阻断效应。

约氏疟原虫Pys48核酸疫苗免疫效应的观察

目的探讨约氏疟原虫(P.yoelii17XL)Pys48核酸疫苗免疫BALB/c小鼠后免疫功能特点。方法将Pys48核酸疫苗肌肉内注射免疫BALB/c小鼠,并以空质粒注射组和正常小鼠作为对照,3次免疫后4w,处死小鼠;采用ELISA分别对疫苗免疫组和对照组小鼠脾细胞上清的IFN-γ、IL-4进行检测;流式细胞术检测脾中树突状细胞(Dendritic cells,DCs)亚群数量,表达TLR9的DCs的百分含量,以及分泌IgG抗体的B细胞百分含量。结果核酸疫苗免疫组IL-4水平较空质粒对照组和正常对照组均明显升高(P<0.05),IFN-γ水平与其它两组相比差异无统计学意义;脾中髓样DCs(mDCs)的数量在3组间无明显差异,浆细胞样DCs(pDCs)的数量在核酸疫苗免疫组出现有意义地升高,且表达TLR9的DCs的百分含量及分泌IgG抗体的B细胞百分含量均明显高于空质粒对照组和正常对照组(P<0.05)。结论 Pys48核酸疫苗具有良好的免疫原性,免疫小鼠后,通过增强特异性体液免疫发挥疫苗效应。

约氏疟原虫Pys25和Pys48抗原的表达与产物活性初步研究

通过家蚕杆状病毒表面展示技术获得约氏疟原虫有性阶段候选抗原Pys25(217AA)和Pys48(455AA),以期建立一种新的鼠疟模型。首先利用大肠杆菌原核表达系统表达这两种抗原,免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,同时利用家蚕杆状病毒表面展示技术,并改造pFastBac Dual载体,在其Ph启动子前端加入哺乳动物启动子CMV,并将目的蛋白基因与杆状病毒囊膜蛋白gp64基因片段融合表达,融合蛋白展示在病毒粒子表面。用其免疫Balb/c小鼠,在小鼠体内,CMV启动子启动融合蛋白表达,共同刺激小鼠产生多克隆抗体。通过间接ELISA检测,两种抗原抗体效价均能达到1∶12 800。本实验为后期免疫阻断效应研究、多时期多价疫苗的构建及鼠疫模型的建立提供了实验基础。